支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

HPV DNA负荷量、辅助性T细胞17、FoxP3+调节性T细胞及炎症因子与高危型HPV感染的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA、辅助性T细胞17(Th17)、叉头状转录因子3阳性(FoxP3^(+))调节性T细胞(Treg)及宫颈灌洗液中炎症因子与高危型HPV感染的相关性,为高危型HPV感染防治提供新思路。方法将2020年9月至2021年2月该院收治的高危型HPV感染患者100例纳入研究作为研究组,然后将其中50例高危型HPV16/18阳性患者作为HPV16/18组,50例其他12种高危型阳性病例作为其他亚型组。另外,选取同期体检的健康女性作为对照组(n=50)。比较研究组和对照组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中炎症因子[白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A]水平,比较HPV16/18组和其他亚型组各项指标水平,比较不同宫颈病变患者各项指标水平。分析各项指标与高危型HPV感染、宫颈病变的相关性,以及对宫颈病变患者高危型HPV感染的诊断价值。结果研究组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平均高于对照组(P<0.05),HPV16/18组各项指标水平均高于其他亚型组(P<0.05)。不同宫颈病变患者各项指标水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA负荷量、FoxP3^(+)Treg、Th17及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平与高危型HPV感染分型(HPV16/18=1,其他亚型=2)均呈负相关(P<0.05),与宫颈病变(宫颈上皮内瘤变Ⅰ级=1,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级=2,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级=3,宫颈癌=4)均呈正相关(P<0.05)。各项指标联合诊断高危型HPV16/18阳性的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.837~0.959),大于各指标单独诊断。结论高危型HPV感染患者HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及炎症因子水平异常,与高危型HPV感染分型、宫颈病变密切相关,而且HPV DNA负荷量与Th17、FoxP3^(+)Treg、炎症因子相关,各项指标联合检测可为临床防治高危型HPV持续感染提供可靠依据。

Foxp^(3+)调节性T细胞、CD19^(+)调节性B细胞水平与浸润性乳腺癌患者临床病理参数、免疫功能指标的相关性研究

目的探讨Foxp^(3+)调节性T细胞(Treg)、CD19^(+)调节性B细胞(Breg)水平与浸润性乳腺癌(IBCA)患者临床病理参数、免疫功能指标的相关性,为临床治疗提供参考。方法选取2019年5月至2022年12月江苏盛泽医院收治的231例IBCA患者为IBCA组,另选取同期收治的116例乳腺纤维腺瘤、导管内乳头状瘤、导管上皮内瘤变患者为非IBCA组,进行回顾性分析。收集IBCA组患者临床资料,比较两组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg、免疫功能指标水平,分析IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平在不同病理参数乳腺癌中的表达情况,分析IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平与临床病理参数、免疫功能指标的相关性。结果231例IBCA患者中,雌激素受体(ER)阳性181例,孕激素受体(PR)阳性130例,Ki67蛋白阳性率≥15%104例,Luminal A型97例,Luminal B型88例,HER2阳性15例,三阴乳腺癌(TNBC)31例。两组患者细胞毒性T(Tc)细胞、B细胞水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg、自然杀伤(NK)细胞水平均高于非IBCA组;辅助性T(Th)细胞水平、T细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均低于非IBCA组(均P<0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg在Ki-67蛋白阳性乳腺癌、Luminal B型乳腺癌、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌、TNBC中均差异表达(均P<0.05);CD19^(+)Breg在Luminal B型乳腺癌、HER2阳性乳腺癌、TNBC中均差异表达(均P<0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg水平与Ki67蛋白阳性率、Luminal B型、HER2阳性、TNBC、NK细胞水平均呈正相关,与Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关;CD19^(+)Breg水平与Luminal B型、HER2阳性、TNBC、NK细胞水平均呈正相关,与Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关。结论IBCA患者外周血中Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平的升高与IBCA分子亚型相关,且存在免疫功能障碍,表现为NK细胞水平上升,Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值下降。在IBCA患者的综合治疗中,合理调节免疫功能,有助于延缓疾病进展,改善预后。

