FrzA基因转导干预对大鼠体外缺血缺氧心肌细胞Wnt信号通路相关分子表达及细胞凋亡的影响

目的探讨重组9型腺相关病毒(r AAV9)携带Frz A基因转导对心肌细胞缺血缺氧模型Wnt信号通路活性的抑制作用及心肌细胞凋亡的影响。方法分离培养SD大鼠心肌细胞,将r AAV9携带Frz A基因转导至心肌细胞,在r AAV9表达高峰时建立心肌细胞缺血缺氧模型。随机分为空白组、缺血缺氧组、缺血缺氧+r AAV9-CMV-e GFP组(空病毒组)、缺血缺氧+r AAV9-CMV-Frz A组(Frz A组)。采用RT-PCR检测各组心肌目的基因Frz A的表达;Western blotting测定心肌细胞Wnt信号通路关键分子Dvl-1、β-catenin、c-Myc水平及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 r AAV9转染第5天,目的基因Frz A在心肌细胞中高表达(P<0.05)。缺血缺氧组、空病毒组、Frz A组Wnt信号通路关键分子Dvl-1、β-catenin、c-Myc表达及凋亡蛋白Bax/Bcl-2值较空白组明显升高(P均<0.05)。Frz A组心肌细胞中Wnt信号通路关键分子Dvl-1、β-catenin、c-Myc表达及凋亡蛋白Bax/Bcl-2值低于缺血缺氧组、空病毒组(P均<0.05)。结论 r AAV9介导的Frz A基因转导可有效干预Wnt信号通路,抑制其活性,从而减轻心肌细胞凋亡。

FrzA基因减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤

目的探讨FrzA基因通过mTOR信号通路减轻过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导心肌细胞H9c2凋亡和氧化应激。方法建立大鼠H9c2的H_(2)O_(2)氧化应激损伤模型,作为H_(2)O_(2)组,正常培养的H9c2作为Con组。将pcDNA3.0、pcDNA3.0-FrzA转染至H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞,分别作为pcDNA3.0组、pcDNA3.0-FrzA组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FrzA mRNA表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;细胞凋亡率使用流式细胞术测定;选取相应试剂盒测定MDA含量以及SOD和CAT活力;采用ELISA法检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β水平;采用蛋白质印迹(Western blot)检测cleaved caspase-3和caspase-3蛋白、p-mTOR蛋白表达。结果与Con比较,HO细胞FrzA mRNA表达显著降低(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞活力显著升高(P<0.05);与pcD-NA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞凋亡率及cleaved caspase-3蛋白表达均呈下降趋势,而caspase-3蛋白表达呈上升趋势(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞MDA含量显著降低,SOD和CAT活力显著升高(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05);与Con比较,H_(2)O_(2)细胞p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论过表达FrzA基因可能通过抑制mTOR信号通路减轻H2O2诱导心肌细胞凋亡和氧化应激。