探讨Foxa2基因表达对小鼠心脏房间隔缺损的影响

目的:探讨Foxa2基因对小鼠心脏房间隔缺损的影响。方法:取NIPBL+/-基因缺陷鼠6只为实验组,NIPBL+/+基因缺陷鼠6只为对照组,检测小鼠体重观察小鼠生长发育情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Foxa2基因表达。结果:实验组与对照组相比,小鼠的体重明显偏低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组心脏房间隔处的Foxa2基因表达明显低于对照组,且差异具有统计学意(P<0.05)。结论:NIPBL+/-基因缺陷鼠中Foxa2基因表达降低,在一定程度上导致小鼠生长发育迟缓,体重下降,可能是造成小鼠心脏房间隔缺损的原因,本实验通过探讨Foxa2基因表达对小鼠心脏房间隔缺损的影响,为先天性心脏病的诊断和干预及降低出生病患率提供了新的思路。

肝细胞Foxa2基因剔除小鼠的制备及鉴定

目的制备肝细胞Foxa2基因特异性剔除的小鼠模型,并进行鉴定。方法采用CreloxP重组系统,在Cre重组酶的作用下,将小鼠肝细胞DNA上的Foxa2基因进行条件性的靶向剔除;并通过PCR和免疫荧光染色法进行鉴定。结果PCR在剔除型小鼠中未扩增出Foxa2基因的条带;同时定量分析也未测出其mRNA的表达;免疫荧光显示剔除型小鼠的Foxa2蛋白也为阴性。结论条件性基因剔除技术能成功地制备肝细胞Foxa2基因特异性剔除的小鼠模型。

基于CRISPR/Cas9系统构建FOXA2表达示踪体系

利用CRISPR/Cas9系统在基因FOXA2蛋白质编码区后插入绿色荧光蛋白核酸序列,实现对FOXA2基因开启和关闭的示踪。通过靶向序列选择、Cas9靶向质粒及Donor片段的克隆、细胞转染并进行流式细胞荧光分选、阳性细胞有限稀释、富集培养及单克隆细胞的鉴定和转录翻译水平验证等5个方面,进行实验研究。在编辑的乳腺肿瘤细胞MCF-7中,绿色荧光蛋白有效表达;乳腺癌细胞内绿色荧光蛋白的表达水平同FOXA2蛋白的表达水平正相关,且经肿瘤细胞上皮间质转化进程诱导因子EGF的诱导,绿色荧光蛋白和FOXA2表达水平同步降低。方法学上CRISPR/Cas9靶向FOXA2并利用细胞内同源性定向修复插入绿色荧光蛋白序列成功;利用报告基因蛋白表达水平示踪目的基因的开启、关闭及表达量高低结果准确、方法简单,效果明显。

牛FOXA 2基因转录调控的生物信息学分析

为研究牛FOXA2基因的生物学功能及其启动子的转录调控元件,通过MEGAX软件构建了黄牛、绵羊、挪威大鼠、小鼠、人和恒河猴6种动物的FOXA2系统进化树,利用GO功能注释和KEGG通路富集分析FOXA2靶基因的生物功能,利用不同启动子分析软件预测了FOXA2基因启动子区域的启动子核心区域、CpG岛和转录因子结合位点。结果表明,6种动物的FOXA2遗传距离都较近,说明该基因的在进化上比较保守。KEGG分析将FOXA2的靶基因富集到81条通路上。筛选到4个潜在启动子分别为914~964 bp、1120~1170 bp、1520~1570 bp和1528~1578 bp处。预测302 bp和1568 bp处为转录起始位点,且在1537 bp处发现TATA框,4个潜在的启动子均在预测到的CpG岛内,使用PROMO从2000 bp的启动子区域中预测到68个转录因子。研究结果表明,黄牛FOXA2所调控靶基因主要与生长增殖、细胞分化、糖脂代谢和癌症相关;FOXA2启动子区域的1528~1578 bp处可能为其启动子核心区;转录因子Sp1、GATA1、GATA2、CREB、C/EBPβ、E2F-1和USF2等在启动子核心区附近的转录因子可能对牛FOXA2的表达起到重要作用。

Foxa2基因突变对2型糖尿病胰岛素抵抗和胰腺β细胞功能的影响

目的探讨2型糖尿病患者翼螺旋转录因子叉头框A2(Foxa2)基因突变与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的影响,分析其之间的关系。方法选取2型糖尿病患者70例为观察组,健康体检者50例为对照组,两组患者入选后给予75g葡萄糖耐量试验,观察两组患者胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能情况,对观察组患者进行Foxa2基因检测,利用DNAStar 4.0软件将所有PCR扩增产物测序,并与Gen Bank提供的启动子和外显子序列进行比对分析,观察比较Foxa2基因突变者与未突变者胰岛β细胞功能差异情况。结果观察组患者Homa-IR为5.81±3.59,高于对照组的2.61±1.28,差异有统计学意义(P<0.05)。IAI、Homa-β、△I30/△G30、MBCI、DI分别为0.01±0.01、101.48±84.15、4.03±3.25、8.54±4.16和21.13±11.35,均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者经Foxa2基因检测见突变者总计55例(78.6%),Foxa2基因存在突变者Homa-IR高于未突变者,而IAI、Homa-β、MBCI低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2型糖尿病患者Foxa2基因突变与其胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能减退有关。

叉头框蛋白A2基因c.428A>G杂合突变导致年轻的成年发病型糖尿病一例报道

分析MODY遗传病因并探讨其基因密码。采集先证者及父母、姥姥外周血,提取DNA,构建文库后杂交捕获目标区域,单端二代测序,分析结果后采用一代测序验证。先证者及其母亲为叉头框蛋白A2(FOXA2)基因c. 428A>G(p. Tyr143Cys)杂合错义突变。FOXA2基因突变c. 428A>G是主要致病基因。