干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力

背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠(中山大学实验动物中心提供)骨髓间充质干细胞,构建含嘌呤霉素抗性基因的foxM1 shRNA重组慢病毒载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选建立foxM1稳定敲低细胞株,另设置空病毒载体组以及未转染组。使用骨髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基诱导培养并行茜素红染色检测其成骨分化能力,使用定量RT-PCR检测成骨相关基因的表达水平,同时提取胞核蛋白,Western blot检测β-catenin蛋白表达水平。结果与结论:(1)与空病毒载体组以及未转染组比较,foxM1敲低的大鼠骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化后形成的骨结节数量明显增多,成骨相关基因col1a1和runx2表达水平均显著升高,但胞核β-catenin蛋白水平无明显改变;(2)干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨能力。

抑制FoxM1基因表达对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞糖酵解途径的影响

目的探讨抑制FoxM1基因表达对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞葡萄糖摄取和乳酸产量的影响及FoxM1与PTC细胞糖酵解途径的相关性。方法用慢病毒rLv-hFoxM1转染PTC TPC-1细胞,检测转染后的TPC-1细胞中Fox M1 mRNA及蛋白表达水平的变化;应用噻唑蓝(MTT)比色法检测抑制FoxM1基因对TPC-1细胞活性的影响;检测转染慢病毒rLv-hFoxM1后的TPC-1细胞在葡萄糖摄取量和乳酸产量方面的变化以及糖酵解途径关键酶己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2),葡萄糖转运体蛋白1(Glut1)含量的变化。结果在TPC-1细胞中,慢病毒rLv-hFoxM1转染可明显抑制TPC-1细胞中FoxM1基因mRNA及蛋白水平的表达,且转染慢病毒rLv-hFoxM1后TPC-1细胞的活性明显下降(P<0.05),随着FoxM1基因表达降低,TPC-1细胞的葡萄糖摄取量及乳酸产量均明显下降(P<0.01),抑制FoxM1基因后,其葡萄糖转运蛋白(Glut1)、己糖激酶1(HK1)和己糖激酶(HK2)含量明显降低。结论抑制FoxM1基因的表达能降低PTC细胞的糖酵解水平。

调控FOXM1基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响

目的探究调控叉头框转录因子M1(FOXM1)基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响。方法将FOXM1过表达及特异性靶向FOXM1基因的小干扰RNA(FOXM1-siRNA)转染至乳腺癌BT474细胞,将细胞分为上调FOXM1基因组、下调FOXM1基因组和对照组。Western blot检测FOXM1蛋白以及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。MTT法检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞迁移、侵袭能力的影响。结果下调FOXM1基因后,FOXM1蛋白的相对表达量明显减少(P<0.05)。上调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著高于对照组,且随着赫赛汀浓度的增加其增殖率、迁移数量、侵袭数量逐渐增加,上调FOXM1基因可增强BT474细胞对赫赛汀的耐药性,促进增殖、迁移及侵袭。下调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于对照组,低浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制程度较弱,高浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制过度,而中浓度的赫赛汀抑制能力介于低、高浓度之间,能够有效抑制BT474细胞增殖、迁移及侵袭,但无抑制过度的表现。不同赫赛汀浓度下下调FOXM1基因组细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于上调FOXM1基因组。下调FOXM1基因组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量均低于对照组和上调FOXM1基因组(P<0.05)。结论上调FOXM1基因可增强乳腺癌BT474细胞对赫赛汀的耐药性,下调FOXM1基因在中浓度赫赛汀的干预下,可通过作用于PI3K/AKT信号通路,抑制乳腺癌BT474细胞的增殖、迁移及侵袭,从而抑制乳腺癌的发展。

