CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的表达及CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞在感染泡球蚴小鼠中的作用机制

目的探讨CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的表达及CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg在泡球蚴感染中的作用机制。方法将小鼠分为泡型包虫病组、健康对照组。用流式细胞仪检测脾脏CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg、CD4^+CD25^+Foxp3 Treg细胞含量及CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的表达含量,用ELISA法检测血清中细胞因子IFN-γ、TGF-β1、IL-10的表达水平。并通过Pearson相关性分析方法分析CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞的含量与病灶大小的关系。结果 1.健康对照组CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞为9.04±2.78,泡型包虫病组为14.91±4.21(P<0.004)。2.健康对照组CD4^+CD25^+Foxp3 Treg细胞为0.76±0.73,泡型包虫病组为4.21±2.08(P<0.000)。3.健康对照组CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的含量为70.7%,泡型包虫病组为67.7%。4.泡型包虫病组中CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞含量与病灶大小呈正相关(r=0.894,P=0.01),泡型包虫病组中CD4^+CD25^+Foxp3 Treg细胞含量与病灶大小呈正相关(r=0.714,P=0.031)。5.健康对照组血清中IFN-γ的含量为8.39±0.82,泡型包虫病组为560.95±123.71(P<0.000),健康对照组血清中IL-10的含量为538.52±55.82,泡型包虫病组为1946.80±260.89(P<0.000),健康对照组血清TGF-β1的含量为223.90±56.34,泡型包虫病组为321.35±36.44(P<0.01)。结论 1.泡球蚴感染可刺激小鼠CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞的增殖,CD4^+CD25^+CD127^(low) Treg细胞高表达Foxp3,在泡型包虫病中可作为Treg细胞的表面标记物;2.CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3Treg的含量与病灶大小呈正相关,泡球蚴感染的小鼠Treg细胞分泌的免疫抑制性细胞因子(IFN-γ、IL-10和TGF-β1)呈高水平表达,提示CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞能促进泡型包虫病的发展,作用机制可能与抑制机体的免疫功能有关。

microRNA-4281通过调节FOXP3引起Treg/Th17免疫失衡诱导免疫性血小板减少性紫癜

目的 研究miR-4281在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)中的作用及其机制。方法 通过GEO数据库筛选ITP中异常表达的miRNA。收集新诊ITP、治疗有效的ITP患者以及健康受试者,取静脉血,分离外周血单核细胞(PBMCs)和CD4^(+)T细胞。利用实时定量PCR检测细胞中miR-4281以及其他因子的表达量。使用流式细胞术分析细胞中CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+)Tregs和Th17细胞的含量。使用Pearson相关系数法检验miR-4281表达水平与各因子的关系。结果 生物信息学分析发现miR-4281在ITP中异常表达。与健康受试者和治疗有效的ITP患者相比,miR-4281的表达水平下降。ITP患者PBMCs中,miR-4281表达水平与Tregs含量和Treg/Th17呈正相关,与Th17细胞含量呈负相关;miR-4281可促进Tregs细胞的分化,并抑制Th17的分化;miR-4281表达水平与FOXP3表达水平正相关。结论 miR-4281表达水平在ITP中降低,这种降低可以抑制FOXP3的表达,导致Treg/Th17免疫失衡,促进ITP进展。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

CD4+CD25+Foxp3+Treg在子痫前期患者外周血中表达的意义及与妊娠结局的相关性分析

目的分析CD4+CD25+叉头框蛋白3(Foxp3)+调节性T淋巴细胞(Treg)在子痫前期(PE)患者外周血表达中的意义及与妊娠结局的相关性。方法选取2020年1月~2023年1月收治的112例PE患者为疾病组,另根据年龄、孕周匹配选取健康孕妇60例为健康组。疾病组中根据疾病严重程度分为轻度组与重度组。比较外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平差异及不良妊娠结局发生率。疾病组根据是否存在妊娠不良结局分为不良组与良好组。对比良好组与不良组患者临床资料。Logistic回归分析影响PE患者不良妊娠结局的因素。Spearman相关性分析法分析CD4+CD25+Foxp3+Treg与不良妊娠结局的相关性。结果疾病组、轻度组、重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于健康组,不良妊娠结局发生率均高于健康组(P<0.01)。疾病组、重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于轻度组,不良妊娠结局发生率高于轻度组(P<0.01),重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比低于疾病组,不良妊娠结局发生率高于疾病组(P<0.01)。不良组的孕前体质量指数(BMI)、24 h尿蛋白定量高于良好组,终止妊娠时间早于良好组,外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于良好组,差异有统计学意义(P<0.001);Logistic回归分析显示孕前BMI、终止妊娠时间、24 h尿蛋白定量、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均是导致不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.001)。Spearman相关性分析显示外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平与不良妊娠结局呈负相关(r=-0.722,P<0.01)。结论PE患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达水平异常低表达,是导致不良妊娠结局发生的独立危险因素,且与不良妊娠结局的发生成负相关。

