CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的表达及CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞在感染泡球蚴小鼠中的作用机制

目的探讨CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的表达及CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg在泡球蚴感染中的作用机制。方法将小鼠分为泡型包虫病组、健康对照组。用流式细胞仪检测脾脏CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg、CD4^+CD25^+Foxp3 Treg细胞含量及CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的表达含量,用ELISA法检测血清中细胞因子IFN-γ、TGF-β1、IL-10的表达水平。并通过Pearson相关性分析方法分析CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞的含量与病灶大小的关系。结果 1.健康对照组CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞为9.04±2.78,泡型包虫病组为14.91±4.21(P<0.004)。2.健康对照组CD4^+CD25^+Foxp3 Treg细胞为0.76±0.73,泡型包虫病组为4.21±2.08(P<0.000)。3.健康对照组CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞中Foxp3的含量为70.7%,泡型包虫病组为67.7%。4.泡型包虫病组中CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞含量与病灶大小呈正相关(r=0.894,P=0.01),泡型包虫病组中CD4^+CD25^+Foxp3 Treg细胞含量与病灶大小呈正相关(r=0.714,P=0.031)。5.健康对照组血清中IFN-γ的含量为8.39±0.82,泡型包虫病组为560.95±123.71(P<0.000),健康对照组血清中IL-10的含量为538.52±55.82,泡型包虫病组为1946.80±260.89(P<0.000),健康对照组血清TGF-β1的含量为223.90±56.34,泡型包虫病组为321.35±36.44(P<0.01)。结论 1.泡球蚴感染可刺激小鼠CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞的增殖,CD4^+CD25^+CD127^(low) Treg细胞高表达Foxp3,在泡型包虫病中可作为Treg细胞的表面标记物;2.CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3Treg的含量与病灶大小呈正相关,泡球蚴感染的小鼠Treg细胞分泌的免疫抑制性细胞因子(IFN-γ、IL-10和TGF-β1)呈高水平表达,提示CD4^+CD25^+CD127^(low)/Foxp3 Treg细胞能促进泡型包虫病的发展,作用机制可能与抑制机体的免疫功能有关。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

microRNA-4281通过调节FOXP3引起Treg/Th17免疫失衡诱导免疫性血小板减少性紫癜

目的 研究miR-4281在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)中的作用及其机制。方法 通过GEO数据库筛选ITP中异常表达的miRNA。收集新诊ITP、治疗有效的ITP患者以及健康受试者,取静脉血,分离外周血单核细胞(PBMCs)和CD4^(+)T细胞。利用实时定量PCR检测细胞中miR-4281以及其他因子的表达量。使用流式细胞术分析细胞中CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+)Tregs和Th17细胞的含量。使用Pearson相关系数法检验miR-4281表达水平与各因子的关系。结果 生物信息学分析发现miR-4281在ITP中异常表达。与健康受试者和治疗有效的ITP患者相比,miR-4281的表达水平下降。ITP患者PBMCs中,miR-4281表达水平与Tregs含量和Treg/Th17呈正相关,与Th17细胞含量呈负相关;miR-4281可促进Tregs细胞的分化,并抑制Th17的分化;miR-4281表达水平与FOXP3表达水平正相关。结论 miR-4281表达水平在ITP中降低,这种降低可以抑制FOXP3的表达,导致Treg/Th17免疫失衡,促进ITP进展。

