FOXM1转录因子的研究进展

Forkhead box(Fox)蛋白是一个转录因子家族,在1989年被首次发现, 其所有成员共享一个由110个氨基酸组成的DNA结合域,称为“叉头盒”或“有翼螺旋”结构域,因此又称为FOX 家族。FOX转录因子家族是人类已知的最大的转录因子家族,根据它们的序列相似性被分为19个亚家族(FOXA-FOXS),其中FOXM1是FOX转录因子家族的另一个亚家族,在细胞周期阶段的所有过渡阶段发挥着关键性调节作用。

转录因子FoxM1与颅内胶质瘤治疗的研究进展

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,高级别胶质瘤具有高度侵袭性,术后复发快,并对放疗和化疗表现出内在抗性,患者预后不佳[1]。尽管临床医生不断探索和革新手术切除以及化学治疗和放射治疗方案,在一定程度上提高了患者术后生活质量,但一般的抗肿瘤药物,由于难以通过血脑屏障等因素的影响,治疗的效果欠佳,寻找到一个能有效治疗胶质瘤的药物就成为了研究的关键。

利用双萤光素酶报告系统研究FoxM1转录活性调控

目的:构建细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)启动子萤光素酶报告系统,用于转录因子FoxM1转录活性调控研究。方法:利用瞬时转染、实时荧光定量PCR及Western印迹,验证人胚肾HEK293细胞中FoxM1对Cyclin B1 mRNA的转录及蛋白表达的调节作用;利用PCR技术从人宫颈癌HeLa细胞基因组中钓取人源Cyclin B1的启动子序列,克隆至pGL3-Basic Vector中,构建含有Cyclin B1启动子的萤火虫萤光素酶报告质粒pGL3-Cyclin B1;通过瞬时转染、Western印迹及萤火虫/海肾萤光素酶双报告系统,研究c-Abl酪氨酸激酶对FoxM1转录活性的调控作用。结果:构建了Cyclin B1萤火虫萤光素酶报告系统,该报告系统可用于FoxM1转录活性研究;c-Abl酪氨酸激酶能够显著抑制FoxM1靶向Cyclin B1启动子的转录活性,且抑制作用依赖c-Abl的激酶活性。结论:pGL3-Cyclin B1萤光素酶报告系统可用于研究c-Abl酪氨酸激酶介导的FoxM1转录活性调节。

FoxM1与胶质瘤的研究进展

FoxM1是Forkhead Box(Fox)转录因子家族的成员之一。近年来研究发现,FoxM1在脑胶质瘤的发生和发展中起着重要的作用。研究表明,人脑胶质瘤组织中FoxM1的表达明显高于正常脑组织,并且其表达水平与胶质瘤等级相关。同时,FoxM1信号途径参与调节细胞分化、增殖、凋亡、血管生成及维持干细胞自我更新等生理过程,并与多种致瘤信号途径有关。通过下调FoxM1的表达,可以抑制胶质瘤细胞的增殖、分化等生物学行为。因此,FoxM1的靶向治疗将为胶质瘤药物研发治疗提供一个潜在的新的作用靶点。

人肝癌细胞株中FOXM1及NF-κB的表达及意义

目的探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1(Forkhead Box M1)及核转录因子NF-κB(Nuclear factor kappa B)的表达强度及意义。方法采用Western blot、RT-PCR法,检测不同肝癌细胞株(QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721)中FOXM1及NF-κB在蛋白及mRNA水平的表达情况。结果在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平差异均有统计学意义,细胞株(QGY-7703、BEL-7402)中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721。结论肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致,提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关。

