环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制研究

目的探讨环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制。方法构建克唑替尼耐药肺癌细胞株H2228/CR。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测circ-FOXM1在BEAS-2B、H2228、H2228/CR细胞中的表达。将H2228细胞分为circ-FOXM1过表达组和过表达对照组。将H2228/CR细胞分为circ-FOXM1沉默组和沉默对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的半抑制浓度(IC_(50))。经克唑替尼干预处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,采用Transwell实验检测各组细胞迁移数,采用Western blot实验检测各组细胞磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)的表达水平。结果H2228/CR细胞circ-FOXM1表达水平高于H2228细胞,H2228细胞circ-FOXM1表达水平高于BEAS-2B细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。克唑替尼对过表达组细胞的IC_(50)显著高于过表达对照组细胞(P<0.05)。克唑替尼对沉默组细胞的IC_(50)显著低于沉默对照组细胞(P<0.05)。经克唑替尼干预处理后,过表达组的细胞凋亡率低于过表达对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均高于过表达对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组的细胞凋亡率高于沉默对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均低于沉默对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论circ-FOXM1可能通过激活PI3K/AKT信号通路降低克唑替尼对肺癌细胞的抑制效果。

转录因子FOXM1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

FOXM1(Forkhead box protein M1)是调控细胞增殖的重要转录因子,近年来研究表明与肿瘤发生密切相关,但与卵巢癌的关系尚不明确.通过检测68例卵巢癌标本、21例卵巢良性肿瘤标本、24例正常卵巢标本以及3株卵巢癌细胞系(A2780细胞、OVCAR3细胞、SKOV3细胞)中FOXM1的表达情况,分析其与临床参数之间的相关性及临床意义.结果显示卵巢癌中FOXM1表达明显高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,差异极为显著,其中低分化细胞中表达强于中高分化细胞(P=0.013),Ⅲ～Ⅳ期表达强于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.011),但与病理类型无关;FOXM1在3株卵巢癌细胞系中均有较强表达.FOXM1在卵巢癌组织及3种卵巢癌细胞系中存在高表达,且与卵巢癌分化程度及临床分期有关.

FoxM1在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨FoxM1蛋白在前列腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化技术检测118例前列腺癌和22例前列腺良性增生组织中FoxM1蛋白的表达,采用SPSS 13.0软件分析FoxM1表达与前列腺癌临床病理特征的关系。结果前列腺癌组织的FoxM1蛋白表达水平显著高于良性前列腺增生组织(P<0.05);FoxM1蛋白的高表达与前列腺癌的T分期、N分期、M分期及Gleason评分显著相关(P<0.05)。结论 FoxM1蛋白的高表达与前列腺癌发生和恶性演进显著相关,有可能成为前列腺癌的肿瘤标志物和新的治疗分子靶点。

微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-149(miR-149)在非小细胞肺癌(NSCLC)中调控细胞增殖和凋亡的相关机制。方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物(mimics)及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照(未转染组)。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况。QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系。结果QPCR检测转染48 h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-149转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为(16.51±2.49)%、(22.90±3.65)%和(31.43±5.27)%,均高于其余两组,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-149转染组转染48 h的凋亡率为(29.17±4.48)%,高于未转染组的(5.34±1.72)%和miR-149对照组的(7.62±1.59)%,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-149转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-149可显著抑制野生型FOXM1-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点。

Array-CGH筛选的FOXM1在乳腺导管内癌的表达和预后价值

目的探讨基于微阵列比较基因组杂交技术(Array-CGH)筛查的FOXM1对乳腺导管内癌(DCIS)预后的预测价值。方法收集DCIS和乳腺浸润性导管癌的石蜡标本共101例,通过免疫组化检测基于ArrayCGH筛查的FOXM1的表达情况,评估FOXM1对预测导管内癌预后的作用。结果免疫组化检测到FOXM1在DCIS的阳性率为59.4%(60/101),其表达在单纯DCIS低于伴有微浸润的DCIS(DCIS-MI)(12.2%vs 31.7%,P=0.032),但与年龄、绝经状态、肿瘤大小、腋窝淋巴结状态、激素受体状态、HER2状态无明显关系。中位随访62个月,全组患者无病生存率为97.0%,总生存率为100%,FOXM1阴性组和FOXM1阳性组的无病生存率差异无统计学意义(97.6%vs 96.7%,P=0.787)。单纯DCIS与DCIS-MI的无病生存率差异无统计学意义(98.7%vs94.7%,P=0.257)。FOXM1阳性组,单纯DCIS与DCIS-MI的无病生存率差异无统计学意义(97.6%vs 94.4%,P=0.523);但FOXM1阴性组,单纯DCIS的无病生存率优于DCIS-MI的无病生存率(100.0%vs 85.7%,P=0.028)。结论 FOXM1的阳性表达率在DCIS-MI高于单纯DCIS,其可能在DCIS发生浸润过程中起作用。FOXM1阴性表达,可能预测DCIS-MI的预后比单纯DCIS差。

