LNC RNALinc00152对宫颈癌细胞生物学行为及Fra-1/p53基因的影响

目的探究LNCRNALinc00152对宫颈癌细胞生物学行为及Fra-1/p53基因的影响。方法RT-PCR方法检测人宫颈癌Hela细胞和人正常宫颈上皮End1/E6E7细胞中Linc00152表达;将Hela细胞分为正常组(control组)、转染组(si-00152)和转染对照组(si-NC),RT-PCR方法检测Linc00152的表达;MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Westernblot检测细胞中Fra-1和p53蛋白表达。结果Hela细胞中Linc00152的表达水平明显高于End1/E6E7细胞(P<0.05)。转染si-Linc00152后,Hela细胞Linc00152表达明显降低,增殖、迁移与侵袭能力明显降低(P<0.05),p53表达明显升高,Fra-1表达明显降低(P<0.05)。结论沉默LncRNALinc00152表达能抑制Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。

结直肠癌p53和DNA损伤调节基因1的表达及临床意义

目的 分析p53和DNA损伤调节基因1(p53 and DNA damage regulated gene 1,PDRG1)在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法 检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中结直肠癌数据集,比较PDRG1 mRNA在结直肠癌组织和正常结直肠组织中的表达差异,分析其表达与临床病理特征及预后的关系。DNA甲基化交互可视化数据库(DNA methylation interactive visualization database,DNMIVD)分析PDRG1基因甲基化与m RNA表达水平的关系。另选取本院2019年2月至2020年5月存档的102例结直肠癌组织及其癌旁正常结直肠组织石蜡标本进行验证,采用免疫组织化学法检测PDRG1蛋白的表达。结果 TCGA数据库分析发现,PDRG1 mRNA在结直肠癌组织(n=284)中的表达较正常结直肠组织(n=41)增高(P<0.01),且结直肠癌PDRG1 mRNA表达与拷贝数变异呈正相关(n=273;r=0.792,P<0.01)。DNMIVD分析显示,PDRG1启动子甲基化β值与基因表达水平呈负相关(r=-0.34,P<0.01)。TCGA数据库分析显示,结直肠癌患者(n=273)PDRG1 mRNA表达在肿瘤位置、TNM分期及远处转移方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05);对245例结直肠癌患者进行Kaplan-Meier生存分析发现,PDRG1 mRNA高表达患者(以中位数为分界值,大于中位数为高表达)无瘤生存期较短(P=0.019)。免疫组织化学检测显示,结直肠癌组织中PDRG1蛋白表达阳性率高于正常结直肠癌组织[87.3%(89/102) vs32.4%(33/102),P<0.01]。结论 PDRG1在结直肠癌中高表达,且与肿瘤位置、远处转移和无瘤生存期有关,可能成为结直肠癌潜在的生物标志物。

胃癌中p21^(WAF1)与p53基因的相关性研究

目的 探讨胃癌中 p2 1WAF 1与 p5 3基因的关系。方法 采用 S- P法检测 p2 1WAF 1和 p5 3在胃癌中的表达。结果 p2 1与 p5 3在正常胃黏膜、不典型增生、胃癌中的阳性表达率分别为 10 0 .0 %与 0 %、92 .5 %与 15 .0 %、39.8%与 5 6 .5 % ;40例不典型增生 ,p5 3阳性而 p2 1阴性者为 5 .0 % ,p5 3阴性而 p2 1阳性为 82 .5 % (P<0 .0 5 ) ;p2 1、p5 3阳性高分化腺癌各为 6 3.3%与 36 .7% ,与低分化腺癌 32 .7%与 78.2 %比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;48.1%的胃癌 p2 1、p5 3蛋白表达相反 (P>0 .0 5 ) ;p2 1表达在侵犯浅肌层为 6 0 .0 %显著高于深肌层的 35 .2 % (P<0 .0 5 ) ;p2 1、p5 3在原发与转移癌中一致表达为 35 .3%与 70 .6 % ,皆与未转移癌 6 2 .5 %与 42 .5 %有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;p2 1在 TNM 期 6 0 .0 %、 期 5 6 .2 %显著高于 期 2 7.8%、 期 2 2 .2 % (P<0 .0 5 )。结论 正常胃黏膜和不典型增生 p2 1蛋白表达大部分依赖 p5 3蛋白 ,而胃癌在相当程度上不依赖。p2 1失表达和 p5 3异常表达与胃癌发生、分化程度、转移有关 ,而 p2 1失表达还与侵袭。

CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

乙型肝炎病毒X基因经p53依赖性与非依赖性途径对p21^(WAF1)表达的影响

背景与目的研究表明,在不同情况下乙型肝炎病毒X基因(HBx)对p21WAF1的表达具有不同的影响,但作用机制仍不清楚。本研究的目的是探讨HBx对p53下游基因p21WAF1的影响。方法通过正、反义野生型p53(wtp53)与HBx单转染及共转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,以及HBx转染不同内源性p53状态的肝癌细胞株,检测p21WAF1启动子荧光素酶基因表达,并用流式细胞仪观察细胞周期的变化,Westernblot法比较p53、p21WAF1表达水平的变化。结果正、反义wtp53与HBx单转染及共转染SMMC-7721细胞,HBx与正义wtp53共转染组(1.007±0.098)与单转染正义wtp53(0.490±0.012)相比,p21WAF1启动子荧光素酶基因表达明显升高(P<0.05),其余各组HBx均可导致p21WAF1启动子荧光素酶基因表达明显减少(P<0.05)。Westernblot法表明HBx可导致p53的表达增加,但p53表达较低的SMMC-7721细胞转染HBx后p21WAF1蛋白的表达减弱,p21WAF1启动子荧光素酶基因表达(0.053±0.010)也较对照组(0.094±0.013)明显减少(P<0.05),而p53表达较强的HepG2细胞转染HBx后p21WAF1蛋白的表达增强、p21WAF1启动子荧光素酶基因的表达(1.252±0.052)较对照组明显升高(0.767±0.031)(P<0.05)。细胞周期结果表明瞬时转染HBx的SMMC-7721和Hep3B细胞停滞在G0-G1期细胞数(42.31%、36.96%

基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌患者的表达

目的:探讨错配修复基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌发生中的作用。方法:用聚合酶链反应和单链DNA多态性分析(PCR-SSCP)对45例散发性大肠癌患者肿瘤组织及正常组织基因hMSH2、hMLH1、p53进行检测。结果:45例散发性大肠癌患者中,发生hMSH2、hMLH1、p53基因突变分别为2、6、22例,分别占4.44%、13.33%和48.89%。hMLH1、hMSH2基因在突变型p53患者中的突变率为27.27%明显高于在p53未发生突变的患者中的突变率8.69%(P<0.05)。结论:一定比例的散发性大肠癌患者中存在MMR基因缺陷,其中hMLH1所起的作用大于hMSH2,散发性大肠癌中MMR基因突变与p53突变密切相关。

肺癌中MTS1/p16和p53基因产物的表达与细胞增殖的关系

目的：研究肺癌中ＭＴＳ１／ｐ１６和ｐ５３基因产物的表达与细胞增殖的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法研究６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白的表达情况，并进行增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）检测，计算细胞增殖指数（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ＰＩ）。结果：６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白阳性率分别为５８．１％和５９．７％。腺癌ｐ１６蛋白的阳性率明显高于小细胞癌（Ｐ＜０．０５）；淋巴结转移阳性组ｐ１６蛋白的表达显著低于阴性组（Ｐ＜０．０５）；ＰＩ分级为Ⅱ级的ｐ１６蛋白表达显著高于Ⅳ级（Ｐ＜０．０５）。不同组织类型肺癌中ｐ５３蛋白的表达未见明显差异，淋巴结转移阳性组ｐ５３蛋白的表达高于阴性组（Ｐ＜０．０１）；不同ＰＩ分级中ｐ５３蛋白的表达，Ⅳ级明显高于Ⅰ级（Ｐ＜０．０５）和Ⅱ级（Ｐ＜０．０５），Ⅲ级明显高于Ⅰ级（Ｐ＜０．０５）和Ⅱ级（Ｐ＜０．０１）。ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达之间未见明显相关。结论：ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达均有促进肺癌细胞增殖的作用，ｐ１６蛋白的表达与肺癌的细胞分化有关，ｐ５３蛋白过表达对肺癌细胞的转移起重要作用。抑癌基因ｐ５３对ＭＴＳ１／ｐ１６基因无明显调控作?

