基于系统药理学和分子对接探讨浙贝母-瓜蒌配伍调控慢性阻塞性肺病并发心脏衰竭的作用机制

基于GEO数据库挖掘慢性阻塞性肺疾病(COPD)和心力衰竭(HF)关联靶点,检索浙贝母、瓜蒌化学成分及靶点,以获得其调控COPD并发HF潜在靶点,挖掘靶点功能及通路注释分析,构建组织特异性蛋白相互作用(PPI)网络。浙贝母-瓜蒌影响COPD并发HF进展共涉及靶点227个,包括表达上调基因153个,表达下调基因74个;网络拓扑学分析显示PPI网络平均介数为0.4,平均度值为1.83,关键靶点包括RPS23、SNU13、NOL6、ELAVL1、NCL等;细胞组分定位于内膜系统、核内体和细胞外囊泡;生物学过程涉及囊泡介导的运输、基于微管的运动、细胞内蛋白质运输等;信号通路涉及MAPK信号传导途径;MCODE分析发现Cluster 1涉及TKT、ENO1、NCL、KIF1B等,参与调控驱动蛋白、雌激素的高尔基体运输;Cluster 2涉及SIN3B、PHF20、CTBP1、XPNPEP1等,参与调控组蛋白反应;心耳、左心室、肺的组织特异性PPI网络提示浙贝母-瓜蒌配伍可能通过调控ELAVL1-ENO1-NCL轴影响COPD并发HF进展;分子对接表明其“宽胸散结”主要活性成分瓜蒌酸、“化痰散结”主要成分贝母新碱与ELAVL1、ENO1、NCL蛋白质靶标的结合高度稳定,且贝母新碱与靶蛋白结合力强于瓜蒌酸,体现两者配伍后先治肺再调心,相须为用以实现心肺共治的作用特点。

对照提取物在浙贝母配方颗粒质量分析中的应用研究

目的 以浙贝母对照提取物(水提)和湖北贝母对照提物(水提)为参照,对12个不同厂家的22批浙贝母配方颗粒进行质量分析。方法 以乙酸乙酯-甲醇-三乙胺-水(17∶1∶1∶0.5)为展开剂进行高效薄层色谱(HPTLC)指纹图谱分析;采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.03%二乙胺溶液,梯度洗脱,柱温25℃,蒸发光检测器,进行高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析。根据浙贝母配方颗粒标准含量测定项下方法测定含量。结果 HPTLC和HPLC分析结果表明,22批标识为浙贝母配方颗粒的样品存在明显差异,其中有3家生产企业的4批浙贝母配方颗粒检出湖北贝母指纹图谱特征,其余18批浙贝母配方颗粒样品贝母素甲和贝母素乙的总量为0.291~3.179 mg·g^(-1),差异较大。结论 目前市售的浙贝母配方颗粒样品质量差异较大,经标准化制备的对照提取物(水提)对分析浙贝母配方颗粒的质量比对照药材具有更好的适用性。

吴煜运用清半夏、制天南星、浙贝母为主方治疗肝癌的经验

“痰”的发生与先天禀赋和后天多种因素,以及由此产生的精血津液等物质,津液停积凝聚的水饮有关。痰的形成过程由于脏腑气化功能受阻影响津液的运行与排泄。肝癌与痰生成有密切关系。吴煜教授认为,“痰”是肝癌中医病因一个重要的致病因素,“痰”是肝癌的发展及转移等过程中必要因素和自始至终的参与者,化痰法是肝癌中医治疗中贯穿始终的治疗原则。肝癌发生以痰浊为邪,内有坚癖,津液留结便可形成痰浊,痰浊郁结,气血运行不畅,久则成结形成癌肿,治疗上宜化痰散结消癌肿。结合临床治疗经验,提出清半夏、制天南星、浙贝母为治疗肝癌的主方,其中清半夏、制天南星燥湿化痰,消有形之癌块,浙贝母化痰散结,攻有形之癌毒。

