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Cloned s-Lap Gene Coding Area, Expression and Localization of s-Lap/GFP Fusion Protein in Mammal Cells
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作者 SONGYi-shu SONGZhi-yu +4 位作者 LIHong-jun WuYin BAOYong-li TANDa-peng LIYu-xin 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2005年第3期298-300,共3页
s-Lap is a new gene sequence from pig retinal pigment epithelial(RPE) cells, which was found and cloned in the early period of apoptosis of RPE cells damaged with visible light. We cloned the coding area sequence of t... s-Lap is a new gene sequence from pig retinal pigment epithelial(RPE) cells, which was found and cloned in the early period of apoptosis of RPE cells damaged with visible light. We cloned the coding area sequence of the novel gene of s-Lap and constructed its recombinant eukaryotic plasmid pcDNA3.1-GFP/s-lap with the recombinant DNA technique. The expression and localization of s-lap/GFP fusion protein in CHO and B_~16 cell lines were studied with the instantaneously transfected pcDNA3.1-GFP/s-lap recombinant plasmid. ~s-Lap/GFP fusion protein can be expressed in CHO and B_~16 cells with a high rate expression in the nuclei. 展开更多
关键词 s-Lap gene fusion protein Mammal cell expression LOCALIZATION
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Expression of CDC42 in cervical squamous cell carcinoma and its correlation with clinicopathologic characteristics 被引量:3
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作者 Ding Ma Yuan Cheng +3 位作者 Youyi Zhang Yanli Guo Zijian Li Geng Li 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第6期656-661,共6页
Objective: The high expression of cell division cycle 42 protein (CDC42) may be involved in the occurrence and progression of several tumors. However, the expression and function of CDC42 in cervical squamous cell ... Objective: The high expression of cell division cycle 42 protein (CDC42) may be involved in the occurrence and progression of several tumors. However, the expression and function of CDC42 in cervical squamous cell carcinoma remains unclear. This study aimed to investigate the expression of CDC42 in cervical squamous cell carcinoma and its correlation with clinicopathologic characteristics. Methods: The expression of CDC42 in 162 cervical squamous cell carcinoma tissue samples and 33 normal cervical tissue samples was investigated by immunohistochemistry. The CDC42 mRNA expression was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Results: The cervical squamous cell carcinoma group showed a significantly higher CDC42 positive rate, compared to the normal cervical tissues (P〈0.05). Fttrthermore, the tissues of stage Ⅱ-Ⅳ carcinoma patients showed higher CDC42 expression levels compared to stage I patients (P=0.05). In addition, the expression of CDC42 was not correlated to age of patients, differentiation degree of cancer cells, or lymph node metastasis (P〉0.05). Furthermore, compare with normal cervical tissues, the CDC42 mRNA expression in cervical cancer had no significant difference. Conclusions: CDC42 was up-regulated at protein level, but not mRNA level, in cervical squamous cell carcinoma. The high expression of CDC42 was correlated to the clinical stage of the patients, indicating that CDC42 might contribute to the progression of cervical squamous cell carcinoma. 展开更多
关键词 cell division cycle 42 protein (CDC42) cervical squamous cell carcinoma expression
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Adenovirus-mediated expression of pig α(1,3) galactosyltransferase reconstructs Gal α(1,3) Gal epitope on the surface of human tumor cells 被引量:3
