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PEI介导pCEP4/EGFP瞬时转染293-F细胞条件优化
被引量:
1
1
作者
贺玉萍
张航
易晓红
《成都大学学报(自然科学版)》
2015年第2期105-107,共3页
为构建真核表达载体pCEP4/EGFP,PEI介导瞬时转染293-F细胞,观察转染效率,优化转染条件.通过NotI和Hind III酶切位点将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)插入真核表达载体p CEP4中,并转化Trans5α感受态细胞,氨苄青霉素筛选培养,挑取阳性克...
为构建真核表达载体pCEP4/EGFP,PEI介导瞬时转染293-F细胞,观察转染效率,优化转染条件.通过NotI和Hind III酶切位点将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)插入真核表达载体p CEP4中,并转化Trans5α感受态细胞,氨苄青霉素筛选培养,挑取阳性克隆扩增后提取质粒,酶切鉴定正确后,PEI介导转染293-F细胞,流式细胞仪检测转染效率.实验结果表明,成功构建了真核表达载体pCEP4/EGFP,当N/P(PEI/DNA)为25,悬浮培养模式下转染293-F细胞,48 h转染效率为77.57%,重组载体p CEP4瞬时转染293-F细胞,可获得理想转染效果.
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关键词
pCEP4
转染
293
-f
细胞
polyethylenimie(PEI)
下载PDF
职称材料
人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定
被引量:
1
2
作者
沈秋瑾
孔娟
+9 位作者
邓云
蒋华
胡素文
孔洁
倪涛
游海燕
李宗海
屠红
张志刚
覃文新
《肿瘤》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期693-700,共8页
目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检...
目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
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关键词
细胞
培养技术
哺乳动物
细胞
悬浮培养
Dickkopf-1蛋白
free-style293-f细胞
原文传递
题名
PEI介导pCEP4/EGFP瞬时转染293-F细胞条件优化
被引量:
1
1
作者
贺玉萍
张航
易晓红
机构
成都中医药大学基础医学院
四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
出处
《成都大学学报(自然科学版)》
2015年第2期105-107,共3页
文摘
为构建真核表达载体pCEP4/EGFP,PEI介导瞬时转染293-F细胞,观察转染效率,优化转染条件.通过NotI和Hind III酶切位点将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)插入真核表达载体p CEP4中,并转化Trans5α感受态细胞,氨苄青霉素筛选培养,挑取阳性克隆扩增后提取质粒,酶切鉴定正确后,PEI介导转染293-F细胞,流式细胞仪检测转染效率.实验结果表明,成功构建了真核表达载体pCEP4/EGFP,当N/P(PEI/DNA)为25,悬浮培养模式下转染293-F细胞,48 h转染效率为77.57%,重组载体p CEP4瞬时转染293-F细胞,可获得理想转染效果.
关键词
pCEP4
转染
293
-f
细胞
polyethylenimie(PEI)
Keywords
pCEP4
transfection
293
-f
cells
polyethylenimie (PEI)
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定
被引量:
1
2
作者
沈秋瑾
孔娟
邓云
蒋华
胡素文
孔洁
倪涛
游海燕
李宗海
屠红
张志刚
覃文新
机构
上海交通大学医学院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室
出处
《肿瘤》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期693-700,共8页
基金
国家973计划资助项目(编号:2009CB521803)
国家自然科学基金资助项目(编号:30973492)
文摘
目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
关键词
细胞
培养技术
哺乳动物
细胞
悬浮培养
Dickkopf-1蛋白
free-style293-f细胞
Keywords
Cell culture technique
Mammalia cell
Suspension culture
Dickkopf-1 protein
free-style
293
-f
cell
分类号
R735.35 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PEI介导pCEP4/EGFP瞬时转染293-F细胞条件优化
贺玉萍
张航
易晓红
《成都大学学报(自然科学版)》
2015
1
下载PDF
职称材料
2
人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定
沈秋瑾
孔娟
邓云
蒋华
胡素文
孔洁
倪涛
游海燕
李宗海
屠红
张志刚
覃文新
《肿瘤》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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