基于网络药理学和分子对接探讨浙贝母-夏枯草药对治疗甲状腺结节的作用机制

目的:基于网络药理学探讨浙贝母-夏枯草治疗甲状腺结节(thyroid nodules)的作用机制。方法:在中药系统药理数据库和分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)检索浙贝母、夏枯草的化学成分,利用PharmMapper数据库获取化学成分靶点,并采用Cytoscape 3.7.1软件构建“药物-活性成分-靶点”网络。基于Genecards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库、治疗靶点数据库获得甲状腺结节相关靶点。将有效成分相关靶点与疾病靶点导入韦恩图网站进行在线分析,获得交集靶点,并利用STRING数据库构建蛋白互作网络(protein-protein interaction networks, PPI)模型,利用Cytoscape 3.7.1软件构建PPI网络并筛选核心靶点。将药物及其活性成分、交集靶点及疾病导入Cytoscape 3.7.1软件绘制成“药物-活性成分-交集靶点-疾病”网络图。利用Metascape数据库对交集靶点进行基因本体(gene ontology, GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)信号通路富集分析。采用AutoDock软件对关键靶点与活性成分进行分子对接。结果:浙贝母-夏枯草药对共15个活性成分,171个相关靶点。甲状腺结节疾病靶点1 563个。经韦恩图网站在线分析后得到浙贝母-夏枯草治疗甲状腺结节相关的靶点108个。交集靶点PPI网络分析得到AKT1、肿瘤蛋白P53(tumor protein P53,TP53)、丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)为核心靶点。GO富集分析得到生物过程1 705条、分子功能136条、细胞组分115条。KEGG富集分析获得202个信号通路。分子对接结果表明,浙贝母-夏枯草主要有效活性成分与靶点受体蛋白可以较好的结合。结论:浙贝母-夏枯草药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗甲状腺结节。

基于HPLC-ELSD指纹图谱和多成分定量的浙贝母与湖北贝母质量差异研究

建立浙贝母、湖北贝母HPLC-ELSD指纹图谱,结合多成分定量分析,比较两种贝母属药材的差异。采用Waters ACQUITY HSS T3(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%三乙胺溶液为流动相,流速为1.1 mL/min,梯度洗脱;柱温为38℃;蒸发光散射检测;建立浙贝母和湖北贝母HPLC-ELSD指纹图谱,通过化学计量学方法和5种生物碱类成分的含量测定比较浙贝母和湖北贝母的差异。结果显示,浙贝母指纹图谱标定7个共有峰,而湖北贝母有8个;指认出其中6个峰,分别为伊贝辛、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、异贝母甲素、湖贝甲素,其中湖贝甲素为湖北贝母的专属性成分;HCA和PCA均能很好地区分浙贝母和湖北贝母,OPLS-DA共找到4个差异性标志物,含测结果显示,浙贝母中贝母素甲的含量明显高于湖北贝母,而贝母辛、贝母素乙和异贝母甲素的含量则明显低于湖北贝母。该方法可以有效鉴别浙贝母和湖北贝母质量的差异性,为其质量控制提供参考。

基于近红外光谱的浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量快速检测方法的建立

目的:应用近红外光谱分析技术,建立快速检测浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量的新方法。方法:用HPLC-ELSD法测定贝母素甲和贝母素乙含量,采用偏最小二乘法(PLS),建立NIR光谱与HPLC-ELSD法测定值之间的多元校正模型,并预测浙贝母样品中贝母素甲和贝母素乙的总量。结果:所建立校正模型内部交叉验证的相关系数(R)为0.97870,校正均方差(RMSECV)为0.00876,内部验证均方差为0.00967;经外部验证,预测值与真实值的相关系数为0.9702。结论:说明模型对预测集样品具有一定的预测能力,基于近红外光谱技术快速检测浙贝母中贝母甲素和贝母乙素是可行的。

