Current Situation of Fritillaria thunbergii Miq. Production in Yinzhou District of Ningbo City

Yinzhou District of Ningbo City is the home and main production area of Fritillaria thunbergii Miq. Based on the analysis of Fritillaria thunbergii Miq. production in Yinzhou District in 2015,this paper firstly introduced current situation of Fritillaria thunbergii Miq. planting. The competition of Fritillaria thunbergii Miq. products was in disorder,the market price in 2015 dropped to half in 2014,and many Fritillaria thunbergii Miq. growers suffered losses. To keep sustainable development of traditional Fritillaria thunbergii Miq. industry in old production areas and maintain brand and name of genuine materials of " Zhejiang 8 Famous Kinds Herbal Medicines",it is required to actively reduce the inventory,make up short board,strengthen advantages,implement the reform of supply font,keep up with the times and market,and succeed through improving the quality.

Temperature Effects on Seed Dormancy Relieving of Fritillaria thunbergii Miq

浙贝母种子的休眠在８～１０℃下需要５０天时间能够解除，而在３～５℃下则需要８０天时间。为了研究浙贝母种子休眠解除的生理基础，利用分光光度法和电泳方法研究了过氧化物酶、酸性磷酸酶和蛋白质的变化。结果表明，随着低温处理，过氧化物酶活性和酸性磷酸酶的活性升高，蛋白质电泳图谱上有新带出现。这些变化最终导致了休眠的解除。

浙贝母逆转恶性肿瘤耐药的研究进展

肿瘤治疗过程中,耐药的出现会大大降低治疗效果,有效逆转肿瘤细胞耐药是改善患者预后的关键。现代药理研究表明,浙贝母具有逆转肿瘤细胞耐药的作用,常用于白血病、乳腺癌、肝癌等多种恶性肿瘤的研究中。浙贝母中的化学成分可通过抑制P-糖蛋白(P-gp)的表达、减少药物外排、增加胞内药物浓度等机制,在多种肿瘤细胞中实现其逆转耐药的作用;亦可通过阻滞细胞周期诱导肿瘤细胞凋亡,进而增加肿瘤细胞内抗癌药物浓度,逆转肿瘤细胞耐药。现通过对近年来浙贝母化学成分及其逆转肿瘤细胞耐药的相关研究进行综述,以期促进浙贝母的深入研究,为后续应用于临床提供可靠的依据。

不同温度对离土浙贝母贮藏品质及酶活性的影响

为了探讨不同贮藏温度对离土浙贝母贮藏品质以及酶活性的影响,以浙贝母为试材,将浙贝母分别置于0、5、10和20℃四个温度下贮藏90 d,研究浙贝母在不同贮藏温度下的失重、感官品质、色泽、硬度、总多糖、生物碱、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、过氧化物酶(peroxidase,POD)以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的变化。结果表明:贮藏90 d,0℃贮藏的浙贝母失重率仅为7.17%,显著低于5、10和20℃(9.92%、19.77%和30.28%)(P<0.05);与5、10和20℃相比,0℃贮藏更好地保持浙贝母的色泽、硬度、总多糖含量以及总生物碱含量;与5、10和20℃相比,0℃贮藏有效抑制了MDA含量上升,延缓了浙贝母鳞茎的衰老进程;同时0℃贮藏有效抑制了多酚氧化酶和过氧化物酶活力,而且有利于SOD维持较高的活性。与5、10和20℃相比,0℃贮藏的浙贝母品质保持得最好。本研究为浙贝母离土贮藏提供了方法参考及理论依据。

浙贝母化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物预测分析

浙贝母是传统“浙八味”药材之一,位列“浙八味”药材之首,可以清热化痰止咳、解毒散结消痈。研究发现浙贝母主要含有生物碱类、黄酮类、萜类及皂苷类、糖类等化学成分,并含挥发性成分,具有镇咳祛痰、平喘、抗炎、抗菌、镇痛、抗氧化、抗癌、抗肿瘤等药理作用。本文在对浙贝母化学成分和药理作用研究总结的基础上,依据质量标志物(quality marker,Q-marker)相关概念,在植物亲缘学及化学成分特有性、化学成分可测性、传统药性、传统药效、不同配方配伍、不同干燥方法、不同产区、入血成分等方面,对浙贝母Q-marker进行预测分析,初步预测贝母素甲、贝母素乙等生物碱类成分,皂苷类,挥发性成分,黄酮类,萜类等成分可作为浙贝母的主要Q-marker。

Effects of Different Seed Stem Sizes on the Changes of Available Elements in Rhizosphere Soil of Fritillaria thunbergii Miq.