FoxM1基因与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的：探讨Fox M1基因与妊娠期糖尿病（GDM）的相关性。方法：选取东莞市石碣医院2015年1月至2016年6月收治的GDM孕妇和正常孕妇各100例,分别记为GDM组和正常组,分别测定两组孕妇妊娠24~28周、34~36周以及分娩后的6~24 h空腹血糖、糖化血红蛋白、胎盘催乳素以及空腹胰岛素、Fox M1 m RNA和Fox M1蛋白表达水平,此外GDM组患者还需在经过治疗后血糖正常且稳定1周后采集空腹血液标本测定上述指标,比较两组孕产妇上述指标的差别。结果：GDM组孕妇治疗前和治疗后空腹血糖和糖化血红蛋白均高于正常组,空腹胰岛素则低于正常组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）,两组孕妇不同时期催乳素水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。正常组孕妇Fox M1 m RNA和Fox M1蛋白表达水平均高于GDM组,对比具有统计学意义（P〈0.05）。结论：Fox M1 m RNA和Fox M1蛋白的低表达与孕妇GDM具有相关性,可以作为GDM患者的早期诊断标志物和治疗分子靶点。

FOXM1基因在卵巢癌中的表达及紫杉醇对其表达的作用

目的探究紫杉醇对卵巢癌治疗效果以及对相关基因FOXM1表达影响。方法通过荧光定量PCR,Western blot方法从RNA以及蛋白质水平分别对卵巢癌患者卵巢标本(卵巢癌组)及因其他原因而行卵巢切除的卵巢标本(对照组)中FOXM1基因的表达进行测定,同时运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测二者血清中FOXM1蛋白含量及卵巢癌患者服用紫杉醇后不同时间段(1、2、3、4、5、6月)血清FOXM1含量变化。结果卵巢癌患者卵巢中FOXM1基因在mRNA以及蛋白水平的表达量、血清中FOXM1含量均显著高于对照组(P<0.05);与治疗前相比,卵巢癌患者服用紫杉醇后血清中FOXM1含量随治疗时间的延长逐步降低(P<0.05),但治疗6个月后,仍显著高于对照组(P<0.05)。结论 FOXM1基因与卵巢癌发病之间存在密切关系,服用紫杉醇可以降低患者体内FOXM1基因表达量。

FoxM1基因表达与甲状腺乳头状癌TPC-1细胞活性及侵袭性关系的研究

目的 研究FoxM1基因表达水平对甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）细胞活性和侵袭性有无影响,探讨FoxM1与PTC疾病的相关性.方法 分别用hFoxM1-RNA干扰和硫链丝菌素处理PTC TPC-1细胞,观察处理后的癌细胞与未经处理的癌细胞在细胞活性、侵袭能力、迁移能力方面的变化,并使用Real-time PCR检测各组细胞中FoxM1基因的表达水平,观察硫链丝菌素对FoxM1基因表达水平的影响.结果 在TPC-1细胞中,使用hFoxM 1-RNA干扰和硫链丝菌素处理均能使细胞活性明显下降（P＜0.05）,用2种方法处理后,细胞侵袭能力分别降低了约29.2％及38.63％,细胞迁移能力分别降低了约46.0％及47.5％,且PCR结果表明,hFoxM1-RNA干扰和硫链丝菌素处理均明显抑制TPC-1细胞中FoxM1基因mRNA的表达,分别抑制55％及38％.结论 FoxM1能促进PTC细胞的侵袭转移,其作为潜在的肿瘤标志物值得关注,而硫链丝菌素能抑制肿瘤细胞中FoxM1的表达.