宁波市浙贝母主产地土壤重金属形态分析及污染评价

为了解宁波浙贝母种植地土壤重金属分布特征,采用ICPAES测定了章水镇种质资源圃土壤Cd、Pb、Cu、Ni、Cr和Zn质量比,用Hkanson潜在生态风险指数法评价重金属的生态风险,BCR连续提取法分析其分布形态。结果表明,土壤中重金属元素总量从大到小排序为Zn、Cr、Pb、Cu、Ni、Cd,其中Cd富集程度最高,平均质量比为背景值的8倍左右,超过国家二级土壤标准。Eir指数表明,Cd的潜在风险指数也最高,75%区域处于很高或高潜在生态风险;RI指数表明,90%区域处于高潜在生态风险或中潜在生态风险。土壤中重金属均以残渣态为主,但Zn的弱酸提取态、Cu的可氧化态比例相对较高,Cd的3种可提取态相加接近45%,具有高潜在危害性。相关性分析表明,Cu和Zn、Cr和Ni,以及Cu和Cd重金属的来源具有相似性,且不同形态重金属之间可能会发生迁移转化。p H值与各种重金属的形态之间不存在明显的相关关系,有机质对重金属化学形态的影响因重金属种类不同而有差异。

不同溶媒对浙贝母生物碱含量影响的研究

目的 :比较不同溶媒对浙贝母生物碱含量的影响。方法 :采用比色法及薄层扫描法测定。结果 :总生物碱、贝母素甲、贝母素乙的含量 ,水提最低 ,其次是 95 %乙醇、60 %乙醇、甲醇、70 %乙醇。结论 :以甲醇及 70

HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量

目的建立HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的方法,并对市售17批样品进行考察,制定含量限度。方法色谱柱:Agilent Hypersil BDS-C18(4.0 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03),流速:0.8 mL·min-1; ELSD参数:漂移管温度为85℃,载气流速为2.2 L·min-1。结果贝母素甲、贝母素乙线性范围分别为47.02-1 003.46.92- 1 001 mg·L-1,平均回收率分别为102.7%,98.7%,RSD分别为2.1%,2.5%(n=6)。通过市售17批样品中贝母素甲、贝母素乙含量的测定,制定了不同规格浙贝母的含量限度。结论此法简便,快捷,结果可靠,可用于浙贝母的质量评价,为2005年版药典中浙贝母质量标准的修订提供了依据。

中药饮片菊花、浙贝母的微生物污染状况及其微生物限度标准的研究

目的分析市售中药饮片菊花、浙贝母微生物污染的状况,并对其微生物限度检查法提出合理的建议。方法测定中药饮片菊花和浙贝母中的好氧微生物总数(TAMC)、霉菌总数(TYMC)、耐热菌数,并进行耐胆盐革兰阴性菌检查和其他相关的控制菌检查。结果菊花和浙贝母饮片的总体微生物污染程度很高;耐胆盐革兰阴性菌的污染比较严重,而且出现了较为异常的实验现象;而其他控制菌的污染程度较低。结论以中药制剂微生物限度标准的要求来制定中药饮片总体微生物限度标准是不现实的;对于控制菌,宜加快耐胆盐革兰阴性菌检查方法的研究,并优先制定该项目的微生物限度标准,而其他控制菌则可以参照中药制剂的要求制定标准。

Box-Behnken响应面法优化浙贝母中二氧化硫残留量的测定

目的采用Box-Behnken响应面法优化浙贝母Fritillariae Thunbergii Bulbus中二氧化硫残留量的测定。方法滴定-荧光光谱法测定二氧化硫残留量。以氢氧化钠溶液用量、反应温度和反应时间为因素,样品荧光强度为指标,BoxBehnken响应面法进行优化。结果最佳条件为0.125 mol/L氢氧化钠溶液用量3 m L,反应温度70℃,反应时间20 min,实测值与预测值偏差为1.48%。结论该方法操作简便,预测性良好。