海珠益肝加味方对自身免疫性肝炎小鼠Th17/Treg平衡与FoxP3/RORγt的影响

目的:研究海珠益肝加味方对自身免疫性肝炎(AIH)小鼠辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞失衡与维甲酸相关孤核受体γ(ROR-γt)、特异性叉头状转录因子3(FoxP3)的影响。方法:将32只小鼠随机分为正常组、模型组、海珠益肝加味方组、醋酸泼尼松组,每组8只。除正常组外其他组采用刀豆蛋白A(ConA)尾静脉注射制备AIH小鼠模型,造模后采集各组小鼠血液及肝组织。HE染色观察各组肝组织病理表现;采用流式细胞术检测各组Th17和Treg细胞比例。Western Blot检测各组小鼠肝组织中IL-10、IL-17、TGF-β1、FoxP3、ROR-γt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组Th17细胞比例、Th17/Treg均显著上升(P<0.01),Treg细胞比例显著下降(P<0.01);与模型组比较,海珠益肝加味方组及醋酸泼尼松组Th17细胞比例、Th17/Treg均显著降低(P<0.01),Treg细胞比例显著上升(P<0.01)。与空白组比较,模型组IL-10、FoxP3蛋白表达下降,IL-17、TGF-β1、ROR-γt蛋白表达上升(P<0.01)。与模型组相比,海珠益肝加味方及醋酸泼尼松组IL-10、FoxP3表达显著上升,IL-17、TGF-β1、RORγt蛋白表达均显著下降(P<0.01)。结论:海珠益肝加味方可以有效改善Th17/Treg失衡,其机制可能与调节特异性转录因子FoxP3、ROR-γt的表达相关。

CD4+CD25+Foxp3+Treg在子痫前期患者外周血中表达的意义及与妊娠结局的相关性分析

目的分析CD4+CD25+叉头框蛋白3(Foxp3)+调节性T淋巴细胞(Treg)在子痫前期(PE)患者外周血表达中的意义及与妊娠结局的相关性。方法选取2020年1月~2023年1月收治的112例PE患者为疾病组,另根据年龄、孕周匹配选取健康孕妇60例为健康组。疾病组中根据疾病严重程度分为轻度组与重度组。比较外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平差异及不良妊娠结局发生率。疾病组根据是否存在妊娠不良结局分为不良组与良好组。对比良好组与不良组患者临床资料。Logistic回归分析影响PE患者不良妊娠结局的因素。Spearman相关性分析法分析CD4+CD25+Foxp3+Treg与不良妊娠结局的相关性。结果疾病组、轻度组、重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于健康组,不良妊娠结局发生率均高于健康组(P<0.01)。疾病组、重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于轻度组,不良妊娠结局发生率高于轻度组(P<0.01),重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比低于疾病组,不良妊娠结局发生率高于疾病组(P<0.01)。不良组的孕前体质量指数(BMI)、24 h尿蛋白定量高于良好组,终止妊娠时间早于良好组,外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于良好组,差异有统计学意义(P<0.001);Logistic回归分析显示孕前BMI、终止妊娠时间、24 h尿蛋白定量、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均是导致不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.001)。Spearman相关性分析显示外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平与不良妊娠结局呈负相关(r=-0.722,P<0.01)。结论PE患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达水平异常低表达,是导致不良妊娠结局发生的独立危险因素,且与不良妊娠结局的发生成负相关。

FOXP3^(+)肿瘤浸润性淋巴细胞与乳腺癌病理特征和预后的相关性研究

目的探讨FOXP3^(+)肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)与乳腺癌临床病理特征之间的相关性及其预后的意义。方法选取2009年1月至2013年5月期间首都医科大学附属北京世纪坛医院治疗的156例浸润性乳腺癌患者,采用免疫组化方法检测FOXP3^(+)和CD4^(+)的蛋白表达,记录患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移情况、组织学分级、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)、Ki-67指数、无病生存(DFS)率和总生存(OS)率,探讨FOXP3^(+)TILs与临床病理特征之间的相关性,使用Kaplan-Meier曲线和Cox比例风险模型进行生存分析。结果156例浸润性乳腺癌患者的中位年龄为51岁(32~70岁),乳腺癌组织中,FOXP3^(+)高表达的患者51例(32.7%),FOXP3^(+)的表达在肿瘤的组织学分级(P=0.021)、PR(P=0.016)、HER-2(P=0.018)、Ki-67指数(P=0.042)、腋窝淋巴结转移(P=0.001)方面的差异均有统计学意义。CD4^(+)TILs的表达与所有患者的临床病理特征均无明显相关性。生存分析显示,FOXP3^(+)高表达患者的OS率低于FOXP3^(+)低表达患者的OS率(64.7%比87.6%,χ^(2)=15.3,P<0.001)。FOXP3^(+)高表达患者的DFS率也低于低表达患者的DFS率(56.9%比80.0%,χ^(2)=13.1,P<0.001),差异有统计学意义。在74例腋窝淋巴结转移阳性的患者中,FOXP3^(+)高表达患者的DFS率低于FOXP3^(+)低表达患者的DFS率,差异有统计学意义(χ^(2)=5.730,P<0.001)。在多因素Cox生存分析显示,FOXP3^(+)TILs是乳腺癌患者OS[HR=2.732(95%CI=1.174~6.207),P=0.023]和DFS[HR=2.092(95%CI=1.068~4.088),P=0.032]预后不良的独立影响因素。结论FOXP3^(+)高表达患者的OS率和DFS率均低于FOXP3^(+)低表达患者,FOXP3^(+)TILs可作为乳腺癌患者的独立不良预后因素。

