扶正解毒方对病毒性心肌炎大鼠氧化应激及Sirt1/FoxO3a通路的影响

目的 基于沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)/叉头蛋白O3a(FoxO3a)通路探究扶正解毒方对病毒性心肌炎(VMC)大鼠的影响。方法 大鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒(CVB3)法建立VMC模型,随机分为模型组、扶正解毒方低剂量组(28 g/kg)、扶正解毒方高剂量组(112 g/kg)、EX527组(Sirt1抑制剂,1μg/kg)、扶正解毒方(28 g/kg)+EX527(1μg/kg)组,每组15只,另取未造模的正常大鼠15只为正常组,连续给药10 d。检测大鼠超声心动图Tie指数,HE染色观察心肌组织病理损伤情况,ELISA法检测血清心肌损伤标志物、氧化应激水平,TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率,免疫组化法检测心肌组织Sirt1表达,Western blot法检测心肌组织FoxO3a、磷酸化FoxO3a(p-FoxO3a)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、细胞周期抑制蛋白p27、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞坏死加重,大鼠出现死亡,Tie指数、血清心肌损伤标志物、氧化应激指标水平均升高(P<0.05),Sirt1/FoxO3通路蛋白及其介导的抗氧化应激、抗凋亡相关蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,扶正解毒方各剂量组大鼠无死亡,心肌组织损伤得以缓解,Tie指数、血清心肌损伤标志物、氧化应激指标水平均降低(P<0.05),Sirt1/FoxO3通路蛋白及其介导的抗氧化应激、抗凋亡相关蛋白表达升高(P<0.05);EX527可加重VMC大鼠的死亡及心肌细胞氧化损伤等症状,并逆转扶正解毒方对抗病毒性心肌炎的作用(P<0.05)。结论 扶正解毒方可通过激活Sirt1/FoxO3a通路缓解VMC大鼠心肌氧化应激损伤。

虎七散含药血清对食管癌细胞Ec9706糖酵解的影响及AMPK/FOXO3a通路的调节作用研究

目的研究虎七散含药血清对食管癌细胞Ec9706糖酵解的影响及对磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/叉头框蛋白O3a(FOXO3a)通路的调节作用。方法收集Ec9706细胞,接种于细胞培养皿中,分别设置空白对照组、虎七散低、中、高剂量组及顺铂组,虎七散各剂量组分别加入虎七散含药血清,顺铂组加入2μg·mL^(-1)的顺铂,空白对照组加入新鲜DMEM培养液,四噻唑蓝(MTT)法测定Ec9706细胞增殖率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ec9706细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量、己糖激酶(HK)及乳酸脱氢酶(LDH)活性,划痕实验测定Ec9706细胞24h迁移率,Transwell实验测定Ec9706细胞侵袭率,流式细胞术测定Ec9706细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定Ec9706细胞FOXO3a、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及乳酸脱氢酶A(LDHA)mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定Ec9706细胞p-AMPK、FOXO3a、Bax、Bcl-2及LDHA蛋白水平。结果与空白对照组比较,虎七散各剂量组及顺铂组Ec9706细胞24 h、48 h及72 h增殖率、葡萄糖摄取量、乳酸生成量、HK活性及LDH活性,Ec9706细胞24 h迁移率、侵袭率、Bcl-2及LDHA mRNA及蛋白水平、p-AMPK/AMPK水平显著降低(P<0.05),Ec9706细胞凋亡率、FOXO3a、Bax mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05),且随着虎七散剂量的增加,Ec9706细胞各项指标变化更优。结论虎七散能够显著抑制食管癌Ec9706细胞糖酵解过程,进而抑制Ec9706细胞增殖、迁移及侵袭过程,促进Ec9706细胞凋亡,其机制可能与调节AMPK/FOXO3a通路有关。

灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸调控PI3K/Akt/FoxO3a通路延缓衰老的作用机制研究

研究灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinic acid from Erigeron breviscapus,EBCQA)的抗衰老作用,并探讨其潜在作用机制。以线虫为模型,观察EBCQA对其寿命、氧化抗性、热抗性、运动能力、DAF-16入核、以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响。腹腔注射D-半乳糖构建衰老大鼠模型,检测EBCQA对大鼠学习记忆能力、胸腺和脾脏系数、肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt/protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphp-Akt,p-Akt)、叉头框蛋白O3a(forkhead box class O3a,FOXO3a)、磷酸化FOXO3a(phosphp-FOXO3a,p-FOXO3a)表达,以及肝脏和血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量的影响。结果显示,EBCQA能够延长野生型线虫寿命,并提升其氧化抗性、热抗性和运动能力,但对线虫PI3K、Akt、FoxO3a同源体突变株寿命没有显著影响;EBCQA能促进DAF-16入核,通过DAF-16提升线虫的SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA水平。在D-半乳糖诱导衰老大鼠中,EBCQA给药显著改善大鼠的学习记忆功能,提升胸腺和脾脏系数,降低PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO3a表达和MDA含量,增强SOD、GSH-Px、CAT活性。以上结果表明,EBCQA具有延缓衰老的作用,其机制可能与抑制PI3K和Akt激活、降低FOXO3a磷酸化、促进FOXO3a入核和转录活性、提升抗氧化酶活性和抑制氧化应激相关。

