支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

HPV DNA负荷量、辅助性T细胞17、FoxP3+调节性T细胞及炎症因子与高危型HPV感染的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA、辅助性T细胞17(Th17)、叉头状转录因子3阳性(FoxP3^(+))调节性T细胞(Treg)及宫颈灌洗液中炎症因子与高危型HPV感染的相关性,为高危型HPV感染防治提供新思路。方法将2020年9月至2021年2月该院收治的高危型HPV感染患者100例纳入研究作为研究组,然后将其中50例高危型HPV16/18阳性患者作为HPV16/18组,50例其他12种高危型阳性病例作为其他亚型组。另外,选取同期体检的健康女性作为对照组(n=50)。比较研究组和对照组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中炎症因子[白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A]水平,比较HPV16/18组和其他亚型组各项指标水平,比较不同宫颈病变患者各项指标水平。分析各项指标与高危型HPV感染、宫颈病变的相关性,以及对宫颈病变患者高危型HPV感染的诊断价值。结果研究组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平均高于对照组(P<0.05),HPV16/18组各项指标水平均高于其他亚型组(P<0.05)。不同宫颈病变患者各项指标水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA负荷量、FoxP3^(+)Treg、Th17及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平与高危型HPV感染分型(HPV16/18=1,其他亚型=2)均呈负相关(P<0.05),与宫颈病变(宫颈上皮内瘤变Ⅰ级=1,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级=2,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级=3,宫颈癌=4)均呈正相关(P<0.05)。各项指标联合诊断高危型HPV16/18阳性的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.837~0.959),大于各指标单独诊断。结论高危型HPV感染患者HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及炎症因子水平异常,与高危型HPV感染分型、宫颈病变密切相关,而且HPV DNA负荷量与Th17、FoxP3^(+)Treg、炎症因子相关,各项指标联合检测可为临床防治高危型HPV持续感染提供可靠依据。

Foxp^(3+)调节性T细胞、CD19^(+)调节性B细胞水平与浸润性乳腺癌患者临床病理参数、免疫功能指标的相关性研究

目的探讨Foxp^(3+)调节性T细胞(Treg)、CD19^(+)调节性B细胞(Breg)水平与浸润性乳腺癌(IBCA)患者临床病理参数、免疫功能指标的相关性,为临床治疗提供参考。方法选取2019年5月至2022年12月江苏盛泽医院收治的231例IBCA患者为IBCA组,另选取同期收治的116例乳腺纤维腺瘤、导管内乳头状瘤、导管上皮内瘤变患者为非IBCA组,进行回顾性分析。收集IBCA组患者临床资料,比较两组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg、免疫功能指标水平,分析IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平在不同病理参数乳腺癌中的表达情况,分析IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平与临床病理参数、免疫功能指标的相关性。结果231例IBCA患者中,雌激素受体(ER)阳性181例,孕激素受体(PR)阳性130例,Ki67蛋白阳性率≥15%104例,Luminal A型97例,Luminal B型88例,HER2阳性15例,三阴乳腺癌(TNBC)31例。两组患者细胞毒性T(Tc)细胞、B细胞水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg、自然杀伤(NK)细胞水平均高于非IBCA组;辅助性T(Th)细胞水平、T细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均低于非IBCA组(均P<0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg在Ki-67蛋白阳性乳腺癌、Luminal B型乳腺癌、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌、TNBC中均差异表达(均P<0.05);CD19^(+)Breg在Luminal B型乳腺癌、HER2阳性乳腺癌、TNBC中均差异表达(均P<0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg水平与Ki67蛋白阳性率、Luminal B型、HER2阳性、TNBC、NK细胞水平均呈正相关,与Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关;CD19^(+)Breg水平与Luminal B型、HER2阳性、TNBC、NK细胞水平均呈正相关,与Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关。结论IBCA患者外周血中Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平的升高与IBCA分子亚型相关,且存在免疫功能障碍,表现为NK细胞水平上升,Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值下降。在IBCA患者的综合治疗中,合理调节免疫功能,有助于延缓疾病进展,改善预后。