辅助性T细胞17/调节性T细胞及维甲酸相关孤儿受体γt/叉头框转录因子P3失衡在妊娠相关疾病中的研究进展

在免疫学领域,妊娠相当于一次成功的半同种移植现象,母体对半异体胎儿的免疫耐受情况关乎妊娠的结局。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是最新发现的CD^(+)_(4)T淋巴细胞亚群,相关转录因子维甲酸相关孤儿受体γt和叉头框转录因子P3的表达水平与Th17/Treg之间的平衡密切相关。Th17/Treg免疫失衡会导致母体对胎儿的异常攻击,造成母胎耐受紊乱,并与复发性流产、先兆子痫、妊娠糖尿病等病理妊娠有关。

汉黄芩素调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/核因子κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的探讨汉黄芩素(Wog)调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法2022年8-12月,大鼠采用随机数字表法分为Model组、低剂量Wog组(Wog-L组,50 mg/kg)、高剂量Wog组(Wog-H组,100 mg/kg)、阳性药物氨茶碱组(Ami组,2.3 mg/kg)、IGF-1(PI3K激活剂)组(1.33 mg/kg)、Wog-H+IGF-1组(100 mg/kg+1.33 mg/kg)、对照组(CK组),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均需利用烟熏法联合气管滴注脂多糖(LPS)的方法构建COPD模型,建模成功24 h后,进行给药处理,每天1次给药,持续4周。检测呼气峰流量(PEF)、每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIF);流式细胞术检测外周血中Th17/Treg;HE染色检测肺组织病理;酶联免疫吸附法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;蛋白质印迹法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白。结果与CK组比较,Model组大鼠PEF(12.56±0.47比8.72±0.39)、PIF(9.35±0.32比7.24±0.17)、MV(132.26±5.78比96.63±3.28)、Treg(31.18±2.62比15.52±1.01)比例、IL-10(23.35±1.16比8.85±0.27)明显降低(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(33.36±1.48比49.78±1.73)、气道炎症评分(0比4.56±0.23)及IL-17(75.83±3.60比185.56±8.62)水平明显升高(均P<0.05)。与Model组比较,Wog-L组、Wog-H组PEF(9.66±0.40,11.49±0.51)、PIF(8.28±0.19,9.03±0.22)、MV(105.54±4.11,126.67±5.72)、Treg(19.93±1.18,27.73±2.05)比例、IL-10(11.56±0.33,20.72±0.59)水平明显升高(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(43.45±1.26,35.78±1.12)、气道炎症评分(3.75±0.17,0.86±0.07)、IL-17(162.27±7.14,103.35±4.33)水平明显降低(均P<0.05)。与CK组比较,Model组大鼠RORγt(0.15±0.01比1.34±0.11)、p-PI3K(0.22±0.01比0.86±0.07)、p-Akt(0.18±0.01比0.75±0.06)、p-NF-κB p65(0.11±0.01比0.69±0.06)蛋白表达升高,Foxp3(1.45±0.27比0.35±0.02)蛋白表达降低(均P<0.05)。与Model组相比,Wog-L组、Wog-H组RORγt(1.08±0.10,0.36±0.02)、p-PI3K(0.71±0.06,0.35±0.03)、p-Akt(0.62±0.06,0.28±0.02)、p-NF-κB p65(0.52±0.05,0.26±0.02)蛋白表达明显降低,Foxp3(0.57±0.04,1.13±0.09)蛋白表达明显升高(均P<0.05)。Wog-H组与Ami组大鼠上述各指标水平近似,均差异无统计学意义(P>0.05)。IGF-1逆转了高剂量Wog对COPD大鼠Th17/Treg的影响。结论Wog促进COPD大鼠Th17/Treg平衡的机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB通路有关。