[Objectives]This study was conducted to screen suitable seed stems of Fritillaria thunbergii Miq.from different provenances and to provide a theoretical basis for the high-yielding and high-efficiency cultivation of F.thunbergii Miq.introduced to different places.[Methods]F.thunbergii Miq.from four different provenances including Zhejiang,Nantong and Chongqing were introduced and cultivated in Wanzhou of Chongqing.The contents of available Zn,Fe,Mn,Cu,Mo,N,P,K,Ca and Mg in rhizosphere soil of F.thunbergii Miq.during five growing stages were determined after selecting different stem sizes for field cultivation.[Results]Small stems of Pan an and Ningbo provenances(SSG3,121-160/kg)and middle stems of Nantong and Fengjie provenances(SSG2,81-120/kg)showed higher soil availability.[Conclusions]In the process of introduction and cultivation of F.thunbergii Miq.,high yield and high efficiency can be achieved by selecting smaller seed stems of F.thunbergii Miq.

多组学分析射频热风联合干燥对浙贝母代谢物的影响

为深入研究射频热风联合(RF-HA)干燥对浙贝母品质的影响,本研究以新鲜浙贝母(Fresh)和热风干燥浙贝母(HA)为对照,分别采用超高液相色谱-质谱(UPLC-MS)非靶向代谢组学和超高液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)生物碱靶向代谢组学技术,分析RF-HA干燥前后浙贝母差异代谢物及生物碱成分变化。结果表明,UPLC-MS共鉴定出483种差异代谢物,其中RF-HA与Fresh差异代谢物221种(105种上调,116种下调),RF-HA与HA差异代谢物168种(122种上调,46种下调);主成分分析、偏最小二乘判别分析及聚类热图分析结果表明,不同处理浙贝母代谢物含量差异显著(P<0.05);UPLC-MS/MS共鉴定出生物碱类物质64种,与HA处理相比,RF-HA处理可以显著减少贝母素甲、贝母素乙、贝母素甲氮氧化合物、贝母素乙氮氧化合物等主要活性成分MS强度的下降(P<0.05)。综上,相对于HA,RF-HA干燥可以更好地维持浙贝母主要成分含量及品质。本研究可为浙贝母干燥及射频热风联合干燥的应用提供数据参考及理论依据。

生防菌剂对浙贝母产量、质量及根际土壤环境的影响

目的:探究施用生防菌剂对浙贝母产量、质量、蛴螬防治效果及根际土壤的影响。方法:以江苏浙贝母鳞茎为实验材料,在大田条件下设置不同浓度的金龟子绿僵菌孢子粉+三菌合剂“宁盾”(S1、S2、S3)、常规化学药剂(40%辛硫磷乳油,CG)四个组,以不施药作为空白对照(CK),进行试验。结果:菌剂处理的三个组(S1、S2、S3)的浙贝母植株各外观性状指标大多比CK、CG组高,且CG组略高于CK组。S1、S2、S3三个组的鳞茎受蛴螬的危害较CK、CG组明显降低,且产量均有显著提高。同时S1、S2、S3三个组的生物碱含量及土壤中的速效钾、有效磷和电导率明显高于CK组,但与CG组差异不大。S2组的土壤脲酶、碱性磷酸酶和蔗糖酶活性均较CK组显著提高,与CG组无显著差异。S1、S2、S3三组土壤细菌中的厚壁菌门相对丰度较CK、CG组有所提高。S1、S2、S3三组土壤真菌中的子囊菌门相对丰度较CK组有所提高,较CG组有所降低。结论:施用生防菌剂能够防治蛴螬、促进浙贝母的生长和改善其品质,并能提高土壤营养和改善微生物群落结构。本研究为在浙贝母生产中合理应用生防菌剂提供理论依据。

浙贝母叶斑病病原真菌的分子鉴定及杀菌剂筛选

[目的]明确浙贝母叶斑病的致病菌种类,并筛选有效杀菌剂。[方法]采用病组织分离法,从浙贝母叶斑病病株中分离纯化真菌,以聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增基因组DNA的内源转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、翻译延伸因子-1a(translation elongation factor-1a,TEF-1a)和微管蛋白基因(tubulin gene,TUB)并双向测序,经DNAMAN 9.0软件拼接后利用基本局部对齐搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)进行分析。采用邻接法构建系统发育树以鉴定真菌种类,采用菌饼接种寄主植物和组培苗的柯赫氏法检测致病性,以生长速率法和抑菌圈法室内筛选病原真菌的有效杀菌剂。[结果]从浙贝母叶斑病病株中分离纯化获得1种间座壳属(Diaporthe)真菌。分离物的ITS、TEF-1a和TUB扩增片段与GenBank中Diaporthe eres(无性型为Phomopsis oblonga,P.oblonga)相应片段的同源性分别为100%、99.73%和96.95%(登录号:LC342971、MW804672、MT561360)。在间座壳属中,分离物与P.oblonga的亲缘关系最近。该菌株接种浙贝母植株和组培苗后诱发浙贝母叶斑病。吡唑醚菌酯、咯菌腈、异菌脲、苯醚甲环唑、腈菌唑、咪鲜胺对该真菌的半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))分别为0.174、0.084、1.092、0.041、0.619和0.004μg·mL^(-1);6种杀菌剂对P.oblonga孢子萌发的抑制效果为咪鲜胺>吡唑醚菌酯>苯醚甲环唑>腈菌唑>咯菌腈和异菌脲。[结论]本研究证实,P.oblonga是浙贝母叶斑病病原真菌,咪鲜胺和苯醚甲环唑是防治浙贝母叶斑病的有效杀菌剂。

