酸枣仁提取物调控miR-7b-3p/5-羟色胺1A受体表达促进骨生长

背景:前期研究发现,酸枣仁提取物通过提高脑组织5-羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)表达,使之与5-羟色胺结合,延长小鼠慢波睡眠,促进生长激素的分泌,从而使骨生长。5-HT1AR作为一种蛋白质,其表达丰度受到miRNA的调控。作者推测酸枣仁提取物可能通过miRNA调控5-HT1AR的表达从而发挥药物作用。目的:观察酸枣仁提取物通过干预小鼠脑组织中miR-7b-3p/5-HT1AR通路对骨骼生长的影响。方法:①将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组(灌胃酸枣仁提取物0.320 mg/g),阳性对照组(灌胃酸枣仁皂甙0.013 mg/g)和酸枣仁提取物+5-HT1AR抑制剂组(灌胃酸枣仁提取物最后3 d同时每天侧脑室注射5-HT1AR选择性抑制剂P-MPPF 8μg),25 d后观察酸枣仁提取物对小鼠骨生长、血清生长激素水平及脑组织5-HT1AR表达的影响;②基因芯片法筛选由酸枣仁提取物引起的骨生长小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并通过PCR验证和双荧光素酶报告基因实验证实筛选的miR-7b-3p与5-HT1AR的调控关系;③体外培养小鼠脑皮质细胞并鉴定,利用Western blot法观察酸枣仁提取物对脑皮质细胞中5-HT1AR表达的影响;④将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组小鼠脑组织5-HT1AR表达及5-羟色胺与5-HT1AR结合活性;⑤将SD大鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组大鼠慢波睡眠的变化。结果与结论:①酸枣仁提取物可以促进小鼠体长、胫骨增长,促进生长激素分泌,提高脑组织5-HT1AR含量;②基因芯片筛选出差异表达的miRNAs个数为16个,其中上调有13个,下调有3个;生物信息学预测下调miR-7b-3p可以调控5-HT1AR表达,且双荧光素酶报告基因实验证实二者有直接调控关系;③酸枣仁提取物和沉默脑皮质细胞中miR-7b-3p表达可以引起5-HT1AR高表达;沉默miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均升高;过表达miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均降低;大鼠慢波睡眠期也相应延长或缩短。结果表明,酸枣仁提取物能够降低脑组织的miR-7b-3p水平,同时增加5-HT1AR的表达量。这种机制有助于延长慢波睡眠周期,并且促进生长激素的生成,对骨骼生长有积极影响,为使用酸枣仁提取物作为促进骨骼生长的潜在手段提供了科学依据。

基于UPLC-Q-TRAP-MS分析养心安神药对酸枣仁-五味子配伍煎煮前后10个指标成分含量变化

目的分析养心安神药对酸枣仁-五味子配伍煎煮前后主要指标成分差异变化,并建立含量测定方法。方法采用Welch Ultimate XB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,5μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,流速0.4 mL/min柱温40℃,梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测离子扫描模式(MRM)。分别对该药对单煎液、单煎合并液与合煎液中主要指标成分酸枣仁皂苷A、斯皮诺素、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、芦丁、槲皮素、山柰酚、山柰酚-3-O-云香糖苷进行含量测定,并分析药对配伍前后主要指标成分的含量变化差异。结果以上10种成分在一定浓度范围内均呈现良好的线性关系;精密度、重复性和稳定性RSD均良好;平均加样回收率在95.0%~102.1%,RSD为0.03%~3.7%。本次实验结果与前期试验认为酸枣仁与五味子在合煎后,主要指标成分降低保持一致性。结论多指标成分同时测定为该药对配伍质量全面控制提供新的方法并为其药效物质基础的深入研究提供依据。

白术、酸枣仁提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果研究

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力及碱性磷酸酶(AKP)活力,以确定对细菌细胞膜和细胞壁的影响,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDSPAGE)凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白含量变化;用结晶紫染色法检测对细菌生物膜的抑制作用。结果表明:0.4 mg/mL白术、酸枣仁提取物单独及0.1 mg/mL二者联合作用对金黄色葡萄球菌均具有显著抑菌效果;与对照组相比,白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均使菌液上清液OD_(260)、OD_(280)数值和AKP活力显著增加,菌体LDH活力和总蛋白含量降低,抑制了生物膜的形成。说明白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均可显著抑制金黄色葡萄球菌,且联合作用抑菌效果显著强于各药物单独作用。

酸枣油及酸枣浸膏降血脂和抗血小板聚集作用的实验研究

口服酸枣油或酸枣浸膏53天,可明显降低日本种雄性鹌鹑高脂模型的TC、LDL和TG,肝脂肪变性亦明显减轻。酸枣油灌胃可明显抑制大鼠的血小板聚集反应,而酸枣浸膏则无明显影响。