积雪草酸调控白细胞介素-6/信号转导子和转录激活子3/核转录因子-κB通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨积雪草酸调控白细胞介素(IL)-6/信号转导子和转录激活子3(STAT3)/核转录因子-κB(NF-κB)通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发来制备哮喘小鼠模型,随机分为模型组、积雪草酸低剂量组(54 mg/kg)、积雪草酸高剂量组(108 mg/kg)、积雪草酸高剂量(108 mg/kg)+Colivelin(IL-6/STAT3/NF-κB激活剂,2 mg/kg)组,每组各10只。另选10只小鼠在致敏和激发阶段给予等剂量生理盐水设为对照组,用积雪草酸和Colivelin分组处理各组小鼠后检测其肺组织病理形态,肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数,外周血Treg/Th17,BALF和血清中Treg、Th17细胞分泌因子水平,肺组织IL-6/STAT3/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生明显病理损伤,外周血Treg细胞占比和Treg/Th17,BALF和血清IL-10、IL-35水平降低(P<0.05)。肺部炎症评分,BALF中白细胞计数与嗜酸粒细胞计数,外周血Th17细胞占比,BALF和血清IL-17、IL-6水平,肺组织IL-6蛋白表达与p-STAT3/STAT3、p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。低、高剂量积雪草酸可逆转哮喘模型小鼠上述病理变化,且高剂量积雪草酸作用更强。Colivelin可减弱积雪草酸对哮喘模型小鼠上述病理变化的作用。结论:积雪草酸可通过减弱IL-6表达与STAT3、NF-κB的磷酸化,抑制哮喘小鼠炎症细胞及炎症因子产生,从而减轻气道炎症及肺组织损伤,改善肺功能。

桧木醇通过TGF-β1/Foxp3/RORγt通路抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 研究桧木醇对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 用0、5、10和20μmol/L桧木醇处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用划痕法检测细胞的迁移、Transwell法检测细胞侵袭能力、流式细胞技术检测细胞凋亡情况、采用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路相关蛋白的表达。结果 与对照组比较,5、10和20μmol/L桧木醇组细胞细胞划痕愈合率、侵袭能力均显著降低(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞划痕愈合率和侵袭能力逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白显著降低(P<0.05),随着桧木醇浓度的升高,TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 桧木醇可以通过抑制乳腺癌细胞中TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路来调节乳腺癌细胞的侵袭、迁移和凋亡,具有成为乳腺癌免疫治疗的潜在靶点。

CD4^+ CD25^+ Foxp3^+ Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法:采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率差异。结果:慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分别为(5.14±1.03)%、(9.86±1.72)%、(7.93±1.67)%及(7.06±1.61)%,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组(P<0.01)。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。

