血浆miR-223和Fox03a水平与冠心病及其传统危险因素之间的相关性研究

目的探讨血浆miR-223和FoxO3a水平与冠心病及传统危险因素之间的相关性。方法纳入2019年1月至2019年12月在新疆医科大学第一附属医院住院的冠心病患者126例(冠心病组)和非冠心病患者111例(对照组),两组平均年龄为(66.38±12.12)岁和(49.35±9.60)岁。通过酶联免疫分析法,检测所有研究对象血浆miR-223、FoxO3a的水平,分析miR-223、FoxO3a的水平与冠心病、年龄、血脂、血糖、血常规等指标的关系。结果两组在年龄、合并高血压、HDL-C、空腹血糖、血清胱抑素C、白细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数、血小板平均分布宽度差异具有统计学意义(t=6.954、12.014、2.197、2.996、3.021、2.300、2.577、2.111、3.955,P=0.000、0.001、0.031、0.004、0.030、0.024、0.012、0.038、0.000)。冠心病组miR-223[(0.415±0.065)比(0.309±0.057)]、FoxO3a[(0.402±0.058)比(0.306±0.059)]水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。相关分析研究中,miR-223和FoxO3a水平间呈正相关(r=0.485,P=0.000)。控制年龄变量后,miR-223和FoxO3a水平与冠心病之间仍呈正相关(r=0.388,P=0.000;r=0.506,P=0.000)。通过多重线形回归分析结果显示,冠心病组miR-223和FoxO3a水平的表达量更高,呈正相关。结论冠心病患者中miR-223和FoxO3a水平同时明显升高,呈高表达状态,可能成为冠心病新型生物学标记物。

FGF-2通过Akt—Fox03a信号通路抑制氧化应激诱导的H9c2心肌细胞凋亡

目的探讨FGF-2拮抗氧化应激引起的H9c2心肌细胞凋亡的新途径与机制。方法采用体外培养的H9c2心肌细胞，用MTT法筛选H202诱导细胞凋亡的最佳浓度；用不同浓度的FGF-2与培养的H9c2心肌细胞共同孵育0．5h，

FOXO3a调控线粒体自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型。血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化,HE染色及TUNEL法观察肝组织损伤及细胞凋亡情况,Western blot及q RT-PCR检测各组细胞中转录因子FOXO3a、线粒体自噬相关蛋白Nix蛋白及其mRNA表达水平。培养小鼠肝AML12细胞,用FOXO3a和Nix干扰RNA处理细胞建立缺氧1.5 h复氧6 h的模型,分为siRNA-NC组(加入10μL siRNA空载对照转染细胞)、FOXO3a siRNA组(加入10μL FOXO3a siRNA转染细胞)以及Nix siRNA组(加入10μL Nix siRNA转染细胞)。MTT法检测各组细胞活力,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬体的数量与分布,Western blot检测FOXO3a、Nix、微管相关蛋白LC3、凋亡蛋白P62及Caspase-3的表达情况。结果 IR各组ALT、AST均明显升高,且再灌注6 h时达到峰值(P<0.05)。HE及TUNEL结果示再灌注6 h时小鼠肝组织损伤以及细胞凋亡最严重。IR各组FOXO3a及Nix的mRNA相对表达量均高于Sham组,且再灌注12 h时FOXO3a的mRNA表达量最高,再灌注6 h时Nix的mRNA表达量最高(P<0.05)。Western blot示再灌注12 h时FOXO3a相对表达水平最高,再灌注6 h时Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ相对表达水平最高。干扰FOXO3a的表达后,MTT显示FOXO3a siRNA组细胞存活率降低(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组FOXO3a表达水平高于FOXO3a siRNA组,Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ表达水平明显低于FOXO3a siRNA组(P<0.05)。共聚焦显微镜观察示siRNA-NC组细胞内自噬体的数量低于FOXO3a siRNA组。干扰Nix的表达后,MTT显示Nix siRNA组细胞存活率升高(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组Nix、P62、LC3Ⅱ表达水平高于Nix siRNA组,而FOXO3a表达水平低于Nix siRNA组(P<0.05)。结论 FOXO3a可减轻小鼠肝缺血再灌注损伤,其机制可能与FOXO3a抑制肝细胞线粒体自噬且抑制细胞凋亡有关。