酸枣仁-五味子药对的单煎液、单煎混合液与合煎液UPLC特征指纹图谱相关性研究

目的采用UPLC法对酸枣仁-五味子药对的各单煎液、单煎混合液与合煎液的UPLC特征指纹图谱进行相关性研究,考察配伍对药对化学成分的影响。方法 Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相为乙腈-水;体积流量0.25 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm。分别建立10批酸枣仁与五味子药材各单煎液、单煎混合液及合煎液的指纹图谱,标定共有峰,获得对照指纹图谱。结果酸枣仁单煎液指纹图谱中以斯皮诺素为参照峰,确定11个共有峰,五味子单煎液指纹图谱中以五味子醇甲为参照峰,确定10个共有峰,酸枣仁-五味子药对单煎混合液和合煎液指纹图谱中以五味子醇甲为参照峰,确定了16个共有峰,并初步对各共有峰进行归属判断。结论酸枣仁与五味子药材的各单煎液、单煎混合液及合煎液的化学成分种类差异不大,但从峰面积大小看斯皮诺素、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子乙素成分的溶出在配伍前后表现为药对单煎混合液>酸枣仁(五味子)单煎液>药对合煎液。

乌梅酸枣仁口服液的质量标准研究

目的建立乌梅酸枣仁口服液的定性鉴别和含量测定的方法,为乌梅酸枣仁口服液制定质量标准提供参考依据。方法用薄层色谱(Thin Layer Chromatography)法鉴别乌梅酸枣仁口服液中熊果酸、柠檬酸以及酸枣仁皂苷A;高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography)测定乌梅酸枣仁口服液中的有效成分柠檬酸、酸枣仁皂苷A的含量。结果薄层色谱方法简便、专属性强、重复性好。HPLC法测定结果表明柠檬酸、酸枣仁皂苷A分别在0.2～2.4 mg/ml,50～250μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 8,r=0.999 5),平均加样回收率分别为99.53%、99.88%,RSD分别为0.76%,0.71%。结论建立的特征图谱能够准确、快速进行定性、定量检测,可有效的监测该制剂的质量。

酸枣仁皂苷提取物的制备与酸枣仁皂苷A和B的含量测定

目的优化酸枣仁总皂苷的大孔吸附树脂纯化工艺;并进一步建立RP-HPLC法同时测定酸枣仁皂苷提取物中酸枣仁皂苷A和B的含量。方法采用单因素方法对纯化工艺条件进行优化,得到酸枣仁皂苷提取物,进而建立RP-HPLC法对酸枣仁提取物中酸枣仁皂苷A和B进行含量测定。结果最佳纯化工艺为:采用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化,上样吸附时间为1.5 h,洗脱流速为1.0 mL.min-1,体积分数为70%的乙醇溶液洗脱160 mL。采用此纯化方法得到的酸枣仁皂苷提取物中皂苷的质量分数为52%,测得其酸枣仁皂苷A和B的含量质量分数分别为2.298%和0.789%。酸枣仁皂苷提取物中酸枣仁皂苷A和B的质量浓度分别在14.7～293.0 mg.L-1(r=0.999 7,n=6)、7.2～144.0 mg.L-1(r=0.999 6,n=6)内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=9)分别为103.7%、101.9%。结论该工艺稳定可行且提取物中皂苷含量高,具有广泛的应用前景;建立的RP-HPLC法可为酸枣仁皂苷提取物质量标准的建立提供一定依据。

酸枣仁提取物对睡眠剥夺大鼠免疫功能的影响

目的:探讨酸枣仁提取物对睡眠剥夺大鼠免疫功能的影响。方法:30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、实验组,每组各10只。除对照组外,其余两组采用多平台水环境法建立睡眠剥夺动物模型,建模同时实验组给予酸枣仁提取物,模型组与对照组给予等量生理盐水。计算大鼠脾脏指数、胸腺指数,采用MMT法评价脾淋巴细胞活性和NK细胞活性。通过旷场实验测定大鼠行为学。测定外周血CD4^+、CD8^+T淋巴细胞比例、CD4^+/CD8^+。采用ELISA测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-2、IL-6水平。结果:与模型组相比,实验组大鼠旷场实验水平和垂直得分、脾脏指数、胸腺指数、T淋巴细胞活性显著升高;CD4^+T淋巴细胞比例和CD4^+/CD8^+T淋巴细胞比值显著升高,CD8^+T淋巴细胞比例显著降低,TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6水平均显著下降(P<0.05)。结论:酸枣仁提取物能够缓解睡眠剥夺引起的焦虑行为,通过调节T淋巴细胞亚群平衡,抑制血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6炎症因子释放,改善免疫功能。