补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞及生活质量的影响

【目的】观察补肾法对支气管哮喘慢性持续期肾虚证患者CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞和Foxp3 mRNA表达的影响及对患者生活质量的改善作用。【方法】将60例慢性持续期肾虚证支气管哮喘患者随机分为对照组、穴注组与肌注组,每组20例。对照组维持入组前的常规西医治疗方案,穴注组与肌注组在原有治疗基础上加喘可治注射液穴注双侧足三里穴或肌肉注射,疗程均为90 d。观察各组治疗前后外周血CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞及Foxp3 mRNA表达的变化、成人哮喘生命质量评分量表(AQLQ)及哮喘控制测试量表(ACT)评分变化。【结果】(1)治疗后,除对照组CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞比例无显著性变化外,各组CD4^+CD25^+Foxp^(3+)Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均较治疗前显著升高(P<0.01),且穴注组和肌注组的升高作用均优于对照组(P<0.01);同时,穴注组Foxp3 mRNA表达也较肌注组显著升高(P<0.05)。(2)治疗后,除对照组对刺激原的反应、自我健康的关心和肌注组对刺激原的反应无显著性变化外,各组AQLQ各维度评分及其总分均较治疗前显著改善(P<0.05或P<0.01);且穴注组和肌注组在改善活动受限、哮喘症状、自我健康的关心及其总分方面均优于对照组(P<0.01);同时,穴注组在改善活动受限方面也优于肌注组(P<0.01)。(3)治疗30 d及90 d后,各组ACT评分均显著升高(P<0.05或P<0.01),且治疗90 d后,穴注组和肌注组均较治疗30 d后显著升高(P<0.01);治疗30 d及90 d后,穴注组和肌注组的ACT评分均较对照组显著升高(P<0.01)。【结论】喘可治注射液能够调节哮喘慢性持续期患者的外周血T淋巴细胞亚群的紊乱状态,使之恢复平衡,改善患者的临床症状和生活质量。

免疫调节细胞FoxP3+Treg及免疫蛋白PD-L1在宫颈病变微环境中的表达

目的检测免疫抑制细胞FoxP3+Treg和免疫蛋白PD-L1在宫颈微环境中的表达情况。方法采用免疫组织化学法检测FoxP3和PD-L1在20例正常宫颈组织及45例不同程度宫颈病变组织中的表达情况。结果宫颈病变组织中的FoxP3+Treg(H=43.211,P=0.000)和PD-L1蛋白(t=213.00,P=0.001)表达均明显高于正常组织;随着病理级别升高,FoxP3+Treg的侵袭性(H=28.307,P=0.000)和PD-L1蛋白在异常分化细胞中的表达增加(t=239.000,P=0.028);FoxP3+Treg与异常分化细胞中PD-L1的表达呈显著正相关(rs=0.364,P=0.003)。结论在宫颈癌进展的不同病理阶段,局部微环境中FoxP3+Treg数目随宫颈细胞恶性转化的进程而增多,异常分化细胞中PD-L1的表达增强。

儿童AITP治疗前后CD_4^+CD_(25)^(High)Foxp3^+Treg细胞与Foxp3基因表达的变化

目的探讨CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)发病中的作用及对丙种球蛋白、激素治疗的效应关系。方法流式细胞仪检测AITP患儿治疗前后CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例变化,RT-PCR法检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达。结果单用激素或联用激素和丙种球蛋白治疗后AITP患儿CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例和Foxp3基因表达水平较治疗前和正常对照组明显增高(P<0.01),其中联用丙种球蛋白和激素组的增高水平更为明显(P<0.01)。结论CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例下降及Foxp3基因表达降低是AITP的发病机制之一,丙种球蛋白和激素可以通过诱导其扩增及活化发挥治疗AITP的作用。

新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞和Foxp3^+Tregs、Th17表达的影响

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3^+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(S.pneumonia组)。S.pneumonia组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技术检测肺炎链球菌感染后第2、5、7和14天肺组织中CD103^+DCs、CD11b^+DCs、DCs表面共刺激分子CD40/CD80/CD86及Foxp3^+Tregs和IL-17^+CD4^+T细胞的表达水平。结果新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织DCs表面CD40、CD86表达增强(P<0.05),CD103^+DCs、Foxp3^+Tregs水平较对照组显著减少(P<0.05),CD11b^+DCs及IL-17^+CD4^+T细胞较对照组显著增高(P<0.01)。对照组肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Treg表达呈正相关(P<0.01,r=0.593),而新生期感染肺炎链球菌后CD103^+DCs和Foxp3^+Treg表达无相关性(P>0.05,r=0.015)。结论新生期肺炎链球菌肺炎抑制肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Tregs发育,促进CD11b^+DCs及Th17表达,影响固有免疫及适应性免疫应答,可能同后续慢性气道炎症及哮喘形成相关。

