转录因子Foxq1通过WNT/β-catenin信号通路影响绒山羊毛囊干细胞增殖的研究

旨在探究陕北白绒山羊毛囊诱导期(E 66)和分化期(E 120)皮肤组织差异表达基因Foxq 1在绒山羊毛囊干细胞(HFSCs)中的功能。本研究选择年龄、体重基本一致的6只健康妊娠陕北白绒山羊母羊,在胚胎期E 66(n=3)和E 120(n=3)分别采集胎儿背部皮肤组织。将pAd-Foxq1和pAd-Blank过表达腺病毒分别侵染HFSCs,利用EdU、MTT及流式细胞等方法检测Foxq 1对HFSCs增殖的影响;利用qPCR和免疫荧光试验检测Wnt信号通路激活的标记因子CTNNB 1及Wnt信号通路下游基因的表达情况。qPCR结果表明,Foxq 1在绒山羊E 66和E 120皮肤组织差异表达(P<0.001),与测序数据一致;荧光显微镜下观察到彗星尾状荧光出现,表明Foxq 1腺病毒包装成功,且qPCR结果显示Foxq 1的过表达效率高达40000多倍(P<0.0001)。EdU和MTT结果表明,过表达Foxq 1后,毛囊干细胞的活力显著增强(P<0.05),EdU阳性细胞数量显著升高(P<0.01)。流式细胞周期结果显示,过表达Foxq 1后S期细胞比率显著升高。qPCR结果表明,过表达Foxq 1后CTNNB1、TCF 3及CYCLIND 1基因的mRNA表达量显著升高(P<0.05),免疫荧光进一步证明过表达Foxq 1后CTNNB1、TCF3及CYCLIND1蛋白水平的表达量显著升高。本研究发现,Foxq 1能够激活Wnt/β-catenin信号通路从而促进HFSCs的增殖,揭示了Foxq 1通过WNT/β-catenin信号通路影响绒山羊毛囊干细胞增殖的分子机理。

转录因子FoxQ1在肺癌患者血浆中表达及预后价值

目的探讨血浆转录因子叉头框Q1基因(FoxQ1)表达水平与肺癌发病风险的关系及其在肺癌预后中价值。方法收集内蒙古自治区肿瘤医院接受治疗的肺癌患者90例为肺癌组,同期年龄、性别与肺癌患者相匹配的90例健康体检人群为对照组。采集外周血液样本,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆FoxQ1表达,分析血浆FoxQ1蛋白表达水平与肺癌发病风险的关系,通过Kaplan-Meier来分析血浆FoxQ1表达在肺癌预后诊断中的价值。结果肺癌组血浆FoxQ1表达水平显著高于对照组(P<0.05),晚期患者(TNM分期Ⅲ和Ⅳ期)血浆FoxQ1的表达水平显著高于早期患者(TNM分期为Ⅰ和Ⅱ期,P<0.01)。以健康人群为参照,与FoxQ1表达低的个体相比,血浆FoxQ1表达高的个体肺癌发病风险显著上升(P<0.05)。FoxQ1低表达者中位生存时间显著高于高表达者(P<0.01)。结论血浆FoxQ1表达水平升高与肺癌发病风险升高显著正相关,FoxQ1高表达患者预后不良,可用于临床病情评估。

FOXQ1敲除乳腺癌MCF7细胞株的构建及其功能初探

目的:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在乳腺癌细胞MCF7中稳定敲除FOXQ1,并初探其在缺氧环境中的功能。方法:Cas9慢病毒感染MCF7构建工具细胞,在工具细胞中分别转染靶向3个不同靶位点的FOXQ1-crRNA+tracrRNA,用T7E1酶筛选出编辑效率高的细胞挑取单克隆细胞株;利用T7E1酶、Sanger测序和Western印迹检测FOXQ1基因的编辑和表达情况;Western印迹检测常氧/缺氧条件下细胞FOXQ1表达情况;在常氧/缺氧条件下通过划痕实验和transwell实验检测细胞迁移能力;通过METABRIC数据库分析乳腺癌中FOXQ1与HIF1A及其编码蛋白靶基因LOX、LDHA和GLUT3表达的相关性。结果:筛选出转染靶向CCCGTGCGCATCCAGGACAT序列的FOXQ1-crRNA的细胞具有最高编辑效率;T7E1酶切、Sanger测序和Western印迹结果显示稳定敲除FOXQ1的乳腺癌MCF7细胞构建成功;缺氧促进MCF7细胞FOXQ1的表达;缺氧促进MCF7的迁移能力(t=3.78,P<0.01;t=11.94,P<0.001),敲除FOXQ1后缺氧对MCF7迁移能力的促进作用被抑制(t=0.63,P=0.55;t=2.54,P=0.064)、(t=2.46,P<0.05;t=4.95,P<0.05),乳腺癌中FOXQ1与HIF1A、LOX、LDHA和GLUT3的表达均显著正相关(P<0.0001)。结论:通过CRISPR/Cas9系统成功构建了FOXQ1基因稳定敲除的乳腺癌MCF7细胞株,并发现FOXQ1介导了缺氧对MCF7细胞迁移能力的促进作用,为进一步探究乳腺癌的缺氧微环境中FOXQ1的功能及其机制奠定了基础。