Th17和调节性T细胞在人类免疫缺陷病毒疾病进展中的作用及其调控机制

目的本研究通过观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血Th17、Treg细胞及其相关转录因子、细胞因子的表达,进一步揭示Th17、Treg细胞的调控机制及其在HIV感染者疾病进展中的作用。方法选取2019年1月—2019年10月河南省上蔡县HIV感染者80例作为研究组,选取同地区健康人群20例作为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T及外周血单个核细胞Th17、Treg,酶联免疫吸附试验检测血浆中细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-23水平,实时聚合酶链反应检测转录因子ROR-γt及Foxp3 mRNA表达,Pearson法分析Th17、Treg与CD4^(+)T的相关性。结果研究组CD4^(+)T、CD4^(+)T/CD3+T、CD4^(+)T/CD8^(+)T低于对照组(P<0.05),CD8^(+)T和CD8^(+)T/CD3+T高于对照组(P<0.05)。研究组Th17/CD4^(+)T、Th17/Treg低于对照组(P<0.05),Treg/CD4^(+)T高于对照组(P<0.05)。研究组ROR-γtmRNA高于对照组(P<0.05),Foxp3mRNA低于对照组(P<0.05)。研究组IL-17、IL-23水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表示,Th17细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈正相关(r=0.293,P<0.05),Treg细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。结论HIV感染能降低Th17细胞、升高Treg细胞,破坏机体免疫平衡,其机制与调控转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-17、IL-23表达有关,Th17细胞、Treg细胞与HIV感染者疾病进展密切相关。

Foxp3+调节性T细胞与心肌缺血再灌注损伤概述

心肌缺血再灌注损伤与心肌梗死的面积密切相关,减少心肌缺血再灌注损伤有助于改善心肌梗死患者的预后。炎症在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用。及时消除炎症渗入,将炎症反应和修复反应在空间上限制在心肌梗死区,是实现梗死区最佳愈合的关键。Foxp3+调节性T细胞参与调节各种生理和病理的免疫炎症反应。心肌梗死后,Foxp3+调节性T细胞可促进心肌组织的再生和修复,加速心肌梗死的恢复过程。现系统综述Foxp3+调节性T细胞在心肌缺血再灌注损伤中的作用,旨在深入了解Foxp3+调节性T细胞的功能,这可能有助于设计有效的方法来控制免疫反应,为心肌梗死提供新的潜在治疗方案。

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

肺癌患者CD4^+ CD25^(high) Foxp3^+调节性T细胞的格局变化及意义

目的:研究肺癌患者外周血(PBMC)及肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中CD4+CD25h ighFoxp3+调节性T细胞(Treg)的比例改变,探讨其在抗肿瘤免疫中的调节作用。方法:分离肺癌患者PBMC及TIL,FACS分析CD4+/CD8+T细胞的比值及CD4+CD25h ighT细胞占CD4+T细胞的比例。Real-tim e PCR检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在PBMC及TIL中的表达。结果:肺癌患者PBMC及TIL中CD4+/CD8+比值降低;而CD4+CD25h ighT细胞在CD4+T细胞中所占比例升高;Foxp3基因仅在TIL中高表达,而在PBMC中低或不表达,表明肿瘤局部的CD4+CD25h ighT细胞主要是CD4+CD25h ighFoxp3+Treg。结合临床资料分析显示Treg在肺腺癌比例较高。结论:CD4+CD25h ighFoxp3+Treg在肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中明显升高,可能与其通过细胞与细胞间接触抑制CD8+T细胞的杀伤效应,最终发挥免疫抑制效应相关。