FoxM1调节网络——抗癌新靶点

哺乳动物叉头框蛋白M1(forkhead box proteinM1,FoxM1)是叉头框转录因子家族成员之一,它参与正常细胞的增殖。然而研究表明,FoxM1在多种癌症中均呈现过表达的状态,并且与Hanahan和Weinberg所描述的癌症的主要特征有关。据推测,Fox M1的致癌潜力取决于其反式激活的靶基因的能力。此外,Fox M1也可通过与其他蛋白如β-catenin或母亲DPP同源物3 (mothers against decapentaplegic homolog 3,SMAD3)相互作用分别诱导Wnt和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路发挥致癌作用。在本文中我们将阐明FoxM1的蛋白质-蛋白质相互作用是癌症发展的关键,这可能成为抗癌药物的新目标。

微小RNA-320靶向FOXM1调控食管鳞癌放射敏感性的机制研究

目的探讨微小RNA-320(miR-320)对食管鳞癌(ESCC)放射敏感性的影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测正常食管上皮细胞株HEEC和ESCC细胞株KYSE-150、TE-13和Eca-109中miR-320和叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达水平。采用脂质体法将miR-320模拟物(mimics)及其阴性对照(NC)转染至Eca-109细胞,分为转染组和对照组。QPCR和Western blotting检测miR-320 mimics转染后FOXM1的蛋白和mRNA水平以评价miR-320对FOXM1的调控作用。克隆形成实验评价克隆形成能力;免疫荧光实验检测γH2AX荧光焦点数;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法测定细胞凋亡;Western blotting测定XIAP、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-320与FOXM1之间的靶向关系。结果 QPCR检测显示,Eca-109细胞中miR-320相对表达量最低,FOXM1相对表达量最高,故选取该细胞株进行后续实验。转染48 h后,转染组miR-320表达量显著高于对照组;QPCR和Western blotting检测发现转染组FOXM1 mRNA和蛋白水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,转染组Eca-109细胞克隆形成能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染组照射处理后1、6、24 hγH2AX焦点数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。转染组Eca-109细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,转染组Bax和cleaved caspase-3表达增加,XIAP和Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在野生型FOXM1-3’UTR质粒转染细胞中,miR-320 mimics转染组Eca-109细胞的荧光素酶活性明显低于对照组(P<0.05);而在突变型质粒转染细胞中,两组细胞的荧光素酶活性的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-320能增强ESCC细胞放射敏感性,可能与靶向抑制FOXM1表达有关。

基于GSEA分析FoxM1表达变化对人肝内胆管细胞癌增殖及侵袭相关信号通路的影响

目的通过比较分析FoxM1表达高低对肝内胆管细胞癌(ICC)中增殖及侵袭相关细胞信号通路的影响,进而部分揭示其发生发展分子机制。方法从TCGA数据库下载36例ICC患者的mRNA数据,按照总体叉头盒蛋白M1(FoxM1)表达值中位数将其分为FoxM1高表达组、FoxM1低表达组,使用基因集富集分析(GSEA)软件进行生物信息学分析寻找FoxM1高低表达组之间可能存在的差异表达基因及影响的相关信号通路。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)比较ICC细胞系中FoxM1及P53 mRNA的表达关系。结果GSEA分析表明,ICC中FoxM1高表达组中常见基因信号通路如P53、MYC信号通路表达差异均有统计学意义,而FoxM1低表达组中FOXO等信号通路表达差异有统计学意义(均FDR-q值<0.250)。RT-PCR结果显示,慢病毒转染后上调FoxM1表达的HCCC-9810-FoxM1细胞组中P53 mRNA表达较对照组升高,而下调FoxM1表达的SSP-25-shFoxM1细胞组中P53 mRNA水平较对照组则下降,差异均有统计学意义(P<0.0001)。结论FoxM1可能在ICC发生发展等不同演进阶段产生广泛作用。FoxM1表达可能与P53相关,ICC中FoxM1可能影响P53信号通路。

叉头框蛋白M1在脑胶质瘤中作用的研究进展

胶质瘤是成人中枢神经系统中最常见的原发性肿瘤。叉头框蛋白M1(FOXM1)是叉头框转录因子家族的成员之一,其可通过调控Wnt/β-catenin、Akt/FOXM1、p53通路及其自身的翻译后修饰过程促进神经胶质瘤的恶性增殖、迁移和侵袭等过程。本文总结叉头框蛋白M1在脑胶质瘤中的作用,以期为临床脑胶质瘤的治疗提供新的理论依据和治疗靶标。