近红外光谱结合偏最小二乘判别对硫熏浙贝母的无损鉴别

浙贝母(Fritillariae thunbergii Bulbus)是一种常用的化痰止咳中药,为浙江著名的"浙八味"之一。硫熏能够使浙贝母增白、防虫蛀以及延长保质期,然而过度的硫熏不仅会影响浙贝母的品质,还会危害人体健康。因此,进行硫熏浙贝母的无损鉴别分析有利于浙贝母的品质监测,保障中药质量。采用近红外光谱结合化学计量学方法进行六种不同硫熏程度浙贝母的鉴别分析,在近红外(900~1 700nm)光谱条件下,采用"boxplot"统计分析1 000~1 100nm内样本间的光谱反射值的差异。同时采用主成分分析(PCA)进行六种样本的聚类分析。应用连续投影法(SPA)进行数据挖掘获得10条特征波段,建立其偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型。结果表明,建立的PLS-DA模型可达到与全谱类似的判别结果。近红外光谱技术结合化学计量学方法能够实现不同硫熏程度浙贝母的无损鉴别分析,这为后续进行硫熏浙贝母品质分析以及研发相应贝母便携检测仪提供参考。

浙贝母抑制耐药肿瘤P糖蛋白的活性组分研究

目的:阐明浙贝母抑制耐药肿瘤细胞P-糖蛋白(P-gp)的活性组分。方法:利用回流提取法通过树脂纯化技术,制备浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖。建立Hep G2/mdr细胞株。利用Calcein-AM试剂盒Hep G2/mdr细胞摄取实验对浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖进行P-gp潜在抑制剂的筛选。结果:制备的浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖含量为51.45%、47.84%、23.78%。Hep G2/mdr细胞株P-gp的相对蛋白表达为(26.22±1.09),极显著高于亲本Hep G2细胞株(8.91±2.00)(P<0.01)。阳性对照组Calcein荧光比率为(173.96±12.87)%,极显著高于空白组(100.00±11.49)%(P<0.01)。浙贝母总生物碱、总核苷低剂量组Calcein荧光比率为(134.96±11.91)%、(126.89±10.42)%,显著高于空白组(100.00±11.49)%(P<0.05)。浙贝母总生物碱、总核苷高剂量组Calcein荧光比率为(209.72±9.44)%、(162.42±7.83)%,极显著高于空白组(100.00±11.49)%(P<0.01)。浙贝母总多糖低、高剂量组与空白组无显著差异。结论:Hep G2/mdr细胞株表现出耐药性,阳性抑制剂抑制P-gp的外排活性;浙贝母总生物碱、总核苷抑制P-gp的外排活性,呈现浓度依赖性。

辐照处理对浙贝母成熟鳞茎理化成分的影响

目的:探究浙贝母辐照加工的可行性。方法:采用500Gy、1000Gy、2000Gy、4000Gy ^(137)Csγ射线处理狭叶、宽叶和新梅园三种浙贝母成熟鳞茎,并测定其可溶性总糖、蛋白质、生物碱、氨基酸及矿物质的含量。结果与结论:随着辐照剂量的不断增加,浙贝母成熟鳞茎中的可溶性糖、蛋白质、氨基酸及矿物质含量均出现先增加后下降的现象,而生物碱含量出现不断下降的趋势,但差异均未达显著水平。由此表明,辐照加工对浙贝母成熟鳞茎的理化成分不会造成明显的影响,因此可在浙贝母原产地加工中加以应用。

当归贝母苦参丸活性成分的抗癌作用及机制研究进展

本文查阅了当归、贝母、苦参的有效成分、有效部位及其有效制剂等方面的抗癌作用研究文献,综述了当归贝母苦参丸组成药物活性成分的抗癌作用及机制,为当归贝母苦参丸临床应用于癌症治疗提供医学文献参考。

消乳增生合剂的薄层色谱鉴别

目的建立消乳增生合剂的薄层色谱鉴别。方法采用TLC对本处方中浙贝母、白芍、黄芪进行鉴别。结果在TLC色谱中检出浙贝母、白芍、黄芪。结论该方法可行,重现性好,适用于该制剂的质量控制。