Apelin-13对HT-22细胞凝血酶损伤后自噬机制的调节

目的探讨Apelin-13对于小鼠海马神经元HT-22细胞凝血酶损伤后自噬的调节机制，研究PTEN／Akt／Fox03a信号通路是否参与调控HT-22细胞凝血酶损伤后自噬。方法将牛血浆来源的凝血酶加入离体培养的HT-22细胞中构建细胞损伤模型，将细胞随机分为对照组（c组）、凝血酶处理组（T组）、凝血酶联合Apelin-13处理组（T＋A组），培养9h后进行相关检测。倒置显微镜观察细胞形态，CYTO—ID自噬染色试剂盒检测细胞中自噬泡数目，蛋白免疫印迹实验检测自噬相关蛋白-微管相关蛋白LC3的表达及信号通路相关蛋白FFEN、Akt、P—Akt、Fox03a的表达，并通过免疫荧光观察Fox03a的表达。结果与T组相比，加入Apelin-13后HT-22细胞体积增大，突起增多；自噬体染色荧光强度下降，PTEN表达上调，Akt磷酸化水平下降，Fox03a蛋白表达增加，LC3-Ⅱ／LC3-I比值降低；细胞内Fox03a荧光强度增加。结论Apelin-13通过PTEN／Akt/Fox03a信号通路抑制凝血酶损伤后的HT-22细胞自噬，这可能是Apelin-13对于HT-22细胞凝血酶损伤后细胞保护机制之一。

Foxo3a和p27kip1在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

目的 探讨坐骨神经夹伤后Foxo3a和p27kip1在腰段背根神经节（DRG）中表达变化及其意义.方法 将成年SD大鼠随机分为正常对照组和实验组.对实验组实行坐骨神经夹伤术.运用蛋白质印迹、免疫荧光双标,研究大鼠坐骨神经夹伤后,腰段DRG中Foxo3a和p27kip1的表达、分布以及细胞增殖和轴突再生情况.结果 Foxo3a在坐骨神经夹伤后1 d表达值（7.0±3.5）开始明显下降,2 d表达值（6.0±3.8）达到最低值,随之逐渐升高,p27kip1在坐骨神经夹伤后2 d表达值（29.0±3.5）表达开始明显下降,7 d表达值（21.0±3.0）达到最低值,随之逐渐升高;Foxo3a和p27kip1分布于神经元和神经胶质细胞内且在坐骨神经夹伤后2d DRG中,Foxo3a和p27kip1在神经元细胞[（37.8±5.7）%、（43.3±4.3）%]和神经胶质细胞[（22.4±3.9）%、（13.8±3.2）%]中表达较在正常组神经元细胞[（73.6±2.5）%、（84.1±3.7）%]和神经胶质细胞[（61.3±4.4）%、（68.7±5.6）%]减少;细胞核增殖抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和神经元生长相关蛋白（GAP-43）在坐骨神经夹伤后2 d DRG中表达值[12±2.6,15±1.9]均开始上调,PCNA在7 d表达值（25.0±3.2）达到最高点,GAP-43则保持较高水平;此外,PCNA与神经胶质细胞共定位明显,与神经元细胞几乎无共定位.结论 大鼠坐骨神经损伤后,Foxo3a和p27kip1在腰段DRG中的表达减少与神经胶质细胞增殖和轴突再生密切相关.

FOXO3基因多态性与职业性噪声聋易感性的关系

目的探索FOXO3基因rs12212067位点的单核苷酸多态性与中国汉族人群噪声性耳聋易感性的关联。方法采用病例对照的研究方法，以江苏某大型化纤集团的1066例噪声暴露工人为研究对象，进行问卷调查并收集现场接触资料，同时抽取空腹外周静脉血2ml，根据纯音听力检查结果，将研究对象分为病例组（531人，双耳高频平均听阈〉25dB）和对照组（535人，双耳高频平均听阈≤25dB）。利用TaqMan探针法对FOXO3基因rs12212067位点进行基因分型。结果基因分型结果提示GT＋GG基因型是导致职业性噪声聋发病的危险性因素，调整OR值及其95％可信区间为2．044（1．51～2．78）。对噪声暴露强度分层分析后，噪声强度为≤85、85—92、〉92dB的调整OR值及其95％可信区间分别为2．43（1．52～3．90），2．17（1．03—4．59）和1．74（1．07-2．83）。结论FOXO3基因rs12212067位点的GT＋GG基因型可能是职业性噪声聋发病的危险因素。