浙贝母两种主要病害病原菌巢式多重PCR检测方法的建立

浙贝母Fritillaria thunbergii炭疽病与干腐病作为浙贝母上常见的病害,严重影响浙贝母的质量和产量。因此,亟需建立一种快速准确的检测手段,这对病害早期诊断、早发现、早防治具有重要意义。本文以宁波市海曙区章水镇的浙贝母为材料,在前期明确引起上述两种真菌病害的病原菌分别为细线炭疽菌Colletotrichum lineola和尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的基础上,根据ITS序列,分别设计了两对特异性引物FO1-F/FO1-R和BMTJ4-F/BMTJ4-R,建立了针对浙贝母炭疽病与干腐病的巢式多重PCR检测方法。试验结果表明,建立的巢式多重PCR检测体系特异性好,同时检测2种病原菌的灵敏度高达100pg DNA/μL,对10株田间患病的浙贝母植株进行检测,4个样品检测出细线炭疽菌,2个样品检测出尖孢镰刀菌,另有4个样品同时检测出2种病原菌,检出率高达100%,表明该方法可以用于浙贝母炭疽病与干腐病的鉴定,且快速、准确、灵敏,研究结果为浙贝母炭疽病与干腐病的田间检测提供技术支持。

浙贝母花不同化学成分提取物体内抗氧化作用

目的提取浙贝母花中的不同化学成分,分析其体内抗氧化能力。方法采用超声提取法和萃取法提取浙贝母花中的不同化学成分。皮下注射D-半乳糖诱导小鼠氧化衰老模型。随机将小鼠分为7组:空白组、D-半乳糖诱导模型组、维生素C阳性对照组、浙贝母花给药组(乙醇提取物组、石油醚萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组)。连续皮下注射、灌胃4周后,眼球取血并处死,解剖取其肝脏、脑组织、脾脏和胸腺组织,测定肝脏、脑组织抗氧化指标。结果与对照组相比,模型组小鼠脏器指数均降低(P<0.05或P<0.01),血清、肝脏和脑组织中SOD水平降低(P<0.01),肝脏和脑组织中CAT水平降低(P<0.01或P<0.001),血清、肝脏和脑组织中MDA水平提高(P<0.01),肝脏和脑组织GSH-PX水平降低(P<0.01或P<0.001)。与模型组比较,给药组小鼠脏器指数、SOD水平、CAT水平、GSH-PX水平均提高,MDA水平均降低(P<0.05)。结论浙贝母花浸提物中不同物质成分在增加实验小鼠抗氧化酶活性、保护机体内的还原性物质不被氧化、减少脂质过氧化产物、延缓氧化过程等方面均有显著作用。

高温胁迫下2,4-表油菜素内酯对浙贝母花期耐热性及光合特性的影响

在盆栽条件下,以狭叶浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)为材料,研究了浙贝母花期高温胁迫条件下表油菜素内酯(EBR)对浙贝母耐热性和光合特性的影响。结果表明,0.10、0.50 mg/L EBR能明显提高叶片中可溶性蛋白含量、SOD、POD和CAT活性,降低MDA含量,增强其抗氧化能力,缓解高温胁迫导致的膜质过氧化伤害;同时,EBR提高了叶片叶绿素含量、Pn、Gs和Tr,从而提高了高温胁迫下浙贝母植株的光合作用;然而EBR并不能提高其Pro及可溶性糖含量,对叶片中类胡萝卜素及胞间CO2浓度(Ci)影响差异不大。结果表明,EBR通过提高高温胁迫下浙贝母叶片可溶性蛋白及叶绿素含量、抗氧化酶活性,来降低体内活性氧水平,维持较高的光合速率,以0.50 mg/L EBR效果最好。

浙贝素的结构测定

从浙江产贝母(Fritillaria thunbergii Miq)地上部分分离出一个新的3,7-二氧杂环[3,3,O)辛酮-6类化合物,经光谱(~1HNMR,^(13)CNMR,HRMS,EI-MS)及X-单晶衍射数据的分析,确定其结构为2-(3′,5′-dimethoxy-4′-hydroxyphenyl)-3,7-dioxabicyclo[3,3,O]octan-6-one,定名为浙贝素(zhebeiresinol)。