不同分期老年COPD患者外周血中CD4^＋Foxp3^＋调节性T细胞变化及其与肺功能改变的相关性

目的观察急性期、稳定期老年慢性阻塞性肺病(COPD)患者和健康人外周血中的CD 4+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)比例变化,分析Treg细胞与各期老年COPD患者肺功能改变的相关性,探讨Treg细胞在老年COPD发生发展中的作用。方法①随机选取2010年2～12月就诊我院呼吸内科的急性期老年COPD患者30例、稳定期老年COPD患者35例,分别设为实验1组和实验2组,选取同期进行社区流行病学调查的健康人25例设为对照组。所有受试者均填写统一的调查问卷,了解他们的一般情况、吸烟史等99个变量,并完善肺功能检查;②各组受试者空腹6 h后于清晨8时肘正中静脉抽取静脉血2 ml,应用细胞内染色的流式细胞术检测各组受试者外周血中Treg细胞;③多组间比较采用单因素方差分析,多组内两两比较采用SNK检验(方差齐)和Games-Howell法(方差不齐),Treg细胞的比例与肺功能关系用Spearman相关分析进行相关性检验。结果①实验1组、实验2组和对照组外周血Treg细胞比例分别为(2.62±0.68)%、(0.86±0.46)%和(1.45±0.70)%,三组结果两两比较差异显著(P<0.05);②实验1组、实验2组和对照组外周血CD4和CD25双阳性细胞比例为(3.90±1.64)%、(3.01±1.40)%和(3.78±1.83)%,三组比较无统计学意义(P>0.05);③外周血Treg细胞比例与第1秒用力呼气容积实测值与预计值比(FEV1%prep)和第1秒用力呼气容积/用力肺活量比(FEV1/FVC)均无相关性(r=-0.158、-0.188,P值分别为0.136、0.076);外周血Treg细胞比例与年龄之间无相关性(r值为0.014,P>0.05)。结论老年COPD患者体内存在免疫功能失调,Treg细胞可能参与了老年COPD的发病和急性加重过程;外周血中的CD 4+Foxp3+Treg细胞的比例与老年COPD患者肺功能无相关性。

肺岩宁方对肺癌小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞比例及Foxp3表达的影响

目的:研究肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)比例及转录因子Foxp3表达的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌细胞移植瘤模型后,将32只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组和综合治疗组。给予相应药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量、肺脏指数、脾脏指数和胸腺指数,并检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤CD4+CD25+Treg细胞的比例及Foxp3mRNA的表达。结果:肺岩宁方可降低肺癌小鼠脾脏和胸腺指数,增加去瘤体质量,减少移植瘤质量,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺岩宁方可显著降低Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中的CD4+CD25+Treg细胞比例,并抑制Foxp3mRNA的表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺岩宁方通过降低CD4+CD25+Treg细胞比例、下调Foxp3 mRNA表达而增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。

流式细胞术检测表达FoxP3的CD4^+CD25^+调节性T细胞

目的探讨转录因子FoxP3在外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)内的表达特性。方法取正常人外周血单个核细胞(PBMC),经固定/透膜处理进行细胞内染色,用流式细胞术(FCM)检测T细胞内FoxP3。以抗人CD3/CD28诱导T细胞活化,再用定量PCR及FCM术分别检测FoxP3mRNA及蛋白质表达水平。结果FoxP3主要表达于CD4+T细胞,尤其是CD25高表达的CD4+T细胞,达97%左右;中等程度表达CD25的细胞中也含有少量FoxP3阳性细胞。T细胞活化后,表达FoxP3的CD4+CD25+T细胞比例显著增高,FCM检测结果与定量PCR结果一致。结论FoxP3不仅参与维持Treg细胞的功能,也与T细胞的活化有关。FCM检测细胞核内表达的FoxP3分子为研究Treg细胞提供了一种快速、简便的方法。