FOXQ1在肿瘤发生发展中的作用及其调节机制

作为叉头盒子(Forkhead box,FOX)蛋白家族成员之一,FOXQ1(Forkhead box Q1,FOXQ1)是调节细胞分化的转录因子,参与人体内多种生理、病理过程。近年来发现FOXQ1与多种人类肿瘤的发生发展密切相关,可通过Wnt/β-catenin、转化生长因子-β、伏隔核相关蛋白-1、血小板衍生生长因子受体、表皮生长因子受体等多条信号通路参与肿瘤的增殖、炎症、迁移、侵袭、上皮-间质转化和血管生成等生物学进程,在结直肠癌,乳腺癌,肝癌和胶质瘤等恶性肿瘤中扮演重要角色。同时FOXQ1也受到多种非编码RNA的调控。另有研究表明FOXQ1可与抗肿瘤药物相互作用,抑制肿瘤的侵袭。随着对FOXQ1在肿瘤中作用机制的研究愈加深入,FOXQ1很可能成为肿瘤诊断、预后判断的生物标志物和治疗靶点。本文就FOXQ1在肿瘤发生发展中的作用,参与的信号通路,调节机制以及FOXQ1与肿瘤防治的研究进展做一综述,以期为肿瘤的精准治疗提供更多的理论依据。

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

研究Sonic Hedgehog信号通路(SHH)是否参与转录因子叉头框Q1基因(FOXQ1)引起胃癌细胞凋亡。观察癌旁组织及癌灶周围淋巴结转移瘤对该信号通路的影响并分析其机制。方法 采用qRT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),qRT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。通过对以上指标进行比较分析,探讨了不同胃癌细胞间以及同一胃癌细胞系内两种癌细胞之间是否存在差异。结果 FOXQ1在胃粘膜上皮细胞GES-1中的表达明显低于胃癌细胞(P<0.05),FOXQ1在胃癌SGC-7901细胞中的表达最高,可作为后续实验研究的对象。结论 胃癌细胞内FOXQ1基因高度表达;SHH信号通路与FOXQ1基因有关,其诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡是通过上调Bax及Cleaved Caspase3等蛋白的表达而实现。

FOXQ1促进肝癌细胞系SMMC-7721细胞的增殖

Forkhead Box Q1(FOXQ1)是FOX家族的重要成员之一,在许多肿瘤中异常高表达,而FOXQ1在肝癌中的研究甚少。本研究通过重组慢病毒载体介导的FOXQ1 shRNA感染肝癌SMMC-7721细胞,敲减FOXQ1的表达,研究FOXQ1对SMMC-7721细胞增殖的影响。CCK8法、倍增时间及集落形成实验显示,敲减FOXQ1导致细胞生长减慢,倍增时间延长,细胞集落形成能力减弱。流式细胞技术检测证明,与对照比较,敲减FOXQ1的表达可显著增加G1期细胞、减少S期细胞,提示G1期阻滞。qRT-PCR和Western印迹法显示,cyclin D1和c-Myc表达下调,其可能与G1阻滞有关。上述结果提示,沉默FOXQ1的表达能够抑制SMMC-7721细胞增殖,其机制可能与cyclin D1和c-Myc的下调有关。

慢病毒表达载体的构建及沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达

目的:构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达.方法:根据FOXQ1基因的序列,设计合成3对shRNA干扰序列,退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro,将重组质粒转化至STBl3感受态中,涂板培养挑取单菌落,摇菌后小提质粒,选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提,将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev、pMDlg-pRRE和pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞,收集病毒上清,感染目的细胞DLD-1,嘌呤霉素筛选FOXQ1沉默细胞,经荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果.结果:酶切及测序结果显示shRNA成功插入载体PLKO.1-puro中,共转染293-T细胞成功获取病毒上清,感染DLD1细胞,经嘌呤霉素筛选出FOXQ1沉默细胞,荧光定量PCR及Western blot鉴定FOXQ1基因表达最高抑制率为90.4%.结论:通过构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,成功获取FOXQ1基因沉默细胞.为后续FOXQ1基因在肿瘤发生发展的研究奠定实验基础.

