Wnt5a,Frizzled2及cGMP依赖性蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的通过检测寻常性银屑病皮损及正常皮肤中Wnt5a,Frizzled2及cGMP依赖性蛋白激酶的表达,探讨寻常性银屑病新的发病机制。方法用免疫组织化学的方法检测寻常性银屑病及正常组织中Wnt5a,Frizzled2及cGMP依赖性蛋白激酶的表达。结果 Wnt5a及Frizzled2在寻常性银屑病皮损中表达量增加,与正常组织相比差异有统计学意义(P<0.05);而cGMP依赖性蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中表达降低,与正常组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。cGMP依赖性蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中与Wnt5a,Frizzled2的异常表达呈负相关(P<0.05)。结论 Wnt5a及其相关受体Frizzled2参与了银屑病的发病,其下游因子cGMP依赖性蛋白激酶表达被抑制可能是引起角质形成细胞的异常增殖与凋亡,导致银屑病形成的原因。

Wnt1和Frizzled2在性成熟前小鼠卵巢组织定位及配受体关系鉴定

为揭示Wnt1和Frizzled(Fzd)2参与卵巢和卵泡发育的作用机制,选择12只3周龄小鼠,应用免疫组化研究Wnt1和Fzd2在卵巢组织内的定位,免疫共沉淀鉴定其蛋白间的配受体关系.结果表明:在健康初级、次级卵泡卵母细胞以及腔前和腔后卵泡近基膜颗粒细胞的胞质和胞膜中,Wnt1均表现较强的免疫染色,Fzd2在胞质内免疫染色;在卵泡腔周围颗粒细胞和透明带周围卵丘细胞中Wnt1免疫染色弱;从卵巢中心扩展或环绕生长卵泡的条形基质细胞中Wnt1和Fzd2免疫染色阳性,间质腺存在免疫染色细胞;在闭锁卵泡卵母细胞中Wnt1和Fzd2呈非均匀强染色;在卵母细胞裂解液的Wnt1或Fzd2免疫沉淀物的电泳图谱中,分别同时存在Fzd2和Wnt1蛋白条带.表明Wnt1定位于卵母细胞和近基膜颗粒细胞的胞质和胞膜中,Fzd2定位于胞质内;在卵巢基质细胞、卵泡膜细胞和间质腺细胞中存在Wnt1和Fzd2分布;Wnt1和Fzd2之间可能为配体-受体关系.

窄谱中波紫外线对寻常型银屑病患者Wnt5a/Frizzled2信号分子的影响

目的观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)对寻常型银屑病患者Wnt5a/Frizzled2信号分子表达的影响及其与皮损变化间的相关性,探讨NB-UVB治疗寻常型银屑病的作用机制。方法选取32例寻常型银屑病患者及30例体检健康志愿者分别纳入患者组和健康对照组,患者组均采用NB-UVB照射治疗8周。分别采用RT-PCR法、免疫印迹法检测健康对照组及光疗前、后患者组皮肤组织(皮损区、非皮损区)Wnt5a/Frizzled2信号分子mRNA及蛋白表达含量,并统计患者组治疗前、后皮损面积及严重程度指数(PASI)评分,分析Wnt5a/Frizzled2蛋白含量与PASI评分间的相关性。结果治疗前患者组皮损区Wnt5a/Frizzled2分子mRNA及蛋白表达均明显高于健康对照组和患者组非皮损区水平,差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗后患者组皮损区Wnt5a/Frizzled2 mRNA及蛋白表达均较治疗前皮损区水平明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗前患者组PASI评分为(17.85±6.88)分,皮损区Wnt5a/Frizzled2蛋白表达水平与疾病严重程度间均具有显著正相关性(r=0.743、0.698,P<0.05);经NB-UVB治疗后,患者组PASI评分[(4.23±3.11)分]较治疗前明显降低(P<0.05),此时患者皮损区Wnt5a/Frizzled2蛋白表达水平与疾病严重程度间亦具有显著正相关性(r=0.781、0.723,P<0.01)。结论NB-UVB照射可显著下调寻常型银屑病患者皮损区Wnt5a/Frizzled2信号分子mRNA及蛋白表达水平,这可能是NB-UVB照射治疗银屑病患者的重要机制之一。

