基于化学模式识别结合灰色关联度法的鲜地黄药材质量评价

目的:构建基于化学模式识别和灰色关联度法的鲜地黄药材多指标综合评价模型,为鲜地黄药材整体质量评价提供参考。方法:收集不同产地的32批鲜地黄药材样品,测定各批样品中总灰分,酸不溶性灰分,浸出物,梓醇、地黄苷D、铅、镉、砷、汞、铜含量与指纹图谱,采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析和灰色关联度法对各指标数据进行分析。结果:HCA和PCA均可将32批鲜地黄药材分为4类,但无明显产地聚集现象;指纹图谱中峰1~3、9、10的峰面积及总灰分、浸出物、梓醇含量是体现各产地鲜地黄药材质量差异的主要指标;32批鲜地黄药材灰色关联度为0.036~0.042,灰色关联度差异为0~13.89%,综合质量差异不大。结论:化学模式识别结合灰色关联度法构建的多指标综合评价模型分析结果客观、科学、准确,可用于鲜地黄药材质量的综合评价。

鲜地黄本草功效考证与现代药理学研究

考据历代本草记载的鲜地黄功效,并通过检索知网、万方数据库、维普数据库来了解鲜地黄的现代临床应用情况和药效物质研究进展。结果发现,除中国药典2020年版记载的清热生津、凉血止血功效外,鲜地黄还可用于活血生新、散瘀止痛、养阴生津。鲜地黄及其相关复方广泛用于外伤出血、瘀血、痛经、产伤内损、伤寒心悸、中医神志病(狂症、百合病)、消渴、热毒疮疡、热病阴伤、瘟疫病等治疗。现代药理学研究显示,鲜地黄的主要活性成分有梓醇、麦角甾苷等,它们具有抗氧化、抗炎、神经保护、胰岛素抵抗改善作用。鲜地黄及其相关复方对慢性肝炎、鼻咽癌放疗相关的口腔黏膜不良反应、麦粒肿、霰粒肿、抑郁症、失眠、焦虑症等的临床治疗效果较好。

ICP-MS测定鲜地黄中26种金属元素及不同加工工艺元素差异性比较

目的:建立电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)同时测定鲜地黄中Al、As、B、Ba、Ca、Cd等26种金属元素,分析和比较5种不同工艺加工鲜地黄样品中金属元素的组成差异,为完善鲜地黄的质量评价体系、筛选鲜地黄最佳加工工艺和产品开发提供参考。方法:制备了鲜地黄的喷雾干燥、冷冻干燥、微波干燥、真空干燥及烘箱干燥5种样品共15份,经微波消解后,采用ICP-MS同时测定5种不同加工工艺鲜地黄中26种金属元素,同时采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)及聚类分析(HCA)统计学方法进行数据处理和挖掘。结果:各元素线性关系良好(r>0.999),检测下限为0.004~12.493μg·L^(-1),精密度符合规定(RSD<5%),各元素加样回收率为98.411%~100.541%,RSD为1.463%~3.505%;不同加工工艺鲜地黄样品含有丰富的金属元素,其中K、Na、Ca、Mg、Al、Fe、Zn 7种元素的含量均较高,但不同加工工艺鲜地黄样品金属元素含量差异较大;其中鲜地黄喷雾干燥后人体必须常量元素K、Na及人体所需的微量元素Fe、Zn、Se、Cu、Co、Mo等的含量均显著高于其他加工样品。PCA结果显示,15份不同加工工艺的地黄样品均能清晰地聚成5组;通过OPLSDA提取出对不同加工工艺鲜地黄分组贡献率>1的5种金属元素,分别为K、Al、Na、Mg、Fe;HCA分析将15份样品分为2个组别,其中冷冻干燥和微波干燥为一组,烘箱干燥、喷雾干燥和真空干燥为一组,其第二组别下细分的小组中,喷雾干燥和真空干燥又聚为一组。结论:建立的方法简单、可靠、准确且灵敏度高,可用于鲜地黄不同加工样品中金属元素的测定;综合本研究结果及中药材加工技术的发展趋势和市场需求,喷雾干燥法能较好地保持鲜地黄的颜色及丰富的金属元素,且能实现生产化,喷雾干燥法可作为鲜地黄的加工方法。为完善鲜地黄质量控制体系及其开发利用提供一定的研究基础。