人突变型p53和EB病毒LMP1转基因小鼠的建立

目的:建立含突变型p53和EB病毒LMP1基因的双转基因小鼠模型,为研究突变型p53和EB病毒LMP1基因在鼻咽癌前病变中的交互作用提供有力的工具.方法:通过分子克隆技术构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的真核表达载体pLMP1-p53mt;采用显微注射法将线性化的表达载体注射至小鼠受精卵的雄性原核中,然后将注射存活的受精卵植入假孕母鼠的输卵管;取其产3wk龄子代鼠进行PCR初选,再通过Southern杂交进一步确证;利用HE染色法观察4mo龄转基因小鼠不同组织病理变化.结果:将转基因载体进行了707枚小鼠受精卵的显微注射,然后植入30只假孕母鼠的输卵管中,其中26只母鼠怀孕,移植成功率为86.67%;共出生子代鼠179只;PCR检测显示179只子代小鼠中有9只整合了p53mt和LMP1基因,转基因阳性小鼠比例为5.03%(9/179),Southern杂交结果进一步证实了9只基因组整合了外源基因的首建者小鼠;随机抽取其中的1只转基因阳性小鼠鼻腔黏膜、鼻咽、食管表现炎症,鼻咽黏膜上皮灶性增生.结论:成功建立整合人突变型p53和LMP1的转基因小鼠,且表现鼻咽黏膜上皮灶性增生,可为鼻咽癌前病变机制的研究提供手段.

胃癌中survivin、PTEN、cyclinD1和p53基因的表达及其相关性

目的 探讨survivin基因表达与胃癌生物学行为及PTEN、cyclinD1、p5 3和凋亡指数 (AI)的相关性。 方法 用免疫组化EnVision法检测 15 6例胃癌组织、4 6例正常胃黏膜和 4 6例癌旁不典型增生组织中survivin、PTEN、cyclinD1和 p5 3的表达以及AI。结果 survivin、PTEN、cyclinD1和p5 3的阳性检测率分别为 6 5 %、4 1%、6 1%和 5 8%。survivin未见核内表达。survivin、cyclinD1和 p5 3表达与胃癌的组织学类型相关 (P <0 0 1,P <0 0 5和P <0 0 1) ;survivin和cyclinD1表达与胃癌的浸润深度相关 (P <0 0 1和P <0 0 5 ) ;4种基因蛋白表达均与淋巴结转移相关 ,survivin的表达与p5 3和cyclin阳性表达呈正相关 ,与PTEN的阳性表达呈负相关 ;survivin、p5 3和cyclinD1高表达均有患者术后 <3年生存期相关 (P <0 0 5 ,P <0 0 1和P<0 0 1) ;survivin阳性组的平均AI为 0 6 1,明显低于survivin阴性组 (P <0 0 1) ;PTEN阳性组明显高于阴性组 (P <0 0 1)。结论 survivin、PTEN、p5 3和cyclinD1基因在胃癌的发生、发展中起着不同程度的作用 ,它们的检测对胃癌恶性度的判定、预后和进一步治疗提供有效的依据。survivin、p5

重组腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因在肝癌细胞中的表达

目的 观察腺病毒载体对肝癌细胞的转染效率及其介导的人野生型 p5 3、GM CSF和B7 1基因在肝癌细胞中的表达。方法 不同MOI的Ad GFP感染肝癌细胞 ,48h后计算感染效率 ;BB 1 0 2以5 0MOI感染肝癌细胞 ,48h后免疫组化法及westernblot检测 p5 3表达 ,ELISA检测GM CSF的含量 ,FACS测定B7 1的表达。结果 MOI为 5 0 pfu/细胞时对肝癌细胞的转染效率达 80 %以上 ,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达。结论 腺病毒载体对肝癌细胞具有较高的转染效率 ,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达 ,为进一步研究BB 1 0

nm23-H1和p53基因表达与肝细胞癌临床病理学特征的关系

目的：研究ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３基因表达与肝细胞癌（肝癌）临床病理学特征的关系。方法：采用ＡＢＣ免疫组织化学染色法检测了２９例肝癌标本的ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３基因表达。结果：ｎｍ２３－Ｈ１基因在肝癌中表达的阴性率为６０％（１８／２９）；ｎｍ２３－Ｈ１基因低表达与门静脉癌栓、肝癌分化程度Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级、血清ＡＦＰ水平等显著相关（Ｐ均＜０．０５）；ｐ５３基因表达阳性率为７０％（２０／２９）；ｐ５３基因过表达与肝癌门静脉癌栓、血清ＡＦＰ水平显著相关（Ｐ均＜０．０５）。结论：（１）ｎｍ２３－Ｈ１基因低表达和ｐ５３基因过表达可能与ＡＦＰ基因激活有关；（２）ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３基因突变可能促进肝癌门静脉转移。