辅助性T细胞17/调节性T细胞及维甲酸相关孤儿受体γt/叉头框转录因子P3失衡在妊娠相关疾病中的研究进展

在免疫学领域,妊娠相当于一次成功的半同种移植现象,母体对半异体胎儿的免疫耐受情况关乎妊娠的结局。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是最新发现的CD^(+)_(4)T淋巴细胞亚群,相关转录因子维甲酸相关孤儿受体γt和叉头框转录因子P3的表达水平与Th17/Treg之间的平衡密切相关。Th17/Treg免疫失衡会导致母体对胎儿的异常攻击,造成母胎耐受紊乱,并与复发性流产、先兆子痫、妊娠糖尿病等病理妊娠有关。

汉黄芩素调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/核因子κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的探讨汉黄芩素(Wog)调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法2022年8-12月,大鼠采用随机数字表法分为Model组、低剂量Wog组(Wog-L组,50 mg/kg)、高剂量Wog组(Wog-H组,100 mg/kg)、阳性药物氨茶碱组(Ami组,2.3 mg/kg)、IGF-1(PI3K激活剂)组(1.33 mg/kg)、Wog-H+IGF-1组(100 mg/kg+1.33 mg/kg)、对照组(CK组),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均需利用烟熏法联合气管滴注脂多糖(LPS)的方法构建COPD模型,建模成功24 h后,进行给药处理,每天1次给药,持续4周。检测呼气峰流量(PEF)、每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIF);流式细胞术检测外周血中Th17/Treg;HE染色检测肺组织病理;酶联免疫吸附法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;蛋白质印迹法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白。结果与CK组比较,Model组大鼠PEF(12.56±0.47比8.72±0.39)、PIF(9.35±0.32比7.24±0.17)、MV(132.26±5.78比96.63±3.28)、Treg(31.18±2.62比15.52±1.01)比例、IL-10(23.35±1.16比8.85±0.27)明显降低(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(33.36±1.48比49.78±1.73)、气道炎症评分(0比4.56±0.23)及IL-17(75.83±3.60比185.56±8.62)水平明显升高(均P<0.05)。与Model组比较,Wog-L组、Wog-H组PEF(9.66±0.40,11.49±0.51)、PIF(8.28±0.19,9.03±0.22)、MV(105.54±4.11,126.67±5.72)、Treg(19.93±1.18,27.73±2.05)比例、IL-10(11.56±0.33,20.72±0.59)水平明显升高(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(43.45±1.26,35.78±1.12)、气道炎症评分(3.75±0.17,0.86±0.07)、IL-17(162.27±7.14,103.35±4.33)水平明显降低(均P<0.05)。与CK组比较,Model组大鼠RORγt(0.15±0.01比1.34±0.11)、p-PI3K(0.22±0.01比0.86±0.07)、p-Akt(0.18±0.01比0.75±0.06)、p-NF-κB p65(0.11±0.01比0.69±0.06)蛋白表达升高,Foxp3(1.45±0.27比0.35±0.02)蛋白表达降低(均P<0.05)。与Model组相比,Wog-L组、Wog-H组RORγt(1.08±0.10,0.36±0.02)、p-PI3K(0.71±0.06,0.35±0.03)、p-Akt(0.62±0.06,0.28±0.02)、p-NF-κB p65(0.52±0.05,0.26±0.02)蛋白表达明显降低,Foxp3(0.57±0.04,1.13±0.09)蛋白表达明显升高(均P<0.05)。Wog-H组与Ami组大鼠上述各指标水平近似,均差异无统计学意义(P>0.05)。IGF-1逆转了高剂量Wog对COPD大鼠Th17/Treg的影响。结论Wog促进COPD大鼠Th17/Treg平衡的机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB通路有关。