宫颈癌组织中FoxM1及下游相关靶分子表达量的探究

目的:研究宫颈癌组织中叉头框转录因子M1(FoxM1)及下游相关靶分子的表达量。方法:收集宫颈癌组织和正常宫颈组织,测定FoxM1、增殖相关基因细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)6、CDK8及血管新生相关基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)A、VEGFB、VEGFC的表达量;培养Hela细胞,转染FoxM1的siRNA后测定CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的表达量。结果:宫颈癌组织中FoxM1、CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的mRNA含量显著高于正常宫颈组织(P<0.05);FoxM1的mRNA含量与CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的mRNA含量呈正相关(P<0.05);FoxM1-siRNA组细胞中CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的mRNA含量显著低于阴性对照-siRNA组(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中FoxM1的表达量异常升高,其下游靶基因包括CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC。

FOXM1_(688-748)结构域相互作用蛋白的鉴定

为了鉴定转录因子FOXM1转录激活结构域(C-端第688位到748位氨基酸序列)的互作蛋白,以FOXM1的cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法扩增获得其转录激活结构域序列,克隆进入原核表达载体pGEX-4T2;利用大肠杆菌原核表达获得融合谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-Transferase,GST)标签的重组蛋白GST-FOXM1_(688-748);通过GST-pulldown结合质谱方法鉴定FOXM1_(688-748)的互作蛋白,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T2-FOXM1_(688-748),获得了原核表达的重组蛋白GST-FOXM1_(688-748).将质谱鉴定获得的互作蛋白进行分析和归类,预示一些互作蛋白可以参与激活FOXM1的转录活性,如RPN2、MISP、MCM7蛋白,一些互作蛋白可以参与调控FOXM1蛋白的稳定性,如USP9Y、CUL4A、HSPB1、BAG2蛋白.FOXM1蛋白的转录激活结构域与许多不同功能的蛋白发生相互作用,暗示该结构域具有重要的分子生物学作用,期望为以FOXM1为靶点的临床药物研发提供实验依据.

食管鳞状细胞癌组织中FOXM1和HIF-1α的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中叉头框转录因子M1(forkhead box transcription factor M1,FOXM1)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集我院2017年06月至2018年07月收治的60例食管鳞状细胞癌患者的肿瘤组织及临床资料。采用免疫组织化学染色法检测FOXM1和HIF-1α蛋白在60例食管鳞状细胞癌组织、配对的癌旁正常组织中的表达;根据HIF-1α高/低表达、FOXM1高/低表达、HIF-1α及FOXM1共表达与否将其分为三种表达方式,分析FOXM1和HIF-1α表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:FOXM1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率[68.33%(41/60)]显著高于远端正常食管组织[11.67%(7/60)](χ^(2)=40.139,P<0.001);HIF-1α蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率[73.33%(44/60)]显著高于远端正常食管组织[6.67%(4/60)](χ^(2)=51.164,P<0.001);FOXM1的表达与HIF-1α的表达呈显著正相关(r=0.319,P=0.013)。FOXM1和HIF-1α阳性共表达与食管鳞状细胞癌的浸润深度(T期)有关(P<0.05)。FOXM1和HIF-1α阳性表达的食管鳞状细胞癌患者的总生存期(overall survival,OS)和无病生存期(disease-free survival,DFS)明显低于阴性表达者(P<0.05),且FOXM1和HIF-1α阳性共表达的食管鳞状细胞癌患者的生存期最短(P<0.05)。结论:FOXM1、HIF-1α的阳性表达与食管鳞状细胞癌密切相关,FOXM1和HIF-1α的联合检测可作为食管鳞状细胞癌患者预后预测的指标及潜在的治疗靶点。