枯芩与条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节机制研究

目的比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只。采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg^(-1)·d^(-1),美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组、模型组灌服等体积生理盐水。连续给药28 d。给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β_(1)水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P<0.05或P<0.01)均优于枯芩组。结论枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用。

苯并(a)芘对变应性鼻炎模型鼻黏膜功能及Treg细胞甲基化水平的影响

目的探讨苯并(a)芘对变应性鼻炎(AR)模型鼻黏膜功能及Treg细胞甲基化水平的影响。方法36只SPF级BALB/c雌性小鼠中选取12只作为正常对照组,剩余小鼠采用随机数表法分为AR模型组和苯并(a)芘干预组,各12只。AR模型组和苯并(a)芘干预组进行建模处理。建模后,苯并(a)芘干预组腹腔注射7.89 mg/kg苯并(a)芘,正常对照组和AR模型组给予等量的无菌PBS溶液腹腔注射。对各组小鼠的鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片嗜酸细胞(EOS)计数、血清中卵清蛋白特异性IgE(OVA-sIgE)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平、小鼠鼻黏膜病理学变化、小鼠鼻黏膜Th亚群及Foxp3甲基化和蛋白水平进行对比。结果与AR模型组相比,苯并(a)芘干预组中小鼠鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片EOS计数增加最为明显(P<0.05),小鼠血清中OVA-sIgE、GM-CSF、TNF-α、IL-13和Eotaxin水平升高最为明显(P<0.05);苯并(a)芘干预后,可见大量的炎性细胞浸润,鼻黏膜上皮组织排列紊乱,增生和血管扩张严重,纤维上皮也受到严重的损伤,出现大量的杯形细胞,苯并(a)芘干预组小鼠鼻黏膜中AhR阳性细胞数量升高最为明显(P<0.05);Th1和Treg占比降低最为明显,Th2、Th17占比升高最为显著(P<0.05);小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化水平升高最为明显(P<0.05),小鼠脾脏中Foxp3蛋白水平降低最为明显(P<0.05)。结论苯并(a)芘通过增加CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化,降低Treg细胞比例,加重了鼻黏膜炎症和免疫失衡,进而参与变应性鼻炎的发病机制。

哮喘小鼠中Foxp3^+Treg/Th17的失衡及意义

目的检测哮喘小鼠与对照小鼠肺组织中Th1、Th2、Th17及Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分比,探讨哮喘小鼠中Foxp3+Treg/Th17比值变化及其在哮喘中的意义。方法将6周清洁级Balb/c小鼠随机分为对照组(control)和哮喘组(OVA),哮喘组给予OVA致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,对照组用PBS代替OVA。最后1次激发后24 h内检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数;HE染色制作肺组织病理切片,光镜下观察病理变化;小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性;流式细胞术检测小鼠肺组织中Th1、Th2、Th17、Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分比。结果哮喘组BALF细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞比例显著高于对照组,肺部炎症反应与气道高反应显著高于对照组。哮喘组小鼠肺组织中Th2、Th17细胞百分比明显高于对照组[分别为(0.83±0.08)%vs(0.50±0.03)%;(1.74±0.17)%vs(1.07±0.07)%,P<0.01];而Th1、Foxp3+Treg细胞百分比显著低于对照组[分别为(1.39±0.14)%vs(2.56±0.18)%;(4.87±0.35)%vs(7.67±0.44)%,P<0.001];哮喘组Th1/Th2及Foxp3+Treg/Th17明显低于对照组(分别为1.66±0.17 vs 5.19±0.56;3.02±0.49 vs 7.38±0.71,P<0.001)。结论除Th1/Th2失衡外,Foxp3+Treg/Th17失衡在哮喘发病中亦有重要作用。

免疫调节细胞FoxP3+Treg及免疫蛋白PD-L1在宫颈病变微环境中的表达

目的检测免疫抑制细胞FoxP3+Treg和免疫蛋白PD-L1在宫颈微环境中的表达情况。方法采用免疫组织化学法检测FoxP3和PD-L1在20例正常宫颈组织及45例不同程度宫颈病变组织中的表达情况。结果宫颈病变组织中的FoxP3+Treg(H=43.211,P=0.000)和PD-L1蛋白(t=213.00,P=0.001)表达均明显高于正常组织;随着病理级别升高,FoxP3+Treg的侵袭性(H=28.307,P=0.000)和PD-L1蛋白在异常分化细胞中的表达增加(t=239.000,P=0.028);FoxP3+Treg与异常分化细胞中PD-L1的表达呈显著正相关(rs=0.364,P=0.003)。结论在宫颈癌进展的不同病理阶段,局部微环境中FoxP3+Treg数目随宫颈细胞恶性转化的进程而增多,异常分化细胞中PD-L1的表达增强。