枣属药用植物资源产业化过程副产物及废弃物的资源价值发现与循环利用策略构建

我国枣属(Ziziphus)植物可供药用的主要有枣、酸枣和滇刺枣,均属药食同源品种,资源需求量大。但其在生产及深加工过程产生大量废弃物及副产物,因无有效利用途径而废弃,造成资源浪费与环境污染。结合课题组前期研究进展,对该类群药用植物资源产业化过程废弃物及副产物的产生及其潜在资源价值进行了分析,对其资源利用途径与系统利用策略进行了整理,以期为我国枣属药用植物资源产业链延伸提供支撑,为其资源价值提升提供借鉴。

微波辅助提取酸枣仁油工艺研究

应用微波辅助提取酸枣仁油,采用单因素实验和正交实验法考察了提取时间、提取温度和料液比对提取率的影响,得到了最佳提取工艺条件:提取温度为40℃,提取时间为5min,料液比为1:6。与直接加热提取法比较,微波辅助提取时间明显的缩短,提取温度也比传统方法下降15℃,所用溶剂量也较低。

酸枣仁醇提物中4个活性成分的测定

目的建立HPLC-ELSD法同时检测酸枣仁醇提物中4个活性成分的方法。方法色谱柱为Agilent TC-C18BDS(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,ELSD漂移管温度为110.5℃,气体流量为3.1 mL/min。结果 4个活性成分斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸均达到基线分离,其进样量分别在0.110～1.10、0.042～2.12、0.020～1.01、0.078～7.84μg范围内与峰面积分值呈良好线性关系,平均回收率分别为99.98%、97.80%、97.24%、95.04%(RSD≤4.3%)。结论本法灵敏度高、重现性好,可用于酸枣仁醇提物的质量控制。

酸枣仁-五味子药对提取工艺研究

目的优选酸枣仁-五味子药对的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以酸枣仁-五味子药对中五味子醇甲含量和水提浸膏得率为指标,采用超高液相色谱法测定五味子醇甲含量,考察加水量、提取时间、提取次数对水提取工艺的影响。结果最佳提取工艺为加10倍药材量的水,煎煮3次,每次1.5 h。结论优选的提取工艺稳定、可行。

超临界二氧化碳萃取酸枣仁油的指纹图谱研究

目的:建立酸枣仁有效部位的指纹图谱,为酸枣仁的质量控制提供依据。方法:采用J&W Scientific DB-WAX石英毛细管柱,120℃程序升温到220℃,FID检测器,汽化温度240℃,检测温度250℃,分流比1∶10。结果:确立了酸枣仁有效部位指纹图谱的气相分析条件,建立了酸枣仁有效部位的特征指纹图谱。结论:酸枣仁有效部位中各成分得到较好分离,可作为中药酸枣仁质量控制的依据。

多指标正交试验法优选酸枣仁药材水提取工艺

目的:以浸膏收率、总皂苷含量、斯皮诺素含量为指标,优选酸枣仁药材水提取工艺。方法:采用正交试验,考察煎煮时间、提取次数和加水倍量3个因素,对酸枣仁药材水提取工艺条件进行优化。结果:酸枣仁药材最佳水提取工艺条件为加10倍量水浸泡过夜,加热煎煮3次,每次1h。结论:该提取工艺稳定可行,重现性好,适于酸枣仁药材水提取。

乌梅酸枣仁提取物对鸡人工感染传染性法氏囊病的疗效试验

本试验旨在验证乌梅酸枣仁提取物对鸡传染性法氏囊病的预防和治疗效果。以鸡传染性法氏囊LX毒株感染未接种法氏囊疫苗的雏鸡,建立动物模型;以自拟乌梅酸枣仁提取物分高、中、低3个剂量组口服,以黄芪多糖为对照,评价其预防和治疗鸡传染性法氏囊病的疗效。结果表明:①人工感染鸡传染性法氏囊病毒后,预防试验中测试药物中剂量组、黄芪多糖组的相对增重率分别为81.85%和48.24%;成活率分别为87.5%和100%。统计分析结果表明,测试药物中剂量组的相对增重率显著高于黄芪多糖组(P<0.05),两组成活率差异不显著(P>0.05);中剂量组、黄芪多糖组的法氏囊指数分别为0.187和0.123,脾脏指数分别为0.361和0.286。中剂量组的免疫器官指数均明显高于黄芪多糖组,差异显著(P<0.05)。②治疗试验中,测试药物中剂量组、黄芪多糖组的相对增重率分别为29.55%和46.1%,成活率分别为100%和80%。中剂量组、黄芪多糖组的法氏囊指数分别为0.22和0.25,脾脏指数分别为0.34和0.36。经过统计学分析,上述两试验组的各项指标差异均不显著(P>0.05)。由此可知,乌梅酸枣仁提取物以200mg/kg体重口服,连续5d能有效提高人工感染传染性法氏囊病鸡的成活率,且预防和治疗保护率均超过80%;测试药物通过提高鸡法氏囊、脾脏指数而发挥增强机体免疫功能抵抗病毒侵害的功效。