鲜地黄与干地黄中梓醇、糖类成分含量的比较

目的 对地黄的干品和鲜品进行梓醇、糖类成分含量的成分比较研究。方法 用高效液相色谱法和紫外分光光度法进行含量测定。结果 地黄中梓醇含量、还原糖和多糖的含量均为鲜品高于干品。

鲜生地对肠黏膜屏障损伤保护作用的临床研究

目的:观察鲜生地对肠黏膜屏障的保护作用,并对其机制进行探讨。方法:60例慢性乙型肝炎患者随机分为鲜生地汁治疗组与乳果糖对照组,观察两组治疗前后证候积分、肝功能及血浆内毒素、D-乳酸水平。结果:两组患者治疗后在症状及肝功能方面均较前明显改善,且治疗组优于对照组;在血浆ET及D-La水平方面,两组均较治疗前显著下降,但两组之间比较差异不明显。结论:鲜生地治疗具有改善肝病患者临床症状和保护肠黏膜屏障的双重作用。

薯蓣丸加减方对鼻咽癌放疗患者EB病毒的影响

目的观察薯蓣丸加减方对鼻咽癌放疗患者EB病毒的影响。方法将60例鼻咽癌患者随机分为观察组和对照组各30例,观察组在放疗开始第1天给予口服薯蓣丸加减方治疗,对照组在开始放疗第1天给予康复新液治疗。观察两组治疗前后临床疗效、患者生活质量及EB病毒DNA水平。结果治疗后观察组临床疗效及中医症候疗效均优于对照组(P<0.05);两组生活质量均有明显改善(P<0.05),观察组改善更为显著(P<0.01);血浆EBV-DNA水平均较治疗前下降(P<0.05),观察组下降更为显著(P<0.01)。结论薯蓣丸加减方对鼻咽癌放疗患者有较好的治疗作用,可提高患者生活质量,其作用机制可能与降低鼻咽癌患者血浆EBV-DNA水平有关。

鲜生地治疗慢重肝营血症临床观察

目的:观察口服鲜生地汁对慢性重型肝炎早期(中医营血症)患者内毒素、肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1的影响。方法:患者分为两组,均给予重肝基础治疗的同时,治疗组给予鲜生地汁口服,每日100mL;对照组给予血液净化治疗,方法为每周进行血浆置换及血液滤过治疗各1次。分别于第1、2周末检测血清内毒素、肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1水平。结果:两组血清内毒素水平均明显下降,组间比较无明显差异;治疗组肿瘤坏死因子-α的水平有明显降低。结论:口服鲜生地汁可有效减轻内毒素血症、降低肿瘤坏死因子-α水平。