原发性肝癌患者射频消融后外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞对预后的影响

目的研究射频消融术治疗原发性肝癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细水平与预后的关系.方法回顾性分析102例原发性肝癌患者经射频消融治疗后外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值与生存时间的关联.结果原发性肝癌患者射频术后CD4+CD25+Foxp3+细胞占CD4+T的比例显著降低,与临床分期、肿瘤大小、AFP水平相关.CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目与生存率相关.结论原发性肝癌患者射频消融治疗后外周血Treg水平是判断预后的独立预测指标.

外周血自然杀伤细胞、Treg细胞和Foxp3表达与体外受精胚胎移植术不良结局的相关性及预测价值研究

目的探讨外周血自然杀伤(natural killer,NK)细胞、Treg细胞和Foxp3表达与体外受精胚胎移植术(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)不良结局的相关性及预测价值研究。方法选择2017年3月至2019年3月于河北省唐山市妇幼保健院接受IVF-ET治疗的患者106例,将75例不良结局的患者作为观察组,正常生育的31例患者作为对照组。观察组根据不良结局类型进一步细分为三个亚组:分别是反复失败组、生化妊娠组和流产胚停组,每组25例。分别检测Foxp3信使核糖核酸(mRNA)表达和CD4+CD25+T细胞水平,绘制受试者工作特征曲线,分析外周NK细胞、Treg细胞分化以及Foxp3 mRNA表达在IVF-ET不良结局预测中的效能。结果观察组的NK细胞百分比高于对照组,CD4+CD25+T细胞百分比及Foxp3 mRNA表达低于对照组(P<0.05);观察组的三个亚组间NK细胞百分比、CD4+CD25+T细胞百分比和Foxp3 mRNA表达差异无显著性(P>0.05)。受试者工作特征曲线分析显示CD4+CD25+T细胞在预测IVF-ET不良结局的曲线下面积最大,且预测的敏感度和特异度均略高于其他两项指标。结论IVF-ET不良结局患者外周血NK细胞表达升高,而Treg细胞分化和Foxp3表达减少,其中Treg细胞分化的CD4+CD25+T细胞可作为IVF-ET不良结局的预测指标。

Foxp3^+ Treg、Th细胞迁移及ET-1与佐剂关节炎大鼠模型肺功能的关系

目的:观察佐剂关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠肺功能降低与辅助T细胞(Th)、调节T细胞(Treg)及Foxp3的关系。方法:将SD大鼠随机分为正常对照(NC)组和模型对照(MC)组,每组15只,向MC组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,复制成AA模型。致炎48 d后,采用小动物肺功能仪检测肺功能,酶联免疫吸附法检测内皮素(ET)-1、白细胞介素(IL)-10、γ干扰素(IFN-γ),免疫组化法检测肺组织IL-1β、IL-10表达,流式细胞仪测定Treg的表达,采用PCR与免疫印迹检测肺组织Foxp3表达。结果:与NC组相比,MC组大鼠IFN-γ、ET-1、IL-1β升高;肺功能参数50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)降低,IL-10、CD4+CD25+Foxp3+Treg、Foxp3表达降低(P<0.05或P<0.01);相关分析显示,AA大鼠肺功能参数FEF75、MMF分别与IFN-γ、Th1/Th2、IL-1β呈负相关,FEF50、PEF与ET-1呈负相关;PEF、FEF75分别与IL-10、Foxp3 mRNA、Foxp3蛋白呈正相关,FEF75与CD4+CD25+Foxp3+Treg呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论:AA大鼠肺功能下降可能是佐剂致炎后Th细胞分泌紊乱、细胞因子失衡、内皮细胞增多,使肺组织Foxp3表达抑制,进而CD4+CD25-T细胞转化成CD4+CD25+Treg受阻,最终导致RA肺功能降低。