酸枣仁总黄酮提取工艺及其预测模型研究

【目的】研究优化酸枣仁总黄酮的提取工艺。【方法】采用星点设计-效应面法,对酸枣仁总黄酮的超声提取工艺进行优化。以乙醇体积分数、液(体积,mL)料(质量,g)比、提取时间为自变量,以总黄酮提取量为因变量建立预测模型,并进行了验证。【结果】总黄酮提取量与3个影响因素不能用线性关系进行描述,采用二次多项式的拟合效果较好,复相关系数R2=0.887 9,具有较高的可信度。优选的最佳工艺为:乙醇体积分数84%,液料比40mL/g,提取时间35 min;最佳工艺验证结果与模型预测值相差2.30%,总黄酮提取率达到95.05%。【结论】星点设计-效应面法可以快速、简便地优化酸枣仁总黄酮的超声提取工艺,所建模型预测性良好,工艺稳定可行。

LC-MS-MS法测定4种中药中的呕吐毒素

目的：建立酸枣仁、淡豆豉、薏苡仁、补骨脂等4种中药中呕吐毒素的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱（ LC-MS-MS）测定方法。方法：样品经水提取、免疫亲和柱净化后,用LC-MS-MS法进行分析测定。结果：呕吐毒素在2-50 ng·;ml-1范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,r＞0.999,加样回收率在68.7%-88.3%之间。结论：本法简便快速、灵敏度高、结果准确,可用于酸枣仁等4种中药中呕吐毒素的测定分析。

乌梅酸枣仁提取物对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果

目的实验室评价乌梅酸枣仁提取物对鸡致病性大肠杆菌病的疗效。方法根据前期研究自拟乌梅酸枣仁提取物配方,以体外试管二倍稀释法测定其最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),建立鸡致病性大肠杆菌病模型,评价其预防和治疗鸡大肠杆菌病疗效。结果体外试验显示其最小抑菌浓度为12.5 mg/mL;人工感染鸡大肠杆菌病模型显示预防试验中乌梅酸枣仁提取物高、中、低剂量组、利好对照组、感染对照组的成活率分别为50%、70%、50%、60%、10%;肝脏细菌检出率均为100%。治疗试验中上述各组成活率分别为62.5%、50%、37.5%、62.5%、25%;肝脏细菌检出率均为100%。结论体外、体内试验结果表明,乌梅酸枣仁提取物能有效减少人工感染后的临床症状,保护率为50%～70%,推荐使用剂量为200 mg/kg体重,可以替代部分抗生素防治此病。

基于高效液相色谱定量指纹图谱和液相色谱-质谱联用定量的酸枣仁提取物质量考察

酸枣仁具有显著的改善睡眠和抗焦虑等作用,其提取物在助眠类功能食品开发中应用前景广阔。但目前市场上酸枣仁提取物质量参差不齐,缺乏统一标准,企业在使用时面临较大的质量风险,因此亟须建立一种准确、全面的内控质量评价方法。针对酸枣仁提取物中黄酮和皂苷两类主要活性成分紫外响应差异巨大且水提物中皂苷成分含量低的问题,该研究建立了酸枣仁水提物HPLC定量指纹图谱方法,共标定了8个共有峰。通过对照品指认、文献比对以及高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱数据解析,8个共有峰均为黄酮类化合物,该方法可同时实现7种黄酮成分的半定量对比分析和斯皮诺素的含量测定;采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱,在正离子模式下,以多反应监测扫描方式可实现酸枣仁皂苷A和B的含量测定;最终以雷达图展现上述10种成分的半定量和定量数据。应用上述方法,该研究对比分析了实验室自制的3批酸枣仁水提物和15家供应商的15批提取物样品。结果显示,实验室自制的3批酸枣仁水提物虽然原料来自不同饮片企业,但总体差异性不大,而不同厂家提供的酸枣仁提取物样品成分含量差异巨大,提示不同厂家存在辅料稀释、理枣仁掺假和醇提或纯化富集等情况。该法为企业制定内控质量标准和筛选合格供应商提供了依据。

酸枣仁提取物的生物学作用及其在畜牧生产中的应用

酸枣仁提取物是镇静安神的传统中药,其发挥生物学功能的主要成分是其中的皂苷和黄酮类。该提取物逐步受到中兽医的关注,在畜牧生产中有着广泛的开发利用前景。作者主要综述酸枣仁提取物对中枢神经系统、免疫系统及其在畜牧生产中应用的影响,为其在畜牧生产中的开发应用提供依据。