共表达人p53、GM-CSF和B7-1基因的重组腺病毒的构建

为开展肿瘤的复合基因治疗 ,构建以串联方式携带人野生型p53、GM CSF和B7 1基因的重组腺病毒穿梭质粒pBB 1 0 2 .将pBB 1 0 2与腺病毒包装质粒GT40 50共转染 2 93细胞 ,通过细胞内同源重组获得重组腺病毒BB 1 0 2 .在 2 93细胞中扩增病毒 ,并通过氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒 ,获得高滴度和高纯度的病毒 .分别经免疫组织化学分析、ELISA和流式细胞分析 ,检测BB 1 0 2介导的人野生型p53、GM CSF和B7 1基因在喉癌细胞Hep 2中的表达 .结果表明 ,BB 1 0 2能够有效地将其所携带的目的基因导入Hep 2细胞并使其在细胞中高效表达 ,表达高峰期为转染后 2～ 4d ,此后随时间递减 ,可持续 1 0d以上 .

脑胶质瘤组织p21^(WAF1/CIP1)基因表达与p53基因的关系

目的 探讨抑癌基因、细胞周期调控与胶质瘤发生、发展的关系 .方法 采用免疫组织化学技术对 6 3例脑胶质瘤组织及 10例正常脑组织标本中 p2 1WAF1 /CIP1与 p5 3基因的表达状况进行检测 ,并进行相关性分析 .结果 110例正常脑组织均为 p2 1WAF 1 /CIP1阳性表达 ,6 3例脑胶质瘤组织中p2 1WAF1 /CIP1的表达阳性率与肿瘤分化程度呈正相关 ;2 10例正常脑组织中仅 1例为突变型 p5 3弱阳性表达 .脑胶质瘤组织中突变型 p5 3的阳性率与分化程度呈负相关 ;3大部分突变型 p5 3表达阳性标本中 p2 1WAF 1 /CIP1为阴性表达 ,而大部分突变型 p5 3表达阴性的标本中 p2 1WAF 1 /CIP1 为阳性表达 .结论 p2 1WAF1 /CIP1的突变或缺失可能与胶质瘤的发生、发展有关 ,p2 1WAF1 /CIP1表达的减弱或消失可能是由 p5 3突变引起 ,野生型p5 3基因的肿瘤抑制作用可能是通过 p2 1WAF 1 /CIP1

53BP1和53BP2基因在鼻咽癌组织中表达的研究

目的 :研究p5 3的两个结合蛋白 5 3BP1和 5 3BP2在鼻咽癌及对照组织中的表达。方法 :①用RT -PCR检测 5 3BP1和 5 3BP2在鼻咽癌及对照组织中的表达。②用原位杂交术检测鼻咽癌及对照组织石蜡切片中 ,5 3BP1和 5 3BP2的表达。结果 :① 2 1例鼻咽癌组织及 4例对照组织标本 5 3BP1均未表达。② 5 3BP2mRNA表达在鼻咽癌组织中为 17/ 2 1,在对照组织中为 3/ 4,两者无显著差异。③原位杂交显示 ,5 3BP2mRNA在鼻咽癌组织中的表达高于对照组织。结论 :5 3BP2mRNA在鼻咽癌中的表达高于对照组织 ,而 5

大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探究大鼠增殖抑制基因(r HSG)过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法:体外培养C6细胞,感染运载r HSG基因的腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP),倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率;应用流式细胞仪分析C6细胞周期;Western blot检测细胞r HSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb,Rb)表达变化。结果:腺病毒可以高效的将目的基因导入C6靶细胞;Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白的表达量明显高于PBS组和Adv-GFP组(P<0.01);r HSG过表达的C6细胞停滞于G0/G1期细胞的数量明显增加(P<0.01);P53、P21cip1蛋白表达量明显增加(P<0.01),p-Rb蛋白表达降低(P<0.01),Rb蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:r HSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。