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作者 XingL XiaGH 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期116-124,共9页
Gal alpha(1, 3) Gal (gal epitope) is a carbohydrate epitope and synthesized in large amount by alpha(1, 3) galactosyltransferase [alpha(1, 3) GT] enzyme on the cells of lower mammalian animals such as pigs and mice. H... Gal alpha(1, 3) Gal (gal epitope) is a carbohydrate epitope and synthesized in large amount by alpha(1, 3) galactosyltransferase [alpha(1, 3) GT] enzyme on the cells of lower mammalian animals such as pigs and mice. Human has no gal epitope due to the inactivation of alpha(1, 3) GT gene but produces a large amount of antibodies (anti-Gal) which recognize Gal alpha(1, 3) Gal structures specifically. In this study, a replication-deficient recombinant adenoviral vector Ad5sGT containing pig alpha(1, 3) GT cDNA was constructed and characterized. Adenoviral vector-mediated transfer of pig alpha(1, 3) GT gene into human tumor cells such as malignant melanoma A375, stomach cancer SGC-7901, and lung cancer SPC-A-1 was reported for the first time. Results showed that Gal epitope did not increase the sensitivity of human tumor cells to human complement-mediated lysis, although human complement activation and the binding of human IgG and IgM natural antibodies to human tumor cells were enhanced significantly after Ad5sGT transduction. Appearance of gal epitope on the human tumor cells changed the expression of cell surface carbohydrates reacting with Ulex europaeus I (UEA I) lectins, Vicia villosa agglutinin (VVA), Arachis hypogaea agglutinin (PNA), and Glycine max agglutinin (SBA) to different degrees. In addition, no effect of gal epitope on the growth in vitro of human tumor cells was observed in MTT assay. 展开更多
关键词 ADENOVIRIDAE Animals Blood proteins cell division DISACCHARIDES Epitopes Galactosyltransferases Gene expression Regulation Neoplastic Genetic Vectors Humans Membrane Glycoproteins Research Support Non-U.S. Gov't Swine Time Factors Transduction Genetic Tumor cells Cultured
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FtsZ抑制剂作为新型抗菌分子的研究进展
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作者 郭琦 郭泽莉 +1 位作者 吴文玉 孙宁 《广州医药》 2023年第2期9-17,共9页
近年来,由于抗生素的不合理使用,导致新型耐药性细菌不断出现,严重危害人类健康,迫使我们急需发现新型抗菌药物来对抗耐药性细菌引起的感染。FtsZ蛋白是细菌分裂的必需蛋白,在细菌分裂增殖过程中起着关键作用。当FtsZ的功能受到抑制时,... 近年来,由于抗生素的不合理使用,导致新型耐药性细菌不断出现,严重危害人类健康,迫使我们急需发现新型抗菌药物来对抗耐药性细菌引起的感染。FtsZ蛋白是细菌分裂的必需蛋白,在细菌分裂增殖过程中起着关键作用。当FtsZ的功能受到抑制时,细菌的分裂增殖亦会被抑制,最终导致细菌死亡。FtsZ蛋白是目前热门的抗菌新靶点之一。本文回顾了FtsZ蛋白的生物学功能,总结了以FtsZ为靶标的新型抗菌分子的研究进展。 展开更多
关键词 耐药性细菌 细菌分裂蛋白ftsz ftsz抑制剂
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Construction of the Eukaryotic Expression Vector with EGFP and hVE GF121 Gene and its Expression in Rat Mesenchymal Stem Cells
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作者 苏立 际运贞 +1 位作者 张晓刚 余强 《South China Journal of Cardiology》 CAS 2005年第1期11-15,共5页
Objectives To construct a recombinant plasmid carrying enhanced green fluore- scent protein (EGFP) and human vascular endothelial growth factor (VEGF) 121 gene and detect its expre- ssion in rat mesenchymal stem cells... Objectives To construct a recombinant plasmid carrying enhanced green fluore- scent protein (EGFP) and human vascular endothelial growth factor (VEGF) 121 gene and detect its expre- ssion in rat mesenchymal stem cells (MSCs). Methods Human VEGF121 cDNA was amplified with polymerase chain reaction (PCR) from pCD/hVEGF121 and was inserted into the eukaryotic expression vector pEGFP- C1. After being identified with PCR, double enzyme digestion and DNA sequencing. The recombinant plasmid pEGFP/hVEGF121 was transferred into rat MSCs with lipofectamine. The expression of