Th17和调节性T细胞在人类免疫缺陷病毒疾病进展中的作用及其调控机制

目的本研究通过观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血Th17、Treg细胞及其相关转录因子、细胞因子的表达,进一步揭示Th17、Treg细胞的调控机制及其在HIV感染者疾病进展中的作用。方法选取2019年1月—2019年10月河南省上蔡县HIV感染者80例作为研究组,选取同地区健康人群20例作为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T及外周血单个核细胞Th17、Treg,酶联免疫吸附试验检测血浆中细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-23水平,实时聚合酶链反应检测转录因子ROR-γt及Foxp3 mRNA表达,Pearson法分析Th17、Treg与CD4^(+)T的相关性。结果研究组CD4^(+)T、CD4^(+)T/CD3+T、CD4^(+)T/CD8^(+)T低于对照组(P<0.05),CD8^(+)T和CD8^(+)T/CD3+T高于对照组(P<0.05)。研究组Th17/CD4^(+)T、Th17/Treg低于对照组(P<0.05),Treg/CD4^(+)T高于对照组(P<0.05)。研究组ROR-γtmRNA高于对照组(P<0.05),Foxp3mRNA低于对照组(P<0.05)。研究组IL-17、IL-23水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表示,Th17细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈正相关(r=0.293,P<0.05),Treg细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。结论HIV感染能降低Th17细胞、升高Treg细胞,破坏机体免疫平衡,其机制与调控转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-17、IL-23表达有关,Th17细胞、Treg细胞与HIV感染者疾病进展密切相关。

Foxp3+调节性T细胞与心肌缺血再灌注损伤概述

心肌缺血再灌注损伤与心肌梗死的面积密切相关,减少心肌缺血再灌注损伤有助于改善心肌梗死患者的预后。炎症在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用。及时消除炎症渗入,将炎症反应和修复反应在空间上限制在心肌梗死区,是实现梗死区最佳愈合的关键。Foxp3+调节性T细胞参与调节各种生理和病理的免疫炎症反应。心肌梗死后,Foxp3+调节性T细胞可促进心肌组织的再生和修复,加速心肌梗死的恢复过程。现系统综述Foxp3+调节性T细胞在心肌缺血再灌注损伤中的作用,旨在深入了解Foxp3+调节性T细胞的功能,这可能有助于设计有效的方法来控制免疫反应,为心肌梗死提供新的潜在治疗方案。

叉头框蛋白P3阳性调节性T细胞和程序性死亡受体1/程序性死亡受体配体1通路在早期胃癌中的表达及相关性分析

目的探讨叉头框蛋白P3阳性调节性T细胞(FOXP3+Tregs)与程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在早期胃癌患者中的表达及相关性。方法收集2020年10月至2022年6月南京市浦口区中医院收治的早期胃癌患者(早期胃癌组)和慢性胃炎患者的胃黏膜组织(对照组)各10例,采用组织免疫荧光法分别检测早期胃癌组和对照组的胃黏膜组织中FOXP3+Tregs及PD-1/PD-L1通路的表达情况,分析早期胃癌组织中两者表达的相关性。结果早期胃癌组FOXP3+Tregs、PD-1、PD-L1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。早期胃癌组胃黏膜组织中FOXP3+Tregs分别与PD-1、PD-L1表达水平呈正相关(r>0,P<0.01)。结论早期胃癌组织中存在FOXP3+Tregs和PD-1/PD-L1通路的共同表达,提示联合二者可为临床早期胃癌的判定提供重要参考。

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

肺癌患者CD4^+ CD25^(high) Foxp3^+调节性T细胞的格局变化及意义

目的:研究肺癌患者外周血(PBMC)及肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中CD4+CD25h ighFoxp3+调节性T细胞(Treg)的比例改变,探讨其在抗肿瘤免疫中的调节作用。方法:分离肺癌患者PBMC及TIL,FACS分析CD4+/CD8+T细胞的比值及CD4+CD25h ighT细胞占CD4+T细胞的比例。Real-tim e PCR检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在PBMC及TIL中的表达。结果:肺癌患者PBMC及TIL中CD4+/CD8+比值降低;而CD4+CD25h ighT细胞在CD4+T细胞中所占比例升高;Foxp3基因仅在TIL中高表达,而在PBMC中低或不表达,表明肿瘤局部的CD4+CD25h ighT细胞主要是CD4+CD25h ighFoxp3+Treg。结合临床资料分析显示Treg在肺腺癌比例较高。结论:CD4+CD25h ighFoxp3+Treg在肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中明显升高,可能与其通过细胞与细胞间接触抑制CD8+T细胞的杀伤效应,最终发挥免疫抑制效应相关。