短发卡RNA稳定沉默FOXM1对肝癌细胞体外生长的影响

目的探讨短发夹RNA（short hairpinRNA，shRNA）表达载体稳定沉默叉头框M1（forkheadboxM1，FOXMl）基因对人肝癌细胞体外生长的影响。方法构建针对人类FOXMlmRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体，选择干扰效果最佳的表达载体和阴性对照质粒转染人肝癌细胞QGY-7703，用新霉素（G418）筛选稳定转染的克隆。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和平板克隆形成实验检测FOXMl基因沉默前后肝癌细胞体外生长能力的变化。用AnnexinV—APC／PI双染法检测细胞凋亡。结果不同人肝癌细胞株中普遍表达FOXM1蛋白。4个shRNA表达载体中，shRNA-1026表达载体的干扰效果最佳，对FOXM1mRNA和蛋白表达水平的抑制率分别为38．5％和53．2％。用shRNA-1026稳定沉默FOXM1基因后，QGY-7703细胞增殖受到抑制，培养48、72和96h后，沉默组的吸光值均显著低于对照组（分别t=10．830，3．578，5．734，均P〈0．05）；沉默组的克隆形成能力较对照组显著降低（t：5．336，P〈0．05），而细胞凋亡较对照组显著增加（t=6．827，P〈0．05）。结论shRNA表达载体稳定沉默FOXM1基因抑制肝癌细胞的生长。

FoxM1、Cep55蛋白在基底细胞样型乳腺癌中的表达及临床意义

【摘要】目的探讨FoxM1和Cep55蛋白在基底细胞样型乳腺癌（BLBC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测66例BLBC及其癌旁正常乳腺组织、70例非BLBC组织中FoxM1和Cep55蛋白的表达情况及二者间的关系。结果BLBC、非BLBC及癌旁正常乳腺组织中FoxMl蛋白阳性表达率分别为77．3％（51／66）、60．0％（42／70）和13．6％（9／66），Cep55蛋白阳性表达率分别为74．2％（49／66）、57．1％（40／70）和16．7％（11／66），BLBC和非BLBC组织均明显高于癌旁正常乳腺组织，BLBC组织明显高于非BLBC组织，差异均有统计学意义（P〈0．05）。BLBC组织中FoxMl和Cep55蛋白阳性表达与腋窝淋巴结转移及TNM分期有关，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而与年龄、绝经情况、肿瘤大小无关，差异均无统计学意义（P〉0．05）。Spearman相关分析结果显示，BLBC组织中FoxM1蛋白与Cep55蛋白表达呈正相关（r=0．259，P〈0．05）。结论FoxMl和Cep55蛋白可能参与了BLBC的发生、发展，并且FoxMl和Cep55蛋白可能有一定的协同作用。

FoxM1、c-myc蛋白在基底细胞样型乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨FoxM1和c-myc蛋白在基底细胞样型乳腺癌（BLBC）、非基底细胞样型乳腺癌（non-BLBC）及癌旁正常乳腺组织中的表达情况及二者之间的相互关系.方法 采用免疫组织化学法检测66例BLBC及其癌旁正常乳腺组织、70例non-BLBC组织FoxM1和c-myc蛋白的表达情况,采用Spearman相关分析法分析其与病理临床特征的关系.结果 BLBC、non-BLBC及癌旁正常乳腺组织中FoxM1蛋白阳性表达率分别为77.3％（51/66）、60.0％（42/70）和13.6％（9/66）,c-myc蛋白阳性表达率分别为71.2％（47/66）、54.3％（38/70）和22.7％（15/66）,FoxM1和c-myc蛋白在BLBC和non-BLBC组织中表达率均明显高于癌旁正常乳腺组织,且在BLBC组织中的表达明显高于non-BLBC组织,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.在BLBC中FoxM1和c-myc蛋白表达呈正相关（r=0.294,P＜ 0.05）,且FoxM1和c-myc蛋白的表达与BLBC淋巴结转移及临床分期有关（P＜0.05）.结论 FoxM1和c-myc蛋白参与了BLBC的发生、发展,并且FoxM1和c-myc蛋白有一定的协同作用.

FoxM1蛋白在宫颈癌的表达及临床意义的meta分析

目的系统评价叉头框蛋白M1(FoxM1)在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法计算机检索PubMed、CBM、Cochrane Library、万方、知网、维普等数据库,收集已公开发表的关于宫颈癌组织中FoxM1蛋白表达及其临床病理特征相关的病例随机对照研究,时间为建库起至2020年7月。根据纳入和排除标准筛选文献,应用RevMan5.3软件进行meta分析。结果最终纳入19篇文献,共2781例受试者,其中宫颈癌患者1446例,宫颈上皮内瘤变(CIN)患者403例,正常宫颈妇女932例。meta分析结果显示:宫颈癌组中FoxM1蛋白表达明显高于正常宫颈组和CIN组,差异均有统计学意义(P<0.001);CIN组的FoxM1蛋白表达明显高于正常宫颈组,差异有统计学意义(P<0.001);FoxM1蛋白高表达与更高淋巴结转移率(P<0.001)、更低分化程度(P<0.001)和更深肌层浸润(P<0.001)有关,而与年龄(P=0.150)和病理类型(鳞癌或腺癌,P=0.290)无关。结论FoxM1蛋白参与宫颈癌的发生、发展,可以作为预测宫颈肿瘤进展的有效标志及宫颈癌治疗的有效靶点。