丹参酮IIA通过激活AKT/FOXO3a通路减轻七氟醚诱导的大鼠神经元细胞毒性

目的 探究丹参酮IIA(Tan IIA)减轻七氟醚(Sev)诱导的大鼠神经元细胞毒性的机制及其对AKT/FOXO3a通路产生的影响。方法 将大鼠神经元细胞HT22分为对照组、Sev组、TanIIA干预组与Sev+Tan IIA+LY294002组。CCK-8实验筛选最佳TanIIA浓度;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;试剂盒检测各组细胞MDA、SOD及GSH水平;Western blot检测各组细胞HO-1、 NQO1、AKT、p-AKT、FOXO3a及p-FOXO3a的蛋白表达。结果 Tan IIA的最佳处理浓度为3μg/mL。Sev能够导致细胞毒性,诱导细胞凋亡,导致氧化应激;Tan IIA对Sev诱导的细胞毒性、凋亡以及氧化应激具有保护作用,而抑制AKT则抵消了Tan IIA对Sev诱导的细胞毒性保护作用,抵消了Tan IIA对Sev诱导的细胞凋亡和氧化应激的抑制作用。此外,Tan IIA激活了AKT/FOXO3a通路。结论 丹参酮IIA通过激活AKT/FOXO3a通路减轻七氟醚诱导的大鼠神经元细胞毒性。

红景天苷对葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠Sirt1/FoxO3a信号通路的作用

目的探讨红景天苷(Sal)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠结肠组织Sirt1/FoxO3a信号通路的影响.方法采用3%DSS诱导建立小鼠结肠炎模型,将24只小鼠分为对照组(正常小鼠)、模型组(DSS)、Sal低剂量组(DSS+Sal 20 mg/kg)和Sal高剂量组(DSS+Sal 40 mg/kg),每组6只,7天后观察并记录小鼠的体重变化、结肠炎疾病活动指数(DAI)、结肠长度及结肠组织病理改变.采用RT-PCR检测小鼠结肠组织Sirt1、FoxO3a、白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8、核因子(NF)-κB p65、肿瘤坏死因子(TNF)-α等的mRNA含量.采用Western blot法检测小鼠结肠组织中Sirt1、FoxO3a、磷酸化NF-κB p65蛋白的表达水平.结果与模型组比较,Sal干预后小鼠的体重降低程度减缓,DAI降低,抑制结肠缩短(P<0.05或P<0.01),且Sal能够明显改善结肠组织病理损伤.与模型组比较,Sal干预可明显提高小鼠结肠组织Sirt1、FoxO3a的表达,降低磷酸化NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01);且可降低IL-1、IL-6、IL-8、NF-κB p65、TNF-αmRNA含量(P<0.05或P<0.01).结论 Sal对DSS诱导的小鼠结肠炎模型有保护作用,其作用机制可能与Sirt1/FoxO3a通路有关.

细胞外三磷腺苷对失神经大鼠腓肠肌细胞中FoxO3a通路的影响

目的探讨细胞外三磷腺苷（ATP）对失神经大鼠腓肠肌细胞中FoxO3a／MAFbx通路的影响。方法雌性成年Wistar大鼠54只随机分为3组：失神经对照组，ATP治疗组，健康对照组。其中失神经对照组和ATP治疗组在右侧梨状肌下缘切断坐骨神经，制作失神经动物模型。术后ATP治疗组于右侧腓肠肌内注射ATP0．1mg,／d，左侧腓肠肌内注射等量生理盐水；失神经对照组双下肢注射等量的生理盐水；健康对照组不做任何处理。在术后0,2、7、14、28d分别处死一组大鼠，取其两侧腓肠肌，称肌湿重，计算肌失重比（右侧／左侧），采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测大鼠腓肠肌FoxO3a和ikFbx的mRNA和蛋白表达水平以及253位磷酸化的FoxO3a（p-FoxO3a）蛋白表达。结果ATP治疗组肌湿重比高于失神经对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；ATP治疗组FoxO3a的mRNA和蛋白表达略低于失神经对照组，差异无统计学意义（P〉0．05）；MAFbx的mRNA和蛋白表达低于失神经对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；p-FoxO3a的蛋白表达量较对照组明显增加，不同时段差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论细胞外ATP可能通过磷酸化FoxO3a进而抑制MAFbx蛋白的表达来延缓大鼠骨骼肌失神经萎缩。