不同分期老年COPD患者外周血中CD4^＋Foxp3^＋调节性T细胞变化及其与肺功能改变的相关性

目的观察急性期、稳定期老年慢性阻塞性肺病(COPD)患者和健康人外周血中的CD 4+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)比例变化,分析Treg细胞与各期老年COPD患者肺功能改变的相关性,探讨Treg细胞在老年COPD发生发展中的作用。方法①随机选取2010年2～12月就诊我院呼吸内科的急性期老年COPD患者30例、稳定期老年COPD患者35例,分别设为实验1组和实验2组,选取同期进行社区流行病学调查的健康人25例设为对照组。所有受试者均填写统一的调查问卷,了解他们的一般情况、吸烟史等99个变量,并完善肺功能检查;②各组受试者空腹6 h后于清晨8时肘正中静脉抽取静脉血2 ml,应用细胞内染色的流式细胞术检测各组受试者外周血中Treg细胞;③多组间比较采用单因素方差分析,多组内两两比较采用SNK检验(方差齐)和Games-Howell法(方差不齐),Treg细胞的比例与肺功能关系用Spearman相关分析进行相关性检验。结果①实验1组、实验2组和对照组外周血Treg细胞比例分别为(2.62±0.68)%、(0.86±0.46)%和(1.45±0.70)%,三组结果两两比较差异显著(P<0.05);②实验1组、实验2组和对照组外周血CD4和CD25双阳性细胞比例为(3.90±1.64)%、(3.01±1.40)%和(3.78±1.83)%,三组比较无统计学意义(P>0.05);③外周血Treg细胞比例与第1秒用力呼气容积实测值与预计值比(FEV1%prep)和第1秒用力呼气容积/用力肺活量比(FEV1/FVC)均无相关性(r=-0.158、-0.188,P值分别为0.136、0.076);外周血Treg细胞比例与年龄之间无相关性(r值为0.014,P>0.05)。结论老年COPD患者体内存在免疫功能失调,Treg细胞可能参与了老年COPD的发病和急性加重过程;外周血中的CD 4+Foxp3+Treg细胞的比例与老年COPD患者肺功能无相关性。

肺岩宁方对肺癌小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞比例及Foxp3表达的影响

目的:研究肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)比例及转录因子Foxp3表达的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌细胞移植瘤模型后,将32只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组和综合治疗组。给予相应药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量、肺脏指数、脾脏指数和胸腺指数,并检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤CD4+CD25+Treg细胞的比例及Foxp3mRNA的表达。结果:肺岩宁方可降低肺癌小鼠脾脏和胸腺指数,增加去瘤体质量,减少移植瘤质量,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺岩宁方可显著降低Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中的CD4+CD25+Treg细胞比例,并抑制Foxp3mRNA的表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺岩宁方通过降低CD4+CD25+Treg细胞比例、下调Foxp3 mRNA表达而增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。

流式细胞术检测表达FoxP3的CD4^+CD25^+调节性T细胞

目的探讨转录因子FoxP3在外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)内的表达特性。方法取正常人外周血单个核细胞(PBMC),经固定/透膜处理进行细胞内染色,用流式细胞术(FCM)检测T细胞内FoxP3。以抗人CD3/CD28诱导T细胞活化,再用定量PCR及FCM术分别检测FoxP3mRNA及蛋白质表达水平。结果FoxP3主要表达于CD4+T细胞,尤其是CD25高表达的CD4+T细胞,达97%左右;中等程度表达CD25的细胞中也含有少量FoxP3阳性细胞。T细胞活化后,表达FoxP3的CD4+CD25+T细胞比例显著增高,FCM检测结果与定量PCR结果一致。结论FoxP3不仅参与维持Treg细胞的功能,也与T细胞的活化有关。FCM检测细胞核内表达的FoxP3分子为研究Treg细胞提供了一种快速、简便的方法。

