人FoxA1基因重组慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建叉头盒蛋白A1（Forkhead-box A1,Fox A1）的重组慢病毒表达载体,为探究其功能和作用机制奠定基础。方法设计基因引物,采用聚合酶链反应（PCR）扩增出Fox A1的c DNA序列,然后将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经PCR、双酶切反应及DNA测序鉴定,将阳性重组Fox A1表达载体、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91包装质粒共转染到HEK-293T细胞进行病毒包装收集病毒浓缩液,然后再感染293T细胞,通过观察绿色荧光蛋白来计算病毒滴度,最后用病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞（HFFs）,通过实时荧光定量PCR检测Fox A1 m RNA的表达水平。结果重组慢病毒表达载体Fox A1经PCR扩增、酶切及测序鉴定正确,并得到滴度为1×10~8 TU/m L的病毒液,病毒感染人皮肤成纤维细胞后表达显著增强。结论成功构建了人Fox A1重组慢病毒载体,并可在HFFs内高效表达,为后续Fox A1的功能和机理研究奠定了实验基础。

YBX1和FOXA1在胃癌中的表达及其临床病理学意义

目的探究YBX1和FOXA1在胃癌组织中的表达及其与预后的关系。方法选取131例胃癌患者癌组织及其相应癌旁组织。qRT-PCR和免疫组织化学法检测YBX1、FOXA1在胃癌及癌旁组织中的表达水平;Crammer's V系数表示胃癌组织中YBX1与FOXA1蛋白表达的相关性,Pearson法分析YBX1 mRNA与FOXA1 mRNA相关性;Kaplan-Meier法分析胃癌组织YBX1、FOXA1蛋白表达与患者5年总生存率的关系;单因素及多因素Cox回归分析影响胃癌患者预后的因素。结果与癌旁组织相比,癌组织中FOXA1水平降低,YBX1水平升高(P<0.05)。胃癌组织中YBX1 mRNA与FOXA1 mRNA水平负相关(r=-0.675,P<0.05)。YBX1与FOXA1蛋白表达负相关(Crammer's V=-0.497,P<0.001)。胃癌组织中YBX1、FOXA1蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。YBX1阴性表达组和FOXA1阳性表达组5年内存活率分别高于YBX1阳性表达组和FOXA1阴性表达组(均P<0.05)。TNM分期、YBX1是胃癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05),FOXA1是胃癌患者死亡的保护因素(P<0.05)。结论胃癌组织中YBX1高表达、FOXA1低表达,二者与胃癌患者疾病进展及预后有密切联系。