怀中1号地黄不同炮制品中脂溶性成分比较及体外抗氧化活性研究

目的比较怀中1号地黄不同炮制品(鲜地黄、生地黄和熟地黄)中脂溶性成分的差异,并初步评价其体外抗氧化活性。方法采用索氏提取法获得地黄3种炮制品的脂溶性提取物,采用气相色谱-串联质谱法对其进行成分分析。采用NIST98系统谱库自动检索组分的质谱信息,结合有关文献和与八峰索引、EPA/NIH库对照对化合物进行结构鉴定,并使用Hewlett Packard软件按峰面积归一化法计算各化合物的相对含量。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法考察3种地黄炮制品中脂溶性成分的抗氧化活性。结果从地黄不同炮制品中共鉴定出79个脂溶性成分,从鲜地黄、生地黄和熟地黄中分别鉴定出48、52和37个脂溶性成分,其相对含量分别占总成分的92.69%、86.29%、92.89%;三者中共有脂溶性成分20个,其相对含量分别占各炮制品中脂溶性成分含量的88.73%、80.89%、85.87%,且均以亚油酸甲酯、棕榈酸甲酯、油酸甲酯等脂肪酸类成分为主。另外,鲜地黄中独有的脂溶性成分有18个,多为萜类化合物;生地黄和熟地黄中独有的脂溶性成分分别有17、6个,多为烷烃类化合物。抗氧化实验结果显示,三者中脂溶性成分对DPPH自由基的半数清除浓度分别为0.756、0.660、0.758 mg/mL。结论不同地黄炮制品中的共有脂溶性成分多为脂肪酸类化合物,鲜地黄中独有的脂溶性成分多为萜类化合物,生地黄和熟地黄中独有的脂溶性成分多为烷烃类化合物;其脂溶性成分均具有一定的体外抗氧化活性。

鲜地黄加工炮制后新成分含量变化研究

目的:分析鲜地黄加工炮制成生地黄和熟地黄后新产生成分含量变化。方法:采用HPLC法,研究鲜地黄加工成生地黄及炮制成熟地黄中,新产生的2个化学成分:5-羟甲基麦芽酚(DDMP)和5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量变化,并测定市售生地黄和熟地黄中两者的含量。色谱条件:Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(5∶95);流速1.0 mL·min-1;检测波长280 nm。结果:鲜地黄中未检测到DDMP和5-HMF,加工炮制成生地黄和熟地黄后均检测到,其在熟地黄中的含量高于生地黄,在熟地黄中两者的含量均随炮制时间的延长而逐渐升高,分别炮制至24 h和32 h达到最高,随后降低。在市售3批生地黄和10批熟地黄中均检测到这2个成分,5-HMF的含量熟地黄高于生地黄,DDMP含量生地黄和熟地黄没有明显差异。结论:鲜地黄加工成生地黄及炮制成熟地黄后产生DDMP和5-HMF,含量随炮制时间延长逐渐升高。熟地黄中5-HMF含量与生地黄中有明显差异。

血热出血模型大鼠血清中鲜地黄高效液相色谱分析

目的:对阴虚血热出血大鼠含鲜地黄血清进行分析,探索鲜地黄清热凉血药效的物质基础。方法:给予血热出血症模型大鼠鲜地黄,采集血清,用高效液相色谱法分析大鼠含药血清、正常血清以及鲜地黄药材的色谱,研究鲜地黄在血中移行成分以及鲜地黄对大鼠血清中固有成分的影响。结果:在血热出血症模型大鼠含药血清中检测到了鲜地黄的有效成分——梓醇的色谱峰;且发现血清中和药材中有3种相同的共有成分;鲜地黄对模型大鼠血清中1种固有成分的升高有抑制作用。结论:鲜地黄中梓醇及3种未明成分可能是其清热凉血物质基础;鲜地黄对动物血清中固有成分代谢的影响可能是鲜地黄清热凉血药效的机制。

怀鲜地黄HPLC指纹图谱研究

目的建立怀鲜地黄指纹图谱,为有效控制鲜地黄药材的质量奠定基础。方法将鲜地黄榨汁、取汁,采用梯度洗脱的方法,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,检测波长215、230 nm,柱温30°C,体积流量1 mL/min。采用药典委员会指纹图谱相似度评价软件(2004 A版)进行数据处理。结果对10批怀鲜地黄进行HPLC测定,在215、230 nm下各确定12个共有峰,建立了鲜地黄两个波长下的指纹图谱。结论该方法准确、可靠,可为怀鲜地黄的质量控制提供参考。