EGFP/VEGF121 fusion protein were detected with fluorescence microscope and immunocytochemical staining respectively. Results The recombinant plasmid was confirmed with PCR, double enzyme digestion and DNA sequencing. The fluoresce- nce microscope and immunocytochemical staining results showed that the EGFP and VEGF121 protein were expressed in MSCs 48 h after transfection. Conclusions The recombinant plasmid carrying EGFP and human VEGF was successfully constructed and expressed positively in rat MSCs. It offers a promise tool for further research on differentiation of MSCs and VEGF gene therapy for ischemial cardiovascular disease. 展开更多
关键词 Vascular endothelial growth factor Enhanced green fluorescent protein fusion protein Mesenchymal stem cells Gene expression
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叶绿体分裂相关基因NtFtsZ2-1在大肠杆菌中的表达与定位 被引量:6
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作者 孔冬冬 王东 +3 位作者 胡勇 鞠传丽 何奕昆 孙敬三 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期368-372,共5页
FtsZ蛋白在细菌的分裂中担任着重要作用,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程。胞内FtsZ蛋白浓度的明显降低或异常升高均可阻断正常的细胞分裂过程进而导致丝状菌体的产生。我们为了研究烟草FtsZ蛋白与大肠杆菌FtsZ蛋... FtsZ蛋白在细菌的分裂中担任着重要作用,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程。胞内FtsZ蛋白浓度的明显降低或异常升高均可阻断正常的细胞分裂过程进而导致丝状菌体的产生。我们为了研究烟草FtsZ蛋白与大肠杆菌FtsZ蛋白的异同,构建了烟草全长ftsZ2-1与绿色荧光蛋白EGFP的融合表达质粒并转化大肠杆菌JM109。融合表达质粒的过量表达导致宿主菌形成了丝状菌体。通过荧光显微镜观察发现NtFtsZ2-1-EGFP融合蛋白沿着宿主菌体的纵轴方向有规律地聚集成荧光点或荧光带,说明烟草FtsZ2-1蛋白能够识别宿主菌内分裂位点的定位信号并参与其细胞分裂复合物的组装。 展开更多
关键词 叶绿体 分裂相关基因 Ntftsz2-1 大肠杆菌 表达 定位
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衣藻CrFtsZ2-GFP融合蛋白在E.coli中的表达及其定位 被引量:3
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作者 胡勇 雷启义 +2 位作者 孔冬冬 刘祥林 何奕昆 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期484-489,共6页
FtsZ蛋白在细菌的分裂中担任着重要作用 ,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程。胞内FtsZ蛋白浓度的异常升高或降低均可阻断正常的细胞分裂过程进而形成分裂异常的丝状菌体。为了研究衣藻FtsZ蛋白的生物学活性 ,构建了... FtsZ蛋白在细菌的分裂中担任着重要作用 ,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程。胞内FtsZ蛋白浓度的异常升高或降低均可阻断正常的细胞分裂过程进而形成分裂异常的丝状菌体。为了研究衣藻FtsZ蛋白的生物学活性 ,构建了衣藻CrFtsZ2cDNA全长与绿色荧光蛋白基因egfp的融合表达质粒 ,并对其在大肠杆菌中的表达与定位做了初步分析。在大肠杆菌JM10 9中 ,融合表达质粒的过量表达导致宿主菌形成了丝状菌体 ,通过荧光显微镜观察发现CrFtsZ2 EGFP融合蛋白沿着宿主菌体的纵轴方向有规律地聚集成荧光点或荧光带 ,暗示衣藻CrFtsZ2蛋白能够识别宿主菌内分裂位点的定位信号并参与其细胞分裂过程 ,初步验证了衣藻CrFtsZ2蛋白的功能。 展开更多
关键词 衣藻 融合蛋白 细胞分裂 融合表达 大肠杆菌
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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析 被引量:1
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作者 千爱君 萧耿苗 +4 位作者 李壮 梁志成 穆云萍 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,... 目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白 真核表达 悬浮CHO-S细胞 cAMP活性 基因工程 脂代谢
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衣藻叶绿体分裂基因CrFtsZ1在E.coli中的表达 被引量:2
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作者 王彩华 雷启义 +1 位作者 胡勇 刘祥林 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第5期803-807,共5页
FtsZ蛋白在细菌的分裂中起着重要作用,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程.细胞内FtsZ蛋白浓度的明显降低或异常升高均可阻断正常的细胞分裂过程进而导致丝状菌体的产生.为了研究衣藻叶绿体分裂基因ftsZ的功能,构建了... FtsZ蛋白在细菌的分裂中起着重要作用,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程.细胞内FtsZ蛋白浓度的明显降低或异常升高均可阻断正常的细胞分裂过程进而导致丝状菌体的产生.为了研究衣藻叶绿体分裂基因ftsZ的功能,构建了衣藻CrFtsZ1的原核表达重组质粒.试验结果表明,衣藻ftsZ的表达严重影响了大肠杆菌的分裂,初步证明衣藻FtsZ蛋白不仅与E.coliFtsZ蛋白在序列上相似,而且也有着相似的功能,同时这一结果也为真核细胞中质体的内共生起源提供了直接的证据. 展开更多
关键词 衣藻 ftsz蛋白 基因表达 细胞分裂
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细菌分裂蛋白及FtsZ抑制剂的研究进展 被引量:4
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作者 黄玄贺 孙宁 +4 位作者 钟冬晓 陈翠翠 李莹 黄永樑 卢宇靖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2020年第9期935-955,共21页