氨甲蝶呤调控调节性T细胞数量及Foxp3表达在银屑病治疗中的作用

目的:探讨氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)对调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞数量及关键转录因子Foxp3 m RNA的影响。方法:1)收集初诊的寻常型银屑病患者、健康对照者和经MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑病患者入组,抽取外周抗凝静脉血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用流式细胞术(fl ow cytometry,FCM)检测Treg细胞数量,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)法检测PBMC中Foxp3 m RNA表达水平;2)将咪喹莫特(imiquimod,IMQ)连续外用在BALB/c小鼠背部,观察6 d,每天拍照记录小鼠皮损变化,根据银屑病面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)进行评分,将小鼠皮损进行HE染色观察其病理改变;3)在IMQ诱导中期(第3天)使用不同剂量MTX(38.5和77.0 nmol/L)进行小鼠腹腔内注射1次,同时设置PBS组和阴性对照组,肉眼观察各组皮损外观并用HE染色方法观察皮损组织病理改变,观察6 d;随后采用FCM检测小鼠脾淋巴细胞中Treg细胞数量,q RT-PCR法检测脾淋巴细胞Foxp3 m RNA表达水平。结果:1)在银屑病患者外周血PBMC中Treg细胞数量及Foxp3 m RNA表达水平比健康对照者明显降低(P<0.05);用MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑病患者外周血Treg细胞的数量显著高于治疗前水平(P<0.05),Foxp3 m RNA表达水平显著升高(P<0.01);2)由IMQ诱导的BALB/c小鼠表现出银屑病样的皮损外观及组织病理学改变,其脾淋巴细胞中Treg细胞数量下降(P<0.01),Foxp3m RNA表达水平降低(P<0.05);3)使用不同剂量MTX于BALB/c小鼠腹腔内注射可有效缓解其银屑病样皮炎的皮损外观、逆转病理改变,小鼠脾淋巴细胞Treg细胞数量部分逆转,Foxp3 m RNA表达水平增高(P<0.05)。结论:MTX可以通过调控Treg细胞数量及Foxp3 m RNA表达水平来治疗银屑病。

类风湿性关节炎患者CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞检测及意义

目的:研究CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞在类风湿关节炎患者(RA)外周血中的比例改变,并探讨其在疾病进程中的意义。方法:选取活动期及稳定期RA患者,采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和 mRNA水平检测FoxP3表达,并与正常人进行比较。结果:RA患者CD4和CD25双阳性细胞所占比例与对照组没有明显差异,而活动期患者外周血CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+细胞明显低于稳定期和对照组(P<0.05)。FoxP3 mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化相一致。结论:类风湿性关节炎活动期时CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了类风湿性关节炎的病理进程。

再生障碍性贫血患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞及Foxp3的变化及临床意义

目的:探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及Foxp3的表达及临床意义。方法:25例AA病人,其中含非重型再障(nSAA)18例、重型再障(SAA)7例,采用四色流式细胞检测技术分析AA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比及绝对计数,并进一步分析AA患者PBMC的CD4+CD25+、CD4+CD25low及CD4+CD25highT细胞中Foxp3+T细胞的百分比,同时利用RT-PCR方法检测PBMC中Foxp3mRNA表达水平,并与29例正常对照组的上述指标进行比较。结果:与正常对照组相比,SAA患者及nSAA患者PBMC中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+百分比及绝对计数减低(P<0.05),并且SAA组明显低于nSAA组(P<0.001);AA患者CD4+CD25+、CD4+CD25low及CD4+CD25highT细胞中Foxp3的表达较正常对照组减低(P<0.05);AA患者PBMC中Foxp3 mRNA表达水平与正常对照组没有明显差别(P>0.05)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞减低可能与AA的发病有关,SAA的Treg表达低于nSAA,为其作为AA病情变化的判断指标提供进一步的依据。

原发性肾病综合征患儿外周血Th17与CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的水平

目的：观察原发性肾病综合征（PNS）患儿外周血Th17细胞和CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T细胞（Treg）及其相关因子的水平和功能，初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法：PNS患儿分为单纯型肾病（SNS）20例、肾炎性肾病（NNS）15例；同时以20例健康体检儿童作为对照组。采用流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMC）中Th17细胞和Treg细胞比例；Real—time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达；ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、TGF-β1的水平。结果：SNS、NNS组患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19mRNA、IL-1β、IL-6的水平均明显高于正常组（P〈0．05），且NNS组患儿以上指标明显高于SNS组（P〈0．05）；SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组（P〈0．05），其中两组疾病患儿血清TGF—β1的水平无统计学意义（P〉0．05），其余指标NNS患儿均明显低于SNS组（P〈0．05）。结论：Th17／Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用，其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型、及预后有关。

Graves病患者^(131)I治疗前后CD4^+CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的变化