p53基因突变对大肠肿瘤原位Th1/Th2平衡的影响

目的 :评价 p5 3突变对大肠腺瘤和大肠癌局部辅助T细胞 (Th) 1/Th2平衡的影响 ,进而探讨p5 3突变促进大肠癌发生的免疫学机制。方法 :研究对象包括大肠腺瘤 30例、大肠癌 38例 ,癌旁正常黏膜 6 8例作为对照组。应用PCR SSCP银染法结合测序检测p5 3基因 5～ 8外显子突变 ,采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测肠组织培养上清液中 4种细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 10和IFN γ)水平。结果 :p5 3突变阳性组培养上清的IL 2、IFN γ水平低于阴性组和对照组 (P <0 0 1) ,而IL 10则高于阴性组及对照组 (P <0 0 5 ) ,各组IL 4水平未显示差异 (P >0 0 5 )。结论 :p5 3突变引起原位Th1/Th2平衡失调 ,表现为由Th1向Th2漂移。初步推断 ,p5 3基因失活在大肠癌发生的免疫学机制中可能具有重要作用。

XRCC1、P53、COX-2基因多态性与客家人群食管癌易感性的关系

目的通过对X线修复交叉互补基因1(XRCC1)、P53基因、环氧化酶2(COX-2)基因多态性与食管癌易感性的研究,探讨遗传因素在客家人群食管癌发病中的作用。方法采取病例对照分子流行病的研究方法,选取经病理检查确诊后的梅州地区客家人群食管癌患者122例(食管癌组)以及同时期123例正常人群作为对照(正常对照组),对DNA损伤修复基因XRCC1 rs25487位点、细胞增殖、凋亡相关基因P53 rs1042522、COX-2 rs689466位点进行基因型及等位基因检测,分析其在两组间的分布特征。结果 XRCC1、P53、COX-2基因位点在梅州地区客家人群中均存在多态性改变[rs25487(A/G)、rs1042522(C/G)、rs689466(A/G)],而两组的基因型和等位基因分布频率经统计差异均无显著性。对性别、年龄分层分析后结果显示也无统计学意义。结论XRCC1基因rs25487、P53基因rs1042522、COX-2基因rs689466位点多态性与客家人群食管癌的易感性可能无关。

人肺癌GSTM1基因多态性与p53突变的相关性

目的 探讨谷胱苷肽 S转移酶 μ1(GSTM1)基因的多态性与抑癌基因 p5 3突变在人肺癌发生中的关系。方法 收集 4 8例人肺癌标本 ,HE染色做病理诊断 ,抽提基因组 DNA,PCR扩增 GSTM1基因的第 4外显子 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析基因的多态性。对相应的肺癌标本用免疫组织化学的方法做突变型 P5 3蛋白表达的检测 ,分析二者的相关性。结果 在人的肺癌组织中 ,GSTM1基因的缺失率较高 ,达 5 4 .2 % ;突变型 P5 3蛋白总的表达率为 5 6 .3% ,其中GSTM1基因缺失者与非缺失者的 p5 3突变率分别为 73.1%和 36 .4 % ,二者之间有显著性差异 ,P<0 .0 5。结论 在人肺癌组织中 ,GSTM1基因的多态性与 p5 3基因突变明显相关 ,GSTM1基因的缺失可能会导致 p5

Wip1基因在人脑胶质瘤组织中的表达及其与p53基因突变的相关性研究

背景与目的:野生型p53诱导的磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase1,Wip1)是一种新发现的癌基因,其在多种肿瘤中存在过表达。本研究旨在探讨Wip1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其与p53基因突变的相关性。方法:收集52例原发胶质瘤及8例脑外伤或脑出血后行内减压术的正常脑组织标本,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative,RFQ-PCR)法检测脑胶质瘤组织中Wip1mRNA的表达,Western blot法检测Wip1蛋白的表达,DNA直接测序法检测脑胶质瘤组织中p53基因的突变情况。统计学分析不同脑胶质瘤病理分级及p53的突变状态间Wip1的表达水平的差异。结果:52例脑胶质瘤中22例(42.3%)发生p53基因突变。Wip1 mRNA在高级别胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)中的表达水平较低级别胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)及正常脑组织中的表达要略高,但差异无统计学意义(P<0.05)。Wip1基因在无p53基因突变的胶质瘤组织中的表达水平较p53基因突变组要高,差异有统计学意义(P=0.009)。Wip1在野生型p53的胶质瘤中存在选择性的过表达,Wip1在胶质瘤中的过表达与病理分级无明显相关,而与p53的突变状态有关。结论:Wip1基因在脑胶质瘤中存在选择性地过表达,其过表达与p53基因野生型状态相关,可能是胶质瘤恶性进展中除p53基因突变外的另一关键作用因素。