FoxQ1在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后

目的:研究Fox Q1在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:在组织水平,应用免疫组织化学En Vision法检测91例食管鳞状细胞癌组织及相应癌旁组织Fox Q1的表达,并分析其表达与临床病理特征及预后之间的关系。结果:1)Fox Q1在食管鳞状细胞癌组织及配对正常食管组织中的阳性表达率分别为:62.6%(57/91)和23.1%(21/91),差异有统计学意义(P<0.05);Fox Q1的表达与肿瘤浸润深度、临床分期及预后相关(P<0.05)。经Kaplan-Meier法生存比较,Fox Q1的阳性表达者比阴性表达者生存期短(P<0.05);多因素Cox比例风险模型分析显示,Fox Q1可以作为判断食管鳞状细胞癌预后的独立因素(P<0.05)。结论:Fox Q1在食管鳞状细胞癌组织中高表达,其表达水平与食管鳞癌发生发展及预后密切相关。有望成为评估食管鳞状细胞癌预后的有效指标。

沉默FOXQ1可逆转SW480细胞的上皮-间质转化

FOXQ1是FOX家族的的重要成员之一,其参与了多种人类肿瘤的上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT).本研究设计合成了FOXQ1基因的shRNA(short hairpin RNA),用此转染SW480细胞,通过显微镜观察细胞形态,Transwell小室、细胞黏附试验检测转移能力及黏附能力,以探索FOXQ1与结直肠癌细胞EMT的关系.结果显示,沉默FOXQ1后,SW480细胞顶底极性及细胞间紧密连接增加,侵袭、迁移的细胞数目减少,同种黏附能力增加,异种黏附能力降低.进一步的机制研究表明,沉默FOXQ1基因可以导致SW480细胞的上皮标志因子E-cadherin表达显著增高,而间质细胞标志因子N-cadherin、Vimentin及MMP2表达均降低.以上结果表明,沉默FOXQ1基因可以逆转SW480细胞EMT,其机制可能与E-cadherin的上调和N-cadherin、Vimentin、MMP2的下调有关,这为进一步研究FOXQ1在结直肠癌发生发展中的作用提供实验基础.

大肠癌细胞FoxQ1与EGFR基因表达的相关性

目的探讨大肠癌细胞中FoxQ1与EGFR基因间的相关性,为研究大肠癌中FoxQ1基因在EGFR通路中的作用机制奠定基础。方法应用荧光定量PCR以293-T细胞中FoxQ1及EGFR基因相对表达量为1作为参照,检测大肠癌细胞系DLD1、HT29、LOVO、HCT116中FoxQ1及EGFR基因mRNA相对表达量;荧光定量检测经shRNA-FoxQ1慢病毒干扰后的DLD1细胞(命名为DLD1-shRNAFoxQ1)中EGFR的相对表达量改变;DLD1-shRNA-FoxQ1经EGFR酪氨酸激酶抑制剂Erlotinib HCl和siRNA-EGFR处理后,荧光定量PCR分别检测FoxQ1和EGFR基因mRNA相对表达量。结果(1)FoxQ1在DLD1、HT29、LOVO、HCT116细胞系中的相对表达量分别为83.09、59.58、0.06、0.03,EGFR的相对表达量分别为4.95、3.67、2.08、1.36;(2)经shRNA-FoxQ1干扰的DLD1细胞EGFR表达量随FoxQ1表达量的降低而增高;(3)细胞DLD1-shRNA-FoxQ1、DLD1-shRNA-Control分别经siRNA-EGFR处理抑制EGFR的表达后,FoxQ1表达量随EGFR表达量的降低而增高,经Erlotinib HC1阻断EGFR酪氨酸激酶后,FoxQ1表达量增高。结论大肠癌细胞系中FoxQ1与EGFR基因的表达趋势基本一致;同时两者间可能相互存在负反馈调节机制,从而维持大肠癌细胞中FoxQ1与EGFR高表达的状态。