鲜生地对肝损伤模型大鼠枯否细胞功能的影响

目的探讨鲜生地在大鼠肝损伤时对肝脏枯否细胞功能的影响。方法取健康成年大鼠64只,随机分成4组:假手术组,肝损伤组,肝损伤+鲜生地组和肝损伤+乳果糖组。前两组以生理盐水灌胃,后两组分别以鲜生地和乳果糖灌胃。观察大鼠血浆内毒素(ET)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、谷丙转氨酶(ALT)以及枯否细胞表面CD68蛋白表达。结果与肝损伤组比较,鲜生地组和乳果糖组血浆ET、TNF-α、IL-1、ALT明显降低(P<0.05),CD68蛋白表达减少。结论鲜生地具有抑制肝脏枯否细胞吞噬及分泌作用,减少炎症因子释放,从而减轻肝细胞损伤。

慢性重型肝炎营血证的鲜生地汁治疗

目的:观察口服鲜生地汁对慢性重型肝炎(重肝)早/中期(中医营血证)患者的疗效。方法:患者分为两组,在给予重肝综合治疗的同时,治疗组患者口服鲜生地汁,100m l/d(分服);对照组患者口服乳果糖10ml/次,3次/d,分别于治疗前及第2周末记录患者症状,检测肝功能、凝血酶原活动度及血浆内毒素、细胞因子。结果:两组患者腹胀及大便干结症状、肝功能均好转;血浆内毒素下降;肿瘤坏死因子-α降低;凝血酶原活动度增加;治疗组效果优于对照组。治疗组患者口干、烦热症状亦有明显改善。结论:口服鲜生地汁可有效减轻重肝患者内毒素血症、降低细胞因子水平,并在改善口干、烦热等营血证表现及凝血机制方面与乳果糖比较具有明显优势。

鲜生地(冻干粉)对肝损伤模型大鼠肠生物屏障的影响

[目的]探讨鲜生地(冻干粉)对肝损伤模型大鼠肠生物屏障的影响。[方法]采用Pringle’s maneuver法制作大鼠肝缺血再灌注损伤模型。将64只实验大鼠随机分为假手术组、模型组、鲜生地(冻干粉)组及乳果糖组。观察大鼠粪便球杆菌比例、菌落培养,测定血清内毒素水平。[结果]鲜生地组、乳果糖组粪便中益生菌增加,大肠杆菌减少,血清内毒素水平降低。[结论]鲜生地能够调节肠道菌群,降低血内毒素水平,可能通过改善肠生物屏障,使肝细胞得到恢复。

鲜地黄中两个酰胺类化合物通过SIRT3/Bcl-2/Caspase-3信号通路减轻LPS诱导的NRK-52e细胞损伤

目的:探究鲜地黄中两个酰胺类化合物rehmagluamide(Reh)和rehmanalkaloid C(Reh C)对LPS诱导NRK-52e细胞损伤的干预作用及潜在机制。方法:建立LPS诱导的NRK-52e细胞损伤模型,加入SIRT3选择性抑制剂3-TYP,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α与IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧(ROS)与线粒体膜电位(JC-1)水平;细胞免疫荧光检测细胞中SIRT3蛋白及线粒体凋亡关键蛋白Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2表达。结果:与模型组比较,Reh和Reh C可不同程度降低LPS作用下NRK-52e细胞凋亡及TNF-α、IL-6、ROS水平和Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达,升高线粒体膜电位、SIRT3蛋白表达及Bcl-2/Bax水平,但在加入3-TYP后Reh和Reh C的改善作用显著降低。结论:Reh和Reh C可能通过SIRT3/Bcl-2/Caspase-3信号通路减轻LPS诱导的NRK-52e细胞损伤。