妊娠期糖尿病孕妇中FoxM1基因的表达及其与胰岛素的关系

目的探讨妊娠期糖尿病孕妇中FoxM1基因表达变化以及与胰岛素的关系。方法选择东莞市石碣医院产科门诊行产检的GDM孕妇、正常孕妇各100例作为研究对象,分别为研究组和对照组,采用放射免疫法检测两组孕妇血清胰岛素水平,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组孕妇血液中FoxM1基因表达。结果确诊GDM时,研究组孕妇的血清胰岛素表达水平明显高于对照组孕妇(t=12.22,P<0.05);分娩后6 h,两组孕妇的血清胰岛素表达水平均下降,研究组孕妇的血清胰岛素表达水平仍明显高于对照组孕妇(t=13.67,P<0.05)。确诊GDM时,研究组孕妇血液FoxM1 mRNA表达水平(2.38±0.45)明显高于对照组孕妇(1.25±0.37)(t=19.40,P<0.05);分娩后6 h,两组孕妇血液FoxM1 mRNA表达水平均下降,研究组孕妇的血液FoxM1 mRNA表达水平(1.39±0.27)仍明显高于对照组孕妇(0.74±0.16)(t=20.71,P<0.05)。研究组孕妇血清胰岛素表达水平与其血液FoxM1基因表达呈正相关(r=0.56,P<0.05)。结论 FoxM1基因参与了GDM发病机制,且其表达与GDM孕妇血清胰岛素表达水平呈正相关。

人类Foxm1b基因的原核表达、抗体制备及其对肝癌细胞中Foxm1b蛋白的识别

【目的】构建人类Foxm1b基因的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体,并用此抗体检测肝癌细胞中Foxm1b基因的表达,为进一步研究Foxm1b基因的功能奠定基础。【方法】从GenBank中下载人类Foxm1b基因全长cDNA序列并用Pcgene软件分析其可能的抗原表位,设计引物,应用RT-PCR获得含抗原表位的Foxm1b基因片段,重组入原核表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,应用亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白并免疫大鼠制备多克隆抗体,用ELISA检测抗体滴度并用免疫细胞化学的方法检测此抗体对肝癌细胞中天然Foxm1b蛋白的识别。【结果】成功构建了Foxm1b基因重组表达载体pET-28a-Foxm1b,表达的蛋白经纯化后免疫大鼠得到了高滴度的多克隆抗体,该抗体可以识别肝癌细胞中的天然抗原。【结论】人类Foxm1b基因的原核表达载体的构建、重组蛋白的表达纯化及有诊断价值的抗体的制备为后续的研究提供了基础。

妊娠期糖尿病患者外周血Sfrp5、FoxM1水平与胰岛素抵抗的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清分泌型卷曲相关蛋白5(Sfrp5)、血浆Fox基因家族成员FoxM1水平与胰岛素抵抗的关系。方法选择GDM患者56例(GDM组)及正常产妇56例(对照组),采集空腹静脉血检测空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分别采用ELFSA法和实时荧光PCR法检测血清Sfrp5水平及血浆FoxM1 mRNA水平,并分析其与HOMA-IR的相关性。结果 GDM组血清FPG、FINS、HOMA-IR和血浆FoxM1 mRNA水平均高于对照组(P均<0.05),GDM组血清Sfrp5水平低于对照组(P<0.05)。GDM患者HOMA-IR与血清Sfrp5水平呈负相关(r=-0.571,P<0.01),与血浆FoxM1 mRNA水平呈正相关(r=0.613,P<0.01)。结论 GDM患者血清Sfrp5水平降低且与胰岛素抵抗呈负相关,血浆FoxM1水平增加且与胰岛素抵抗呈正相关。

LPS诱导人肾小球系膜细胞FoxM1B分子表达的研究

目的:探讨脂多糖(LPS)对系膜细胞FoxM1B表达的影响。方法:体外培养系膜细胞,分别用LPS(10Pg/mI)处理12、24、48h,利用MTT检测系膜细胞增殖、Real-Time PCR及Western blot观察细胞FoxM1BmRNA及蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,在12、24、48h时间段,10Pg/mL的LPS能明显促进人肾小球系膜细胞增殖;静息状态的系膜细胞表达FoxM1BmRNA及蛋白极其微量,LPS(10pg/mL)可诱导系膜细胞显著表达FoxM1B。结论:LPS诱导人肾小球系膜细胞增生的机制可能与FoxM1B表达增加相关。