NAC1、FOXQ1在不同级别卵巢浆液性癌组织中表达及其临床意义

目的通过检测伏隔核相关因子1(NAC1)、FOXQ1在卵巢浆液性癌中的表达情况,探讨NAC1、FOXQ1在卵巢浆液性癌发生、发展及侵袭中的可能作用和临床意义。方法选取卵巢浆液性癌标本80例,其中低级别浆液癌36例,高级别浆液性癌44例。选取同期卵巢肿瘤40例患者,其中20例为卵巢浆液性囊腺瘤,20例为卵巢交界性浆液性囊腺瘤;另取正常卵巢组织标本20例进行对照。采用免疫组化法检测NAC1、FOXQ1各组织中的表达情况,并分析其与病理分期、淋巴结转移及其患者预后生存率的关系。结果 NAC1在浆液性囊腺瘤、正常组织中无表达,在交界性囊腺瘤呈弱阳性,在低、高级别卵巢浆液性癌组织中表达率分别为44.4%、59.1%,差异有统计学意义(P<0.05);FOXQ1在恶性卵巢肿瘤、交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中均有表达,FOXQ1在高级别浆液性卵巢癌、低级别浆液性卵巢癌、交界性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤、正常卵巢组织中的阳性表达分别呈逐渐降低趋势(P<0.05);NAC1、FOXQ1在高级别浆液性癌组织中不同病理分期阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),随病理分期增加阳性表达呈递增趋势;NAC1、FOXQ1在高级别浆液性癌阳性表达淋巴结转移情况大于低级别,差异有统计学意义(P<0.05);高级别卵巢浆液性癌中NAC1、FOXQ1阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05),而5年生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NAC1、FOXQ1在卵巢高级别浆液性癌中阳性表达最强,二者可能参与了卵巢高级别浆液性腺癌的发病过程,NAC1、FOXQ1过表达与高级别卵巢浆液性癌患者的生存率有关,可作为一个独立的卵巢癌不良预后指标。

构建慢病毒载体介导RNA干扰沉默肝癌细胞Foxq1的表达

目的构建慢病毒载体将Foxq1干扰序列递达到人肝癌7721细胞中,观察该细胞中Foxq1的表达并评估慢病毒载体的有效性。方法体外合成与筛选具有Foxq1干扰功能的核酸片段(siRNA Foxq1),通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中,利用包装细胞(293T)将三质粒系统组装为完整的逆转录慢病毒颗粒,然后感染肝癌细胞。采用Western blot和RT-qPCR分别检测Foxq1蛋白和mRNA表达。同时构建与检测不含有siRNA Foxq1序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照组。结果 Foxq1-834-siRNA具有较强的抑制Foxq1 mRNA功能,其抑制效率达90.17%;基因测序证实体外合成的siRNA Foxq1基因序列成功插入到慢病毒转移质粒中;荧光显微镜观察证明肝癌细胞中持续表达Foxq1-834-siRNA的绿色荧光信号,且信号强度随时间推移逐渐增强;采用RT-qPCR和Western blot检测结果证实慢病毒载体感染的细胞中Foxq1 mRNA和蛋白表达量较对照组明显下降(P<0.001)。结论筛选到有效抑制Foxq1的siRNA Foxq1序列,通过构建慢病毒载体感染细胞能有效的将体外合成的siRNA Foxq1递达到癌细胞中,并能抑制癌细胞中Foxq1的表达,为进一步研究肝癌中Foxq1的功能提供有效的工具。

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(FOXQ1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法:采用q RT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),q RT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因和蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。结果:FOXQ1在胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达显著低于胃癌细胞(P<0.05),胃癌SGC-7901细胞中FOXQ1的表达最高,作为后续实验研究对象。转染FOXQ1 siRNA后SGC-7901细胞中FOXQ1的表达显著下降(P<0.05)。si-FOXQ1组凋亡率及Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于si-Control组(P<0.05),而SHH、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达显著低于si-Control组(P<0.05)。Normal组和si-Control组间以上各指标差异无统计学意义(P>0.05)。SHH特异性激活剂purmorphamine能够逆转转染FOXQ1 siRNA诱导的SGC-7901细胞凋亡。结论:FOXQ1基因在胃癌细胞中呈高表达,SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,通过上调Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达来实现。

