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一种新型靶向Frizzled7抗体的筛选及其人源化设计 被引量:1
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作者 解伟 潘维 +4 位作者 柴彬淑 曹宇 王逸云 徐艳婕 王进 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1276-1284,共9页
目的:获得一种新型靶向人Frizzled7(Fzd7)蛋白的人源化抗体。方法:首先用重组人Fzd7蛋白(rh Fzd7)免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗Fzd7抗体(SHH002),并用生物膜层干涉技术(biolayer interferometry,BLI)检测SHH002的亲和力;测序获得SHH002可... 目的:获得一种新型靶向人Frizzled7(Fzd7)蛋白的人源化抗体。方法:首先用重组人Fzd7蛋白(rh Fzd7)免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗Fzd7抗体(SHH002),并用生物膜层干涉技术(biolayer interferometry,BLI)检测SHH002的亲和力;测序获得SHH002可变区序列(V区),通过与Human Germline序列库比对选择人源化设计模板,利用Discoverystudio软件对SHH002进行人源化设计,获得人源化抗Fzd7抗体SHH002-hu,并对SHH002-hu的纯度和亲和力进行验证,最后通过MTT实验初步验证其抗肿瘤活性。结果:杂交瘤筛选技术获得高亲和力(亲和力常数KD<1.0×10^-12mol·L^-1)鼠源抗Fzd7抗体SHH002;SHH002 V区序列比对Human Germline序列库,选择同源性最高的IGHV1/IGKV1作为人源化设计模板,保留对抗体结构稳定性起关键作用的鼠源氨基酸,将非关键的位点突变为人源氨基酸,获得人源化程度高达98%的人源化抗体SHH002-hu;分子排阻色谱(SEC-HPLC)检测其纯度>95%,BLI法验证其KD<1.0×10^-12mol·L^-1,MTT实验表明SHH002-hu可有效抑制三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞的体外增殖。结论:本实验获得了高度人源化且高亲和力的靶向Fzd7抗体SHH002-hu,为多种恶性肿瘤提供一种全新的靶向治疗候选方案。 展开更多
关键词 frizzled7 抗体人源化 抗肿瘤 亲和力
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miR-27b通过靶向FZD7和Wnt信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖 被引量:1
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作者 李伟 许馨文 +1 位作者 李玲 吕志军 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3863-3867,共5页
为了揭示microRNA-27b (miR-27b)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)细胞增殖中的作用及其潜在的分子机制。本研究通过MTT测定检测细胞增殖,通过qRT-PCR检测miR-27b和Frizzled7 (FZD7)的mRNA表达水平,通过蛋白质印... 为了揭示microRNA-27b (miR-27b)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)细胞增殖中的作用及其潜在的分子机制。本研究通过MTT测定检测细胞增殖,通过qRT-PCR检测miR-27b和Frizzled7 (FZD7)的mRNA表达水平,通过蛋白质印迹分析检测FZD7的蛋白表达水平,使用荧光素酶报告基因测定法测定miR-27b和FZD7之间的关系以及Wnt信号通路的活性。研究显示,与对照相比,OSCC细胞系中miR-27b的表达显著降低(p<0.05)。miR-27b的过表达显著抑制OSCC细胞增殖(p<0.05)。miR-27b可以靶向和抑制FZD7的表达(p<0.05)并降低Wnt信号通路的活性。miR-27b可通过抑制FZD7和Wnt信号通路来抑制OSCC细胞增殖。因此,我们的研究结论初步表明,miR-27b的低表达可能有助于OSCC的肿瘤发生,其有望成为OSCC的新型分子治疗靶标。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 microRNA-27b frizzled7 WNT信号通路 细胞增殖
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