AKT/FoxO3a通路在白藜芦醇抑制大鼠肾脏间质纤维化中的作用

目的探讨蛋白激酶B (Akt)/FoxO3a通路在白藜芦醇抑制肾脏纤维化中的作用。方法将55只SD大鼠随机分为假手术组(10只)和造模组(45只),采用单侧输尿管梗阻法构建大鼠肾间质纤维化模型,45只造模SD大鼠术后随机分为模型组和白藜芦醇(20、40 mg/kg)干预组,每组15只。干预组大鼠于术后ig白藜芦醇20、40 mg/kg,1次/d,持续2周。模型组大鼠ig等量生理盐水。HE、Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测α-SMA阳性细胞,Western blot检测Akt、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a蛋白。结果假手术组、模型组、白藜芦醇20 mg/kg干预组和白藜芦醇40 mg/kg干预组肾小管损伤病理评分分别为(0.36±0.05)、(4.07±0.53)、(3.92±0.48)和(3.21±0.35),其中白藜芦醇20 mg/kg干预组与模型组间无显著性差异,假手术组评分显著低于白藜芦醇干预组(P<0.05),白藜芦醇40 mg/kg干预组又显著低于造模对照组(P<0.05)。假手术组、模型组和白藜芦醇40 mg/kg干预组α-SMA阳性细胞比例分别为(3.84±0.62)%、(52.36±14.27)%和(26.15±4.63)%,3组间具有显著性差异(P<0.01)。FoxO3a和Akt蛋白表达三组间无显著性差异,p-Akt和pFoxO3a蛋白表达在模型组SD大鼠显著减低,但白藜芦醇40 mg/kg干预组p-Akt和p-FoxO3a蛋白表达高于模型组,低于假手术组。结论白藜芦醇可以减低p-Akt和p-FoxO3a蛋白表达,发挥抗肾间质纤维化作用。

HMB在小鼠急性呼吸窘迫综合征相关ICU获得性衰弱中的作用及其机制

目的探讨β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)在小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)相关ICU获得性衰弱(ICU-AW)中的作用及其机制。方法将40只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、假手术组、模型组及HMB组,每组10只。模型组及HMB组小鼠在气管内注入3μg/g脂多糖(LPS),制备ARDS相关ICU-AW模型,假手术组注入等量无菌水,对照组不予操作。造模第2天,HMB组给予340 mg/(kg·d)HMB灌胃,其余3组给予等体积生理盐水,连续灌胃2周。另取与HMB组相同处理的小鼠20只,随机分为ARQ-092组与Akt抑制剂对照组,每组10只。从造模第2天开始,每天在HMB灌胃10 h后口服Akt抑制剂(ARQ-092组)或等体积载体(Akt抑制剂对照组),持续给药12 d。测量各组小鼠前肢肌肉抓力、肌肉减少指数(SI);HE染色观察肺组织及肌肉组织病理变化;qRT-PCR检测小鼠腓肠肌中Akt、FoxO3a、Atrogin1及MuRF1的mRNA表达水平;Western blotting检测小鼠腓肠肌中Akt/FoxO3a通路相关蛋白表达水平。结果HMB组小鼠的前肢肌肉抓力及SI均明显高于模型组(P<0.05)。HE染色结果显示,对照组及假手术组肺组织结构正常;模型组肺泡间隔可见明显增厚、断裂,结构紊乱,炎性细胞浸润;HMB组肺组织损伤程度较模型组轻。对照组及假手术组小鼠的腓肠肌肌束结构正常;模型组出现肌纤维萎缩、数量减少,肌束结构破坏,横截面积减少;HMB组小鼠腓肠肌损伤程度较轻。与模型组比较,HMB组小鼠腓肠肌中Akt及FoxO3a mRNA表达水平均明显升高(P<0.05),Akt及FoxO3a蛋白磷酸化水平也明显升高(P<0.05),而Atrogin1及MuRF1的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论HMB可通过调控Akt-FoxO3a-MuRF1/Atrogin1信号通路在ICU-AW中发挥保护作用,可能对ICU-AW的防治具有重要价值,而Akt抑制剂ARQ-092能够逆转HMB的此种保护作用。