氨甲蝶呤调控调节性T细胞数量及Foxp3表达在银屑病治疗中的作用

目的:探讨氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)对调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞数量及关键转录因子Foxp3 m RNA的影响。方法:1)收集初诊的寻常型银屑病患者、健康对照者和经MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑病患者入组,抽取外周抗凝静脉血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用流式细胞术(fl ow cytometry,FCM)检测Treg细胞数量,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)法检测PBMC中Foxp3 m RNA表达水平;2)将咪喹莫特(imiquimod,IMQ)连续外用在BALB/c小鼠背部,观察6 d,每天拍照记录小鼠皮损变化,根据银屑病面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)进行评分,将小鼠皮损进行HE染色观察其病理改变;3)在IMQ诱导中期(第3天)使用不同剂量MTX(38.5和77.0 nmol/L)进行小鼠腹腔内注射1次,同时设置PBS组和阴性对照组,肉眼观察各组皮损外观并用HE染色方法观察皮损组织病理改变,观察6 d;随后采用FCM检测小鼠脾淋巴细胞中Treg细胞数量,q RT-PCR法检测脾淋巴细胞Foxp3 m RNA表达水平。结果:1)在银屑病患者外周血PBMC中Treg细胞数量及Foxp3 m RNA表达水平比健康对照者明显降低(P<0.05);用MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑病患者外周血Treg细胞的数量显著高于治疗前水平(P<0.05),Foxp3 m RNA表达水平显著升高(P<0.01);2)由IMQ诱导的BALB/c小鼠表现出银屑病样的皮损外观及组织病理学改变,其脾淋巴细胞中Treg细胞数量下降(P<0.01),Foxp3m RNA表达水平降低(P<0.05);3)使用不同剂量MTX于BALB/c小鼠腹腔内注射可有效缓解其银屑病样皮炎的皮损外观、逆转病理改变,小鼠脾淋巴细胞Treg细胞数量部分逆转,Foxp3 m RNA表达水平增高(P<0.05)。结论:MTX可以通过调控Treg细胞数量及Foxp3 m RNA表达水平来治疗银屑病。

类风湿性关节炎患者CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞检测及意义

目的:研究CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞在类风湿关节炎患者(RA)外周血中的比例改变,并探讨其在疾病进程中的意义。方法:选取活动期及稳定期RA患者,采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和 mRNA水平检测FoxP3表达,并与正常人进行比较。结果:RA患者CD4和CD25双阳性细胞所占比例与对照组没有明显差异,而活动期患者外周血CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+细胞明显低于稳定期和对照组(P<0.05)。FoxP3 mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化相一致。结论:类风湿性关节炎活动期时CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了类风湿性关节炎的病理进程。

再生障碍性贫血患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞及Foxp3的变化及临床意义

目的:探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及Foxp3的表达及临床意义。方法:25例AA病人,其中含非重型再障(nSAA)18例、重型再障(SAA)7例,采用四色流式细胞检测技术分析AA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比及绝对计数,并进一步分析AA患者PBMC的CD4+CD25+、CD4+CD25low及CD4+CD25highT细胞中Foxp3+T细胞的百分比,同时利用RT-PCR方法检测PBMC中Foxp3mRNA表达水平,并与29例正常对照组的上述指标进行比较。结果:与正常对照组相比,SAA患者及nSAA患者PBMC中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+百分比及绝对计数减低(P<0.05),并且SAA组明显低于nSAA组(P<0.001);AA患者CD4+CD25+、CD4+CD25low及CD4+CD25highT细胞中Foxp3的表达较正常对照组减低(P<0.05);AA患者PBMC中Foxp3 mRNA表达水平与正常对照组没有明显差别(P>0.05)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞减低可能与AA的发病有关,SAA的Treg表达低于nSAA,为其作为AA病情变化的判断指标提供进一步的依据。