新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞和Foxp3^+Tregs、Th17表达的影响

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3^+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(S.pneumonia组)。S.pneumonia组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技术检测肺炎链球菌感染后第2、5、7和14天肺组织中CD103^+DCs、CD11b^+DCs、DCs表面共刺激分子CD40/CD80/CD86及Foxp3^+Tregs和IL-17^+CD4^+T细胞的表达水平。结果新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织DCs表面CD40、CD86表达增强(P<0.05),CD103^+DCs、Foxp3^+Tregs水平较对照组显著减少(P<0.05),CD11b^+DCs及IL-17^+CD4^+T细胞较对照组显著增高(P<0.01)。对照组肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Treg表达呈正相关(P<0.01,r=0.593),而新生期感染肺炎链球菌后CD103^+DCs和Foxp3^+Treg表达无相关性(P>0.05,r=0.015)。结论新生期肺炎链球菌肺炎抑制肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Tregs发育,促进CD11b^+DCs及Th17表达,影响固有免疫及适应性免疫应答,可能同后续慢性气道炎症及哮喘形成相关。

儿童AITP治疗前后CD_4^+CD_(25)^(High)Foxp3^+Treg细胞与Foxp3基因表达的变化

目的探讨CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)发病中的作用及对丙种球蛋白、激素治疗的效应关系。方法流式细胞仪检测AITP患儿治疗前后CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例变化,RT-PCR法检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达。结果单用激素或联用激素和丙种球蛋白治疗后AITP患儿CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例和Foxp3基因表达水平较治疗前和正常对照组明显增高(P<0.01),其中联用丙种球蛋白和激素组的增高水平更为明显(P<0.01)。结论CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例下降及Foxp3基因表达降低是AITP的发病机制之一,丙种球蛋白和激素可以通过诱导其扩增及活化发挥治疗AITP的作用。

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

骨恶性肿瘤化疗前后外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的变化

目的:探讨骨恶性肿瘤患者的发病机制及化疗对外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:骨恶性肿瘤患者25例,其中骨肉瘤患者13例,骨尤文氏瘤患者12例,分别于化疗当天及化疗后2周采集外周血。采用流式细胞法检测外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞的含量、RT-PCR法检测Foxp3mRNA表达水平。结果:骨恶性肿瘤患者化疗前CD4+CD25+Foxp3+Treg含量、Foxp3mRNA表达水平分别为(13.68±5.97)%、28.33±7.69,较正常对照组的(8.12±5.02)%、17.24±6.12明显升高(P<0.01);骨恶性肿瘤患者化疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞含量、Foxp3mRNA表达水平分别为(19.67±7.26)%、41.62±8.85,明显高于化疗前(P<0.05)。结论:骨恶性肿瘤的发生与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞引起的免疫抑制有关;化疗导致肿瘤免疫抑制的进一步增强。

麻醉方式对直肠癌患者CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平及预后的影响

目的探讨不同麻醉方式对直肠癌手术患者CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平及其预后的影响。方法选取2011年1月-2012年12月于陕西省人民医院行CO_2气腹腹腔镜下直肠癌手术的患者143例。比较单纯全身麻醉(GA)、硬膜外复合全身麻醉(EA)及硬膜外复合全身麻醉下6%羟乙基淀粉液急性高容量血液稀释(EA^+AHH)麻醉对患者术中一般情况、术前和术后1个月外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平及3年随访生存率的影响。结果 EA^+AHH组患者术中血压波动幅度小于其余两组患者。与术前比较,EA^+AHH组术后1个月外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+/CD4^+下降幅度大于其余两组,术后3年生存率高于其余两组(P<0.05)。结论 EA^+AHH麻醉可改善CO_2气腹腹腔镜下直肠癌手术患者术后细胞免疫状态及预后,值得在临床推广应用。

哮喘患者外周血CD8^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg细胞检测及其临床意义

目的:通过检测哮喘患者外周血CD8^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg(CD8^+ Treg)细胞比例,探讨其在哮喘发生发展过程中的作用。方法:选择哮喘患者50例,其中轻中度哮喘25例,重度哮喘25例,并选择与患者年龄、性别匹配的25例健康者作为对照组。流式细胞仪分析CD8^+ Treg细胞比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达;Luminex200检测血清IL-33、IL-1β和转化生长因子β1(TGF-β1)浓度。肺功能测试仪测定第1秒用力呼气容积(FEV1)、呼气峰流速(PEF)。结果:重度哮喘组和轻中度哮喘组CD8^+ Treg比例分别为[2.32(1.24~3.63)%]和[4.13(2.05~5.41)%],两组均低于对照组[6.48(5.21~6.92)%],且重度哮喘组降低更显著(P<0.05)。与对照组相比,重度哮喘组及轻中度哮喘组血清IL-33浓度均明显升高,且重度哮喘组升高更明显(P<0.05);与对照组及轻中度哮喘组相比,重度哮喘组TGF-β1和IL-1β明显升高(P<0.05);哮喘患者CD8^+ Treg细胞比例与FEV1(r=0.411,P=0.003)、PEF(r=0.441,P=0.001)呈正相关。ROC曲线分析显示,CD8^+ Treg诊断哮喘具有较高的特异性和敏感性。结论:哮喘患者外周血CD8^+ Treg细胞比例降低,在疾病发生发展过程中发挥重要作用。