Wnt拮抗因子SFRP2在胃癌中的甲基化和异常表达

目的:检测Wnt拮抗因子分泌型Frizzled相关蛋白2(SFRP2)在胃癌中的甲基化和表达状态,探讨SFRP2在胃癌发病机制中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测SFRP2在胃癌中的甲基化状态,采用即时定量PCR检测SFRP2在胃癌组织标本及其癌旁正常组织中的表达。采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测SFRP2在胃癌细胞系中的表达。结果:在胃癌组织中,有26例(65%)检出SFRP2甲基化,在其相应的癌旁组织中,有3例(7.5%)检出SFRP2甲基化。SFRP2在胃癌组织中的甲基化频率显著高于癌旁正常组织(χ2=28.614,P<0.01)。SFRP2mRNA在胃癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。在胃癌细胞系SGC-7901、AGS和NCI-N87中,SFRP2在AGS和NCI-N87发生甲基化,表达消失,而在SGC-7901中未发生甲基化,存在表达。使用去甲基化试剂5-氮杂-2-脱氧胞苷酸(DAC)处理AGS和NCI-N87后,SFRP2重新出现表达。结论:SFRP2在胃癌中存在表达下调,其主要由SFRP2发生甲基化所致。结果提示,SFRP2甲基化及表达下调参与了部分胃癌的发病过程。

胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低wnt2的表达下调PI3K/AKT信号通路的体内外研究

目的:研究人脑胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低wnt2的表达对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:向U251细胞转染靶向Wnt2的siRNA后,免疫印记及免疫荧光检测转染后,Wnt2、Frizzled2、β-catenin、PI3K、磷酸化AKT的表达变化。建立裸鼠胶质瘤皮下动物模型,瘤内注射Wnt2siRNA观察以上指标的表达变化。结果:体外应用RNA干扰敲低Wnt2的表达后,frizzled2、β-catenin、PI3K、p-AKT的表达均下调。结论:胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低Wnt2的表达后,PI3K/AKT信号通路活性受到抑制。

Fzd2诱导ER阴性乳腺癌细胞上皮-间质转化

目的:分析Frizzled 2(Fzd2)在雌激素受体阴性(ER^-)乳腺癌中的表达及其对ER^-乳腺癌细胞上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法:采用免疫组化方法检测Fzd2在乳腺癌组织中的表达;采用Western blot检测Fzd2、E-cadherin、Vimentin、Slug、Zeb1在乳腺癌细胞中的表达;采用伤口愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭。结果:Fzd2在ER^-乳腺癌组织及细胞系中过表达;Fzd2敲减促进Hs578T细胞表达E-cadherin,减少Hs578T细胞表达Vimentin、Slug和Zeb1;Fzd2敲减抑制Hs578T细胞迁移和侵袭。结论:Fzd2诱导ER^-乳腺癌细胞发生EMT;Fzd2可能作为ER^-乳腺癌防治的一个潜在靶向分子。

sFRP-2蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及意义

目的探讨分泌型Frizzled相关蛋白2(sFRP-2)在宫颈癌及癌前病变组织中的表达及临床意义。方法免疫组化SABC法检测51例宫颈鳞癌组织、63例宫颈上皮内瘤变组织和30例正常宫颈组织中sFRP-2蛋白的表达情况,并分析宫颈鳞癌组织中sFRP-2蛋白表达与临床病理参数的关系。结果 sFRP-2的表达在宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中明显低于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈上皮内瘤变Ⅲ级组低于低度病变组(Ⅰ级和Ⅱ级),差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组sFRP-2的表达低于低度病变组,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌组sFRP-2的表达低于高度病变组(P<0.05);在宫颈鳞癌组中,sFRP-2的表达与年龄、肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05),而在不同组织分化程度间表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论经典Wnt信号通路的主要抑制因子sFRP-2蛋白的低表达与宫颈病变的发生、发展有关。

微小RNA-30a-5p抑制胃癌增殖与侵袭的机制

目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型,胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组,miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control,NC),荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮,分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力,细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力;通过免疫组织化学方法验证FZD2基因的蛋白表达水平。各组间比较采用t检验。结果qPCR实验结果显示FZD2 mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.62±0.02比1.01±0.13,t=5.042,P<0.01),c-myc mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.46±0.07比1.01±0.15,t=5.805,P<0.01),Western blot实验结果显示,FZD2蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(1181347.00±39.27比206382.00±8.33,t=1080.000,P<0.01),miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(996269.00±54.50比1168775.00±99.80,t=1104.000,P<0.01),c-myc蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(3307840.00±81.00比253663.00±33.29,t=1072.000,P<0.01),miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(138137.00±131.68比205780.00±77.69,t=766.300,P<0.01);双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中FZD2基因活性显著低于对照组(1.02±0.14比0.59±0.06,t=99.638,P<0.01);CCK-8结果显示转染48 h后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞增殖能力低于miR-30a-5p inhibitor组(93.09±4.18比146.42±5.80,t=12.920,P<0.01)。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个,t=4.440,P<0.05]。免疫组织化学结果显示基因FZD2蛋白在miR-30a-5p低表达[miR-30a-5p/β-肌动蛋白(β-actin)<0.05]的胃癌组织中表达增强(评分≥5分),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论在胃癌中miR-30a-5p可直接靶向FZD2,通过抑制FZD2的表达,降低Wnt信号通路的活性,从而抑制胃癌的发生与发展。