C1酯酶抑制剂分离纯化工艺研究

目的 研究以人凝血酶原复合物(PCC)制备过程废弃洗涤液为原料分离纯化C1酯酶抑制剂(C1-esterase inhibitor, C1-INH)的工艺。方法 通过聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)4000沉淀及阳离子层析两步法分离纯化C1-INH。调整原料pH及PEG4000浓度考察PEG4000沉淀法最佳条件;PEG沉淀后离心,上清液处理后作为阳离子交换层析的上样液,使用Fractogel EMD SE HiCap(M)凝胶及CM Sepharose FF凝胶进行离子交换层析,通过比较C1-INH活性收率及比活性选择最适合的凝胶及分离条件。结果 在pH6.1的条件下,PEG4000质量分数14%时,搅拌10min后离心,C1酯酶抑制剂回收率≈70%,铜蓝蛋白(ceruloplasmin, CER)去除率>95%;使用Fractogel EMD SE HiCap(M)凝胶进行阳离子交换层析,洗脱液盐浓度为0.25M氯化钠时,C1酯酶抑制剂活性收率>80%,比活性>5IU/mg。结论 以PCC制备过程中废弃洗涤液为原料,经过PEG沉淀和Fractogel EMD SE HiCap(M)离子交换层析纯化制备能够得到高比活性的C1酯酶抑制剂。

静注人免疫球蛋白纯化用层析介质使用寿命的验证

目的验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel®EMD TMAE(简称TMAE)层析介质的使用寿命。方法建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和总有机碳(total organic carbon,TOC)进行趋势分析。对每次层析过程中的参数进行比对,分析随着循环次数的增加关键参数的变化情况,确定层析介质使用寿命。结果IgA检测均值≤100μg/mL,IgM检测均值≤50μg/mL,IgG单体与二聚体含量之和>95.0%,均符合产品质量标准。层析介质的压力呈逐步升高的趋势,蛋白回收率下降,均在可接受范围内,同时层析柱的每米理论塔板数和对称系数符合使用要求。结论用于静注人免疫球蛋白生产的TMAE层析凝胶使用寿命暂定为240次。