微波消解-原子吸收法分析并比较四种贝母中的微量元素

利用火焰原子吸收分光光度法（FAAS）及石墨炉原子吸收分光光度法（GFAAS）测定了浙贝、象贝、东贝、川贝4种贝母中15种微量元素的含量。同时考察了不同微波消解条件对分析结果的影响,确定了原子吸收分光光度法测定的最佳条件,并且以微量元素含量作为指标对其进行了主成分分析。实验结果表明,微波消解法操作简便、快速、样品消解完全,空白值低,选择性好,方法相对标准偏差小于3.96%,回收率在91.0%-108.7%。主成分分析法在反映不同样品微量元素含量的差异程度上具有应用价值。

浙贝母主产地栽培品种与生产现状调查研究

目的:了解浙贝母主产地栽培品种与生产现状。方法:查阅和整理文献,并对浙江宁波、江苏南通等浙贝母产地进行实地调查。结果:两省产地均存在品种退化现象、栽培技术不配套等问题,并且许多产地存在品种混杂现象。结论:建立浙贝母种苗繁殖基地,加强浙贝母育种工作,改进浙贝母栽培及加工技术势在必行。

近红外漫反射光谱快速检测川贝母中浙贝母的掺入量

目的:应用近红外漫反射光谱技术和化学计量学方法,建立一种快速检测川贝母中浙贝母掺入量的新方法。方法:以含不同川贝母和浙贝母比例的41个样本建立校正集,采集其近红外漫反射光谱数据,通过偏最小二乘法进行回归,经内部交叉验证,建立校正模型,进而对预测集样品进行分析。结果:对6个预测集样本进行预测分析,得到近红外光谱预测值与真值的相关系数r=0.9997,样品回收率为97.96%-100.9%,RSD为0.81%。结论:本方法具有快速方便、结果准确的特点,可以应用于外观相似,化学成分相近的中药材的品质分析和质量控制。

FTIR直接测定法对川贝母和珠贝、小东贝的区别鉴定

目的 对川贝母、浙贝母和东贝母进行区别鉴定。方法 采用傅里叶变换红外光谱法直接测定植物中药材的红外光谱。结果 川贝母、浙贝母和东贝母的红外光谱差别较大。结论 可以采用 FTIR直接、快速、准确地测定同属不同种的川贝母。

提取方法与部位对浙贝母基因组DNA提取质量的影响

探讨了改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和试剂盒法对浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)基因组DNA的提取效果。综合比较了各方法提取的DNA浓度、纯度、完整性,结果表明高盐低pH法是比较适合浙贝母新鲜叶片基因组DNA提取的方法。比较了分别以叶片和鳞茎为材料提取的DNA质量,发现以新鲜叶片为材料提取的DNA浓度和纯度较高,更适合用于提取浙贝母基因组DNA。

浙贝母鳞茎酚类物质含量及相关酶活性与休眠解除的关系

[目的]探讨浙贝母鳞茎中酚类物质及相关酶活性与休眠解除的关系。[方法]将浙贝母鳞茎分别在4和10℃条件下保湿贮藏至75 d,贮藏过程中定期取样测定鳞茎各部位酚类物质含量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和多酚氧化酶(PPO)活性,同时比较了发芽鳞茎与休眠鳞茎中酚类物质含量和PAL与PPO活性的差异。[结果]低温解除休眠过程中,鳞茎及芽内酚类物质含量均呈降低趋势;10℃处理30～45 d和4℃处理45～60 d是酚类物质减少、解除休眠的关键时期;浙贝母各部位酚类物质含量与其PPO活性均呈显著负相关;顶芽中酚类物质含量与PAL活性呈显著正相关;鳞片中酚类物质含量与PAL活性没有明显的相关性。[结论]酚类物质与浙贝母鳞茎休眠有一定相关性,酚类物质含量下降是低温处理解除浙贝母鳞茎休眠的生理机制之一。

基于近红外光谱的浙贝母鲜切和硫熏加工饮片的快速鉴别

目的：应用近红外光谱技术结合化学计量学方法建立浙贝母鲜切和硫熏加工饮片的快速鉴别模型。方法：从浙贝母两个主产地宁波和磐安收集186批鲜切和硫熏样品,采集近红外光谱图,采用判别分析法建立其定性鉴别模型。结果：选择谱段为9 881.46-4 119.20 cm-1,采用MSC＋spectrum＋Ns组合对原始光谱进行预处理,建立模型,并经预测集验证,鉴别准确率达到100%。结论：所建立的近红外光谱技术鉴别模型可快速、准确鉴别浙贝母鲜切和硫熏样品。