唾液乳杆菌对哮喘小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞数量及TGF-β1表达的影响

目的探讨唾液乳杆菌对哮喘Balb/c小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法将32只Balb/c雌性小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘组、唾液乳杆菌组和哮喘+唾液乳杆菌组。应用卵蛋白激发方法建立急性哮喘模型,原代提取脾细胞,应用流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T比例,ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、TGF-β1水平。结果哮喘组小鼠脾细胞培养上清液中Th2细胞因子(IL-4)较正常对照组明显增高,而Th1细胞因子(IFN-γ)较对照组明显降低(P<0.05);唾液乳杆菌干预组较哮喘组Th2细胞因子(IL-4)水平下降,Th1细胞因子(IFN-γ)水平升高(P<0.05);唾液乳杆菌干预组小鼠脾细胞培养上清液中TGF-β1含量明显高于哮喘组(P<0.05);哮喘组小鼠脾淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例较正常对照组明显减少(P<0.05),而唾液乳杆菌干预组则明显高于哮喘组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg参与了支气管哮喘的发病过程,唾液乳杆菌可能通过上调CD4+CD25+Foxp3+Treg数量及增加TGF-β1表达调整Th1/Th2失衡,减轻哮喘炎症。

玉屏风颗粒联合激素治疗PNS患儿效果及对Foxp3^+Treg细胞、Th1/Th2漂移的影响

目的:探究玉屏风颗粒联合激素治疗原发性肾病综合征(PNS)患儿的效果及对Foxp3+Treg细胞、Th1/Th2漂移的影响。方法:将我院收治的92例PNS患儿以随机数字表法分为对照组与联合组,各46例,对照组应用糖皮质激素治疗,联合组应用玉屏风颗粒(5 g,tid)联合糖皮质激素治疗,观察两组疗效、免疫功能指标、Th1/Th2细胞因子及感染情况差异。结果:联合组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组T淋巴亚群指标(CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+)及Foxp3^+Treg细胞水平均较治疗前升高,且联合组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组白细胞介素(IL)-2、转化生长因子(TGF)-β1及IL-6水平均较治疗前降低,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后联合组IL-10水平高于对照组,感染率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:玉屏风颗粒联合激素治疗PNS的疗效显著,有利于改善患儿的免疫功能,调节Th1/Th2细胞平衡。

骨恶性肿瘤化疗前后外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的变化

目的:探讨骨恶性肿瘤患者的发病机制及化疗对外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:骨恶性肿瘤患者25例,其中骨肉瘤患者13例,骨尤文氏瘤患者12例,分别于化疗当天及化疗后2周采集外周血。采用流式细胞法检测外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞的含量、RT-PCR法检测Foxp3mRNA表达水平。结果:骨恶性肿瘤患者化疗前CD4+CD25+Foxp3+Treg含量、Foxp3mRNA表达水平分别为(13.68±5.97)%、28.33±7.69,较正常对照组的(8.12±5.02)%、17.24±6.12明显升高(P<0.01);骨恶性肿瘤患者化疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞含量、Foxp3mRNA表达水平分别为(19.67±7.26)%、41.62±8.85,明显高于化疗前(P<0.05)。结论:骨恶性肿瘤的发生与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞引起的免疫抑制有关;化疗导致肿瘤免疫抑制的进一步增强。

Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能

目的构建Treg(regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变。方法设计编码区全长序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列。胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化p SCV-Bsd RFP质粒连接并测序鉴定。将p SCV-Bsd RFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒。反复感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆转录病毒液。将此高表达逆转录病毒命名为p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变。结果 Hi Fi PCR得到编码区全长序列DNA,连接到p SCV-Bsd RFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列。p SCV-Bsd RFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达。IL-10和TGF-β表达增强。结论成功构建Foxp3高表达逆转录病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能。