浙贝母ITS-PCR体系优化与不同产地样品序列差异研究

目的:优化浙贝母的ITS-PCR扩增体系,并对不同来源浙贝母品种的ITS序列进行差异分析。方法:浙贝母样品采用减压干燥法处理,以广谱植物基因组总DNA提取试剂盒提取浙贝母总DNA,对反应过程中的退火温度、Taq酶浓度、Mg2+、dNTP浓度等因素进行考察。采用Conting Express和DNAman等分子生物学软件进行序列处理。结果:最优的浙贝母ITS-PCR扩增体系为:50μL反应体系中含Taq酶1 U,2.5 mmol/L Mg2+、dNTP分别为4μL,退火温度为56℃。浙贝母的ITS序列全长668 bp,G+C含量为65.4%,不同产地浙贝母的ITS序列无差异。结论:所建立的体系可用以浙贝母ITS序列分析,为浙贝母的ITS序列研究奠定基础。ITS序列不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别工具。

平贝母及贝母类药材本草考证

贝母古称"蝱"或"莔",因其形态与聚贝子相似而得名贝母,早在春秋战国时期就被药用,具有悠久的药用历史。自古以来有关贝母的药用品种一直存在着复杂的同名异物现象。葫芦科土贝母是最早的药用贝母,随后浙贝母、湖北贝母登上药用舞台,明末川贝母初现,发展至清代逐渐形成了以川贝母、浙贝母为道地药材的药用体系。平贝母是我国东北使用的贝母品种,具有清热润肺、止咳化痰的功效,但在古籍文献中均未见有关平贝母的相关记载,文章查阅民国著作以及地方县志,发现平贝母药用历史百年之久,最初见于《钦定盛京通志》,后被1977版《中华人民共和国药典》收录。

基于BATMAN-TCM在线分析平台的浙贝母-瓜蒌配伍治疗慢性阻塞性肺病的网络药理学研究

基于中药分子机理的生物信息学分析工具(bioinformatics analysis tool for molecular mechanism of traditional Chinese medicine,BATMAN-TCM)挖掘浙贝母-瓜蒌治疗慢性阻塞性肺病的分子作用机制。应用BATMAN-TCM预测浙贝母-瓜蒌的潜在靶点,GeneCards数据库检索慢性阻塞性肺病的靶点;应用Cytoscape 3.7.1软件构建化合物-疾病-靶点相互作用网络、蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)的生物通路富集分析。结果筛选得到浙贝母-瓜蒌中21种活性成分,基于STRING构建的浙贝母-瓜蒌靶点PPI网络包含131个节点和236条相互作用关系,关键节点包括ANXA1、EDN1、HDAC1、RXRA、ADRA2A、OXT、RXRB等。GO富集分析途径主要涉及离子门控通道活性、底物特异性通道活性、被动跨膜转运活性、细胞外配体门控离子通道活性、神经递质受体活性、配体门控离子通道活性等。KEGG通道分析主要涉及神经活动配体-受体相互作用、cAMP信号通路、钙离子信使通路、类胆碱能突触、逆行内源性大麻素信号传导、5-羟色胺能突触、多巴胺能突触等途径。研究结果提示浙贝母-瓜蒌关键的作用靶点包括ANXA1、HDAC1等,信号通路方面涉及类胆碱能、5-羟色胺、多巴胺等神经受体相关通路,体现了中药复方的整体性特点,为进一步研究浙贝母-瓜蒌的分子作用机制提供了新思路。

浙贝母治疗白血病的研究进展

现代研究表明,浙贝母具有抗肿瘤活性,常被应用于白血病的研究与临床治疗。浙贝母中的贝母素甲在一定浓度条件下可以通过影响白血病细胞内活氧化状态及谷胱甘肽含量来诱导白血病细胞凋亡。浙贝母中的贝母素甲和浙贝母生物碱成分可以通过影响白血病细胞的各种介导因子来实现逆转白血病多药耐药。浙贝母中的浙贝甲素可以通过抑制白血病细胞中P-糖蛋白的表达来增加抗癌药物在细胞内的蓄积,增加抗癌药物的浓度。本文主要从以下三个方面来论述:(1)诱导白血病细胞凋亡;(2)逆转白血病多药耐药;(3)增加白血病细胞内抗癌药物浓度。本文通过整理浙贝母在治疗白血病方面研究的文章,加以汇总,以期促进对浙贝母的研究,供实验及临床工作者参考。