原发性肾病综合征患儿外周血Th17与CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的水平

目的：观察原发性肾病综合征（PNS）患儿外周血Th17细胞和CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T细胞（Treg）及其相关因子的水平和功能，初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法：PNS患儿分为单纯型肾病（SNS）20例、肾炎性肾病（NNS）15例；同时以20例健康体检儿童作为对照组。采用流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMC）中Th17细胞和Treg细胞比例；Real—time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达；ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、TGF-β1的水平。结果：SNS、NNS组患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19mRNA、IL-1β、IL-6的水平均明显高于正常组（P〈0．05），且NNS组患儿以上指标明显高于SNS组（P〈0．05）；SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组（P〈0．05），其中两组疾病患儿血清TGF—β1的水平无统计学意义（P〉0．05），其余指标NNS患儿均明显低于SNS组（P〈0．05）。结论：Th17／Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用，其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型、及预后有关。

Graves病患者^(131)I治疗前后CD4^+CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的变化

目的:通过对Graves病患者131I治疗前后外周血各淋巴细胞亚群和CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞含量以及相关基因Foxp3mRNA表达水平的测定,探讨131I治疗方法是否可以通过改变调节性T细胞的含量从而改善Graves病患者的免疫功能异常。方法:采集30例Graves病患者131I治疗前及治疗后1个月的外周血,流式细胞仪检测外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+CD56+淋巴细胞亚群及CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞的百分率,Real-TimePCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:和治疗前相比,Graves病患者131I治疗1个月后外周血CD3+CD4+T细胞和CD3-CD19+B细胞百分率都明显减少(P<0.05),CD3-CD16+CD56+NK细胞百分率明显增加(P<0.05),CD3-CD8+T细胞、CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞百分率和Foxp3mRNA的表达水平无明显变化。结论:131I不能通过增加调节性T细胞的含量而改善Graves病患者的免疫耐受障碍,但可以通过减少CD4+T和B淋巴细胞的含量和增加NK细胞的含量来控制过度的免疫应答。

抗痨合剂对初治肺结核患者CD4^+ CD25^+调节性T细胞及Foxp3的影响

目的:研究抗痨合剂对初治肺结核患者CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3的影响。方法:将64例初治肺结核患者随机分中药组和对照组,中药组采用2HRZE/4HR+口服抗痨合剂方案抗结核治疗,对照组采用2HRZE/4HR+口服中药安慰剂方案抗结核治疗,6个月后观察临床疗效,并采用流式细胞术检测各组患者外周血CD4+CD25+Treg细胞的含量,实时荧光定量PCR检测各组患者外周血Foxp3 mRNA的表达。结果:抗痨合剂可显著改善初治肺结核患者咳嗽、咳痰、潮热盗汗、恶心、乏力等临床症状。抗痨合剂可显著减少初治肺结核患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞数量,并下调Foxp3 mRNA表达,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:抗痨合剂的作用机制可能是通过减少CD4+CD25+Treg细胞数量、下调Foxp3 mRNA表达,调节机体免疫功能,发挥临床疗效。

老年带状疱疹后遗神经痛患者外周血CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的检测

目的探讨老年带状疱疹后遗神经痛(post herpetic neuralgia,PHN)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)和CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群分布的变化在病程中的作用及临床意义。方法采用流式细胞术检测43例老年PHN患者及20例健康对照者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群的分布情况。结果老年PHN患者外周血CD4+CD25+,CD4+CD25+Foxp3+Treg的水平显著高于健康对照组(P均<0.01);CD3+T淋巴细胞降低,CD8+T淋巴细胞升高(P<0.05),CD4+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.01)。结论老年PHN患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平显著升高,提示机体存在自身免疫调节功能的紊乱,且与病程发展紧密相关。CD4+CD25+Foxp3+Treg有可能成为老年PHN病情进展和预后的生物学指标。