目的:通过对Graves病患者131I治疗前后外周血各淋巴细胞亚群和CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞含量以及相关基因Foxp3mRNA表达水平的测定,探讨131I治疗方法是否可以通过改变调节性T细胞的含量从而改善Graves病患者的免疫功能异常。方法:采集30例Graves病患者131I治疗前及治疗后1个月的外周血,流式细胞仪检测外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+CD56+淋巴细胞亚群及CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞的百分率,Real-TimePCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:和治疗前相比,Graves病患者131I治疗1个月后外周血CD3+CD4+T细胞和CD3-CD19+B细胞百分率都明显减少(P<0.05),CD3-CD16+CD56+NK细胞百分率明显增加(P<0.05),CD3-CD8+T细胞、CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞百分率和Foxp3mRNA的表达水平无明显变化。结论:131I不能通过增加调节性T细胞的含量而改善Graves病患者的免疫耐受障碍,但可以通过减少CD4+T和B淋巴细胞的含量和增加NK细胞的含量来控制过度的免疫应答。

抗痨合剂对初治肺结核患者CD4^+ CD25^+调节性T细胞及Foxp3的影响

目的:研究抗痨合剂对初治肺结核患者CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3的影响。方法:将64例初治肺结核患者随机分中药组和对照组,中药组采用2HRZE/4HR+口服抗痨合剂方案抗结核治疗,对照组采用2HRZE/4HR+口服中药安慰剂方案抗结核治疗,6个月后观察临床疗效,并采用流式细胞术检测各组患者外周血CD4+CD25+Treg细胞的含量,实时荧光定量PCR检测各组患者外周血Foxp3 mRNA的表达。结果:抗痨合剂可显著改善初治肺结核患者咳嗽、咳痰、潮热盗汗、恶心、乏力等临床症状。抗痨合剂可显著减少初治肺结核患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞数量,并下调Foxp3 mRNA表达,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:抗痨合剂的作用机制可能是通过减少CD4+CD25+Treg细胞数量、下调Foxp3 mRNA表达,调节机体免疫功能,发挥临床疗效。

老年带状疱疹后遗神经痛患者外周血CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的检测

目的探讨老年带状疱疹后遗神经痛(post herpetic neuralgia,PHN)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)和CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群分布的变化在病程中的作用及临床意义。方法采用流式细胞术检测43例老年PHN患者及20例健康对照者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群的分布情况。结果老年PHN患者外周血CD4+CD25+,CD4+CD25+Foxp3+Treg的水平显著高于健康对照组(P均<0.01);CD3+T淋巴细胞降低,CD8+T淋巴细胞升高(P<0.05),CD4+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.01)。结论老年PHN患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平显著升高,提示机体存在自身免疫调节功能的紊乱,且与病程发展紧密相关。CD4+CD25+Foxp3+Treg有可能成为老年PHN病情进展和预后的生物学指标。

大鼠急性脑缺血后CD4^+CD25^+调节性T细胞、Foxp3表达及其意义

目的动态观察大鼠急性脑缺血后不同时期外周血中CD4+CD25+调节性T细胞和脑组织中Foxp3的表达,探讨其在急性缺血性卒中病理生理演变过程中的作用。方法 48只Wistar大鼠按随机数字表法分为缺血组和假手术组。参考改良的Zea-Longer插线方法将缺血组大鼠制作成右侧大脑中动脉线栓脑缺血动物模型。采用流式细胞术和免疫组化染色检测造模后1、3、7、14 d时大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞表达和脑组织中Foxp3表达,同时采用改良NSS神经功能评分观察大鼠行为学变化。结果缺血组和假手术组大鼠神经功能缺损评分在模型制备后逐渐下降(P<0.01)。流式细胞术显示脑缺血后1、3 d时缺血组大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),7、14 d时表达明显高于假手术组(P<0.05),且与大鼠的神经功能评分呈负相关(r=-0.68,P=0.01)。免疫组化显示脑缺血后1 d时缺血组大鼠脑组织中即可观察到Foxp3表达,且主要集中在缺血灶区域,在未缺血侧也可观察到Foxp3表达,但表达量较少,而假手术组脑组织中未见Foxp3表达。结论 CD4+CD25+调节性T细胞参与了大鼠急性脑缺血后炎症免疫反应的发生发展过程,且在脑缺血后1 d时便开始参与脑缺血性损伤的免疫调节,这种免疫调节对脑细胞有着保护作用。