CD4^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法:采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率差异。结果:慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分别为(5.14±1.03)%、(9.86±1.72)%、(7.93±1.67)%及(7.06±1.61)%,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组(P<0.01)。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。

结核患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达与巨噬细胞凋亡的临床意义

目的探讨结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞(Treg)表达与单核巨噬细胞(MΦ)凋亡的可能关系及临床意义。方法用流式仪测定29例活动性结核、17例肺外结核患者治疗前及治疗后3、6个月PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达及MΦ凋亡率,并与20例健康对照者(健康对照组)进行比较。结果活动性结核患者PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达明显高于健康对照组和治疗后患者,且复治患者高于初治患者,肺外结核高于肺结核;患者MΦ凋亡率明显高于健康对照组(P<0.01),初治组明显高于复治组(P<0.01)。活动性结核患者PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达与MΦ凋亡呈负相关。结论 CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达升高,MΦ凋亡下降,提示与结核病呈慢性感染有关。

Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能

目的构建Treg(regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变。方法设计编码区全长序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列。胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化p SCV-Bsd RFP质粒连接并测序鉴定。将p SCV-Bsd RFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒。反复感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆转录病毒液。将此高表达逆转录病毒命名为p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变。结果 Hi Fi PCR得到编码区全长序列DNA,连接到p SCV-Bsd RFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列。p SCV-Bsd RFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达。IL-10和TGF-β表达增强。结论成功构建Foxp3高表达逆转录病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能。

不明原因复发性流产小鼠模型CD4^+CD25^+ Treg的比例及Foxp3表达的变化

目的分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系。方法以雌性CBA/J×雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况。结果流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)%低于对照组(15.5±0.78)%(P<0.05)。流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)%,明显高于对照组(2.4±1.6)%(P<0.01)。流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0.025(P<0.05)。结论小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一。

玉屏风颗粒联合激素治疗PNS患儿效果及对Foxp3^+Treg细胞、Th1/Th2漂移的影响

目的:探究玉屏风颗粒联合激素治疗原发性肾病综合征(PNS)患儿的效果及对Foxp3+Treg细胞、Th1/Th2漂移的影响。方法:将我院收治的92例PNS患儿以随机数字表法分为对照组与联合组,各46例,对照组应用糖皮质激素治疗,联合组应用玉屏风颗粒(5 g,tid)联合糖皮质激素治疗,观察两组疗效、免疫功能指标、Th1/Th2细胞因子及感染情况差异。结果:联合组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组T淋巴亚群指标(CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+)及Foxp3^+Treg细胞水平均较治疗前升高,且联合组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组白细胞介素(IL)-2、转化生长因子(TGF)-β1及IL-6水平均较治疗前降低,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后联合组IL-10水平高于对照组,感染率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:玉屏风颗粒联合激素治疗PNS的疗效显著,有利于改善患儿的免疫功能,调节Th1/Th2细胞平衡。

CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs在自身免疫性甲状腺疾病中的作用研究

目的:探讨CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中的作用。方法:收集2014年2月-2016年11月在本院进行检查的AITD患者80例为治疗组,其中Graves(GD)患者40例,为GD组;桥本甲状腺炎(HT)患者40例,为HT组;选取健康体检人员20例为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^+T、CD4^+CD25^+Tregs细胞数量和比例,采用RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达水平,采用化学发光法对血清中甲状腺素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT_3)、总甲状腺素(TT_4)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)的水平进行测定。结果:三组TSH、TT_3、TT_4、TgAb、TPOAb比较,差异均有统计学意义(P<0.05);三组外周血CD4^+T细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05);GD组外周血CD4^+CD25^+Tregs占CD4^+T细胞的比率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);HT组外周血CD4^+CD25^+Tregs占CD4^+T细胞的比率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);GD组和HT组外周血Foxp3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);自身免疫性甲状腺疾病的CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs与TSH、TT_3、TT_4、TgAb和TPOAb有明显正相关性(P<0.05)。结论:CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs可能在AITD的发生发展进程中起着一定的作用,深入研究CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs在AITD中的作用将有助于建立新的预防和治疗策略。