FOXQ1在卵巢高 低级别浆液性癌中的阳性表达与淋巴结转移及其远期生存率的关系

目的分析FOXQ1在卵巢高、低级别浆液性癌中的阳性表达与淋巴结转移及其远期生存率的关系。方法选取我院80份卵巢浆液性癌标本,选取同期收治的卵巢肿瘤患者40例;另选取子宫肌瘤切除术中切除正常卵巢组织标本20例进行对照。采用免疫组织化学法染色,统计FOXQ1在卵巢不同组织中的阳性表达,分析其与淋巴结转移及其患者预后生存率的关系。结果 FOXQ1在恶性卵巢肿瘤、交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中均有表达,FOXQ1在高级别浆液性卵巢癌、低级别浆液性卵巢癌、交界性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤、正常卵巢组织中的阳性表达呈逐渐降低趋势(P<0.05);FOXQ1在高级别浆液性癌阳性表达患者的淋巴结转移情况大于低级别浆液性癌,差异有统计学意义(P<0.05);高级别卵巢浆液性癌中FOXQ1阳性表达患者3年生存率与阴性表达患者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高级别浆液性卵巢癌FOXQ1阳性表达最强,且与卵巢高级别浆液性癌生存率存在紧密联系,而与低级别浆液性癌生存率无明显相关性,可作为患者不良预后的独立指标。

Foxq1与E-cadherin蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨Foxq1与E-cadherin在大肠癌中的表达及其与大肠癌发病和转移的临床病理关系。方法收集大肠癌的临床病理标本62例,采用免疫组织化学法和Western印迹检测Foxq1与E-cadherin蛋白在标本中的定位与表达水平。结果 Foxq1与E-cadherin蛋白均在细胞质中表达,Foxq1表达在癌组织、癌旁组织、正常黏膜组织中梯度降低;E-cadherin表达在癌组织、癌旁组织及正常膜组织居中梯度升高(P<0.05)。二者的表达在大肠癌中呈负相关(P<0.05)。结论 Foxq1和E-cadherin参与了大肠癌的发病,可作为大肠癌早期诊断的联合指标之一,并且为大肠癌的治疗提供新靶点。

FOXQ1基因介导了Shh诱导的SW480细胞血管生成及增殖

目的:探讨FOXQ1基因沉默对大肠癌SW480细胞血管生成及增殖能力的影响及其在Sonic hedgehog(Shh)通路中的作用。方法:以携带FOXQ1-shRNA的慢病毒载体感染SW480细胞,将细胞株分为FOXQ1-shRNA和NC-shRNA组,利用脐静脉内皮细胞系926细胞行体外血管形成实验,荧光显微镜观察2组细胞血管形成能力,MTT、倍增时间、平板克隆形成实验检测2组细胞的存活率,real-time PCR、Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)-A、基质金属蛋白酶(MMP)2和cyclin D1 mRNA和蛋白水平。利用重组Shh蛋白诱导上述2组细胞,观察诱导前后细胞存活率及血管形成能力的变化,检测上述分子的表达差异。结果:与NC-shRNA组细胞相比,FOXQ1-shRNA组细胞的体外血管形成能力降低,而存活率无明显变化,real-time PCR及Western blot显示FOXQ1基因沉默后,VEGF-A和MMP2的表达下调,cyclin D1表达无显著差异。与NC-shRNA组比较,重组Shh蛋白诱导的FOXQ1-shRNA体外血管形成能力更低,存活率无明显差异。结论:FOXQ1基因介导了大肠癌SW480细胞的血管形成能力,对存活率无明显影响,并且可能受到Shh通路调控。

FOXQ1在肝癌中的临床意义及其对SMMC-7721细胞体外血管形成的影响

探讨叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因在肝癌中的临床意义及对肝癌细胞体外血管生成作用.利用qRT-PCR法及Western印迹法,检测24例肝癌、癌旁组织、正常肝细胞L02及肝癌细胞SMMC-7721中FOXQ1的mRNA和蛋白质的表达;利用免疫组织化学法检测68例肝癌及癌旁组织中FOXQ1的蛋白质表达.合成shRNA-FOXQ1及shRNA-NC慢病毒,转染到SMMC-7721细胞.用体外血管生成实验检测转染shRNA-FOXQ1的肝癌细胞血管生成能力.用qRT-PCR和Western印迹法检测细胞间FOXQ1、VEGF基因和蛋白质的表达.结果显示,癌组织和SMMC-7721细胞中FOXQ1 mRNA和蛋白质的表达均高于癌旁组织和正常肝细胞(P<0.05),FOXQ1蛋白的表达与TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤数目、肿瘤大小等参数差异显著(P<0.05).shRNA-FOXQ1组血管生成能力明显低于shRNA-NC组和空白组(P<0.05),FOXQ1、VEGF基因和蛋白质的表达也明显低于shRNA-NC组和空白组(P<0.05).研究结果证实,FOXQ1在肝癌中高表达,如果沉默FOXQ1的表达可抑制肝癌细胞血管生成,与肝癌的临床病理特征密切相关.