转录因子FoxM1在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨转录因子FoxM1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达及其临床意义。方法:应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测FoxM1蛋白在83例ccRCC和30例癌旁肾组织中的表达;应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测FoxM1mRNA在30例ccRCC和对应的癌旁肾组织中的表达,分析其与ccRCC患者临床病理特征及预后的关系。结果:FoxMl蛋白在ccRCC组织和癌旁肾组织中的阳性表达率分别为79.5%(66/83)和10.0%(3/30),差异有统计学意义(P<0.001)。FoxM1蛋白表达与ccRCC患者的年龄、性别无关(P>0.05),而与原发肿瘤T分期(P<0.001)、组织学分级(P<0.001)、淋巴结转移(P<0.001)、远处转移(P=0.001)和TNM分期(P<0.001)相关。RT-PCR结果显示FoxM1mRNA在ccRCC和癌旁组织中的相对表达量分别为0.652±0.026和0.327±0.043,差异有统计学意义(P<0.05)。FoxM1mRNA表达与ccRCC患者原发肿瘤T分期(P<0.001)、组织学分级(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.006)、远处转移(P=0.005)和TNM分期(P<0.001)有关。Kaplan-Meier生存分析显示,FoxM1蛋白高表达组患者的总生存时间短于低表达组患者,差异有显著统计学意义(Log-rank=46.117,P<0.001)。Cox多因素风险比例模型显示,原发肿瘤T分期(P=0.009)、远处转移(P=0.006)和FoxM1表达情况(P=0.001)是影响ccRCC患者预后的独立因素。结论:FoxM1在ccRCC组织中高表达,可能与ccRCC的进展有关;其表达状态是ccRCC患者独立预后因素。

肿瘤抗原肽M1-10的抑瘤活性研究

基于生物信息学分析筛选出一段源于转录因子FOXM1的肿瘤抗原肽M1-10。通过淋巴细胞增殖、干扰素γ释放及细胞杀伤等试验,证实M1-10肽段可在小鼠体内诱导有效的免疫记忆,与HJURP、MELK、VEGFR1、VEGFR2来源的四种抗原肽联用可产生更好的效果。运用小鼠乳腺癌移植瘤模型和MMTV-PyMT原发乳腺癌模型开展M1-10单独或联合四种抗原肽的肿瘤预免疫试验,发现M1-10单独使用可发挥显著的抑瘤效果,联合四种抗原肽的抑瘤效果更强。总之,本研究开发了一种肿瘤抗原肽,该肽免疫原性强,单独或与其他肿瘤抗原肽联用时可实现有效的肿瘤免疫。该结论为FOXM1的抗肿瘤机制提供了进一步的见解。

宫颈癌组织中Cep55与FoxM1蛋白表达与临床病理特征及预后的相关性分析

目的:分析宫颈癌组织中心相关蛋白Cep55(Cep55)与叉头转录因子(FoxM1)蛋白的表达情况,并探讨Cep55与FoxM1蛋白在宫颈癌组织中的临床病理特征及预后的相关性。方法:选取本院2010年1月至2013年4月收治的124例宫颈癌患者作为研究对象,采用回顾性分析法分析所有患者的临床及随访资料,根据其资料结果收集124例宫颈癌患者的124份癌组织标本(研究组)及124份其他良性宫颈疾病的正常组织标本(对照组)作为研究对象,所有组织标本均行Cep55与FoxM1蛋白的检测,分析宫颈癌组织中Cep55与FoxM1蛋白的表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果:(1)宫颈癌组织中Cep55及FoxM1蛋白阳性表达率分为75.00%(93/124)、77.42%(96/124)(P<0.05);(2)Cep55及FoxM1的表达与宫颈癌患者的年龄、病理类型及累及阴道残端情况均无明显关系(P>0.05);Cep55及FoxM1的表达与宫颈癌患者淋巴结转移、FIGO分期、分化程度及肌层浸润深度有显著相关(P<0.05);(3)经单因素分析得出:FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2及Cep55及FoxM1蛋白阳性患者其生存时间均显著缩短(P<0.05);(4)经多因素Cox比例风险回归模型分析得出:FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2及Cep55及FoxM1蛋白阳性均为影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:Cep55及FoxM1蛋白在宫颈癌癌变组织中以高水平表达,随着患者FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2,其高表达率均上升,且联合FIGOⅡ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2共同为影响宫颈癌患者预后的独立危险因素。