鲜生地黄对慢加急性肝衰竭大鼠JAK2/STAT3通路的影响

目的:观察鲜生地黄对慢加急性肝衰竭大鼠JAK2/STAT3通路的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠按照1∶4比例随机分为对照组和实验组。实验组大鼠先用四氯化碳诱导成肝纤维化模型,再按照1∶1比例随机分为模型组和观察组,应用D氨基半乳糖进行急性攻击,建立慢加急性肝衰竭大鼠模型。观察组在急性攻击前7 d予以鲜生地黄连续灌胃。各组大鼠分别在急性攻击后24 h取材,检测血清内毒素、白细胞介素-6含量及肝脏组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA的表达。结果:模型组大鼠肝组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA表达低于对照组和观察组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与对照组大鼠肝组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠血清内毒素显著高于对照组和观察组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组与对照组比较,大鼠血清内毒素表达差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠血清白细胞介素-6高于对照组和观察组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:鲜生地黄能够降低肠道内毒素的吸收,促进JAK2/STAT3通路活化,但是介导物质可能并不是IL6,相关机制需要进一步完善。

鲜生地汁对大鼠肠缺血再灌注损伤的防护作用

目的:探讨鲜生地汁对大鼠肠缺血再灌注损伤(I/R)的防护作用及其机制。方法:采用肠系膜上动脉(SMA)夹闭方法制作I/R模型。实验大鼠随机分为正常组、I/R模型组、I/R+鲜生地汁大剂量组、I/R+鲜生地汁小剂量组、I/R+乳果糖组。观察肠系膜上动脉夹闭0.5小时再灌注24小时、48小时、72小时后肠黏膜损伤程度,测定血浆内毒素水平。结果:各时点I/R+鲜生地汁大剂量、I/R+小剂量组及I/R+乳果糖组肠黏膜损伤程度、血浆内毒素水平均低于I/R模型组(P<0.05)。结论:鲜生地汁对肠缺血再灌注损伤大鼠肠黏膜具有保护作用。

鲜生地冻干粉制备工艺与指纹图谱研究

目的:制备鲜生地冻干粉,并对其主要成分与鲜生地汁进行对比分析,为实验及临床研究提供安全有效的药物。方法:采用抽真空冷冻干燥法制备鲜生地冻干粉,并将其与鲜生地汁进行指纹图谱分析。结果:鲜生地冻干粉经高效液相色谱仪分析后,其主要成分与鲜生地汁相同。结论:鲜生地冻干粉制备工艺可行。

银屑平丸对寻常型银屑病患者皮损中STAT3和P-STAT3表达的影响

目的通过观察银屑平丸对寻常型银屑病患者皮损中STAT3(信号转导与转录活化因子3)和P-STAT3(磷酸化信号转导与转录活化因子3)表达的影响,探讨银屑病的发病机制及银屑平丸治疗寻常型银屑病的作用靶点。方法 21例寻常型银屑病患者予口服银屑平丸治疗,疗程8周。用免疫组化法检测其治疗前后皮损STAT3、P-STAT3的表达,并与20例整形切除术后的正常皮肤相比较。结果银屑平丸治疗组治疗前皮损STAT3、P-STAT3的平均灰度值与正常组相比,其表达明显升高(P<0.01);治疗后皮损STAT3、P-STAT3的平均灰度值较治疗前表达明显下降(P<0.05)。治疗组治疗前后STAT3、P-STAT3的表达呈正相关(P<0.05)。结论在寻常型银屑病中存在STAT3、P-STAT3的高表达,证实寻常型银屑病的发生、发展与两者相关。银屑平丸通过降低皮损中STAT3、P-STAT3的表达水平,调节银屑病中角质形成细胞的增殖和细胞凋亡,改善银屑病对机体的损伤。

鲜地黄提取物中总环烯醚萜类含量测定

本研究的目的在于建立测定鲜地黄提取物中总环烯醚萜类成分含量的方法。采用乙醇和酸处理样品后，用紫外分光光度法进行测定。发现梓醇在0．066-0．143mg／mL范围内有良好的线性关系（r=0．99），其稳定性、重复性、回收率都较好，从而建立了测定鲜地黄提取物中总环烯醚萜含量的方法，该方法简便、快速、可靠。并用此法测定了总环烯醚萜类成分的含量。