慢病毒介导的FOXQ1过表达对人脐带间充质干细胞衰老的影响

目的:构建FOXQ1慢病毒载体,探究FOXQ1过表达对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)衰老的影响。方法:PCR扩增FOXQ1序列,构建慢病毒pHBLV-FOXQ1-Puro重组载体,包装病毒、感染hUC-MSCs(过表达组),感染空载体病毒的hUC-MSCs为对照,分别采用实时荧光定量PCR、Western blot检测2组细胞FOXQ1 mRNA及蛋白的表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,采用SA-β-Gal与AP染色检测hUC-MSCs衰老表型。结果:慢病毒pHBLV-FOXQ1-Puro重组载体构建成功,病毒包装后感染hUC-MSCs效果良好。过表达组FOXQ1蛋白及mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05)。过表达组细胞增殖能力较强,FOXQ1过表达可以延缓hUC-MSCs衰老。结论:成功建立FOXQ1稳定过表达的hUC-MSCs细胞系,FOXQ1过表达可以延缓hUC-MSCs衰老。

利用微阵列芯片技术探究基因FOXQ1与大肠癌的关系

目的:应用全基因组表达谱芯片和microR NA芯片检测人结肠癌细胞DLD1在敲低FOXQ1基因前后m RNA和micro RNA的表达改变.方法:抽提两组细胞的RNA,分别与Whole Human Genome Oligo Microarray(4×44 K,Agilent Technologies)全基因组表达谱芯片和mi RCURYTM LNA Array(v.18.0,Agilent Technologies)micro RNA芯片进行杂交,应用genespring、genepix软件对芯片结果进行统计,对全基因组表达谱芯片进行GO、pathway分析,并应用q RT-PCR对部分结果进行验证.应用Microsoft Excel和SPSS17.0软件进行统计学分析.结果:全基因组表达谱的检测结果表明,敲低FOXQ1基因后,在芯片所涵盖的41093个基因中,共有255个基因上调,176个基因下调.q RT-PCR的验证结果与全基因组表达谱芯片的结果基本相符.Micro RNA芯片的检测结果表明,敲低FOXQ1基因后,共有31个micro RNA上调,12个micro RNA下调.结论:本研究了解了FOXQ1基因敲低前后m R N A和m i c r o R N A的表达改变,为后续F O X Q1在结肠癌的发生发展中的作用机制研究提供了重要的线索和实验依据.

FOXQ1介导SHH信号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(FOXQ1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法培养人永生化胃黏膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞SGC-7901、MKN-28、GC-9811和AGS,qRT-PCR检测细胞中FOXQ1 mRNA表达水平。分别转染si-FOXQ1(si-FOXQ1组)、阴性对照si-Control(si-Control组)至SGC-7901细胞,并设置正常对照组(Normal组),转染时间为48 h;用1μmol/L的SHH特异性激活剂purmorphamine(PM)诱导si-FOXQ1组细胞24 h,记为si-FOXQ1+PM组,以si-FOXQ1组细胞为对照。采用qRT-PCR和Western blot法分别检测各组SGC-7901细胞中FOXQ1 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡率,Western blot检测SGC-7901细胞中Bax、Cleaved Caspase3、SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。结果与GES-1细胞比较,SGC-7901、MKN-28、GC-9811和AGS细胞中FOXQ1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),且SGC-7901细胞中FOXQ1的表达最高(P<0.05)。与si-Control组比较,si-FOXQ1组SGC-7901细胞mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),SHH、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。Normal组和si-Control组间以上各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。与si-FOXQ1组比较,si-FOXQ1+PM组SGC-7901细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SHH、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论FOXQ1在胃癌细胞中高表达,沉默FOXQ1可能通过介导SHH信号通路诱导胃癌细胞凋亡,是治疗胃癌的潜在靶点。