近年来,由于抗生素的滥用,耐药性细菌广泛出现,对人体健康的威胁日益严峻.随着临床用药的选择不断减少,迫切需要开发新的抗菌药物,特别是新作用机制的抗菌分子来对抗出现的耐药菌.细胞分裂温度敏感.突变体Z(filamenting temperature-set... 近年来,由于抗生素的滥用,耐药性细菌广泛出现,对人体健康的威胁日益严峻.随着临床用药的选择不断减少,迫切需要开发新的抗菌药物,特别是新作用机制的抗菌分子来对抗出现的耐药菌.细胞分裂温度敏感.突变体Z(filamenting temperature-setnsitive mutant Z,FtsZ)作为细菌分裂的必需蛋白质,是目前研究最热门的作用靶点之一.FtsZ是一高度保守的蛋白质,在大多数原核细胞的细胞分裂中发挥着关键作用,本文回顾了细菌分裂蛋白的结构特点及其生物学功能,并综述了以FtsZ为靶点的抗菌药物研究的进展. 展开更多
关键词 耐药菌 抗菌药物 分裂蛋白ftsz ftsz抑制剂
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The effect of adenovirus expressing wild-type p53 on 5-fluorouracil chemosensitivity is related to p53 status in pancreatic cancer cell lines 被引量:14
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作者 Sven Eisold Michael Linnebacher +4 位作者 EduardRyschich DaliborAntolovic UlfHinz Ernst Klar Jan Schmidt 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2004年第24期3583-3589,共7页
AIM:There are conflicting data about p53 function on cellular sensitivity to the cytotoxic action of 5-fluorouracil (5-FU). Therefore the objective of this study was to determine the combined effects of adenovirus-med... AIM:There are conflicting data about p53 function on cellular sensitivity to the cytotoxic action of 5-fluorouracil (5-FU). Therefore the objective of this study was to determine the combined effects of adenovirus-mediated wild-type (wt) p53 gene transfer and 5-FU chemotherapy on pancreatic cancer cells with different p53 gene status. METHODS:Human pancreatic cancer cell lines Capan-1^(p53mut), Capan-2^(p53wt),FAMPAC^(p53mut),PANC1^(p53mut),and rat pancreatic cancer cell lines AS^(p53wt) and DSL6A^(p53null) were used for in vitro studies.Following infection with different ratios of Ad- p53-particles (MOI) in combination with 5-FU,proliferation of tumor cells and apoptosis were quantified by cell proliferation assay (WST-1) and FACS (PI-staining).In addition,DSL6A syngeneic pancreatic tumor cells were inoculated subcutaneously in to Lewis rats for in vivo studies. Tumor size,apoptosis (TUNEL) and survival were determined. RESULTS:Ad-p53 gene transfer combined with 5-FU significantly inhibited tumor cell proliferation and substantially enhanced apoptosis in all four cell lines with an alteration in the p53 gene compared to those two cell lines containing wt-p53.In vivo experiments showed the most effective tumor regression in animals treated with Ad-p53 plus 5-FU.Both in vitro and in vivo analyses revealed that a sublethal dose of Ad-p53 augmented the apoptotic response induced by 5-FU. CONCLUSION:Our results suggest that Ad-p53 may synergistically enhance 5-FU-chemosensitivity most strikingly in pancreatic cancer cells lacking p53 function.These findings illustrate that the anticancer efficacy of this combination treatment is dependent on the p53 gene status of the target tumor cells. 展开更多
关键词 ADENOVIRIDAE Adult Animals Antimetabolites Antineoplastic Apoptosis cell division cell Line Tumor Combined Modality Therapy Drug Resistance Neoplasm Female Fluorouracil Gene expression Regulation Neoplastic Gene Therapy Humans In Vitro Male Pancreatic Neoplasms RATS Rats Inbred Lew Transduction Genetic Tumor Suppressor protein p53
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Blockage of IGF-1R signaling sensitizes urinary bladder cancer cells to mitomycin-mediated cytotoxicity 被引量:13
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作者 SunHZ WuSF 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期107-115,共9页
A major problem which is poorly understood in the management of bladder cancer is low sensitivity to chemotherapy and high recurrence after transurethral resection. Insulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R) signa... A major problem which is poorly understood in the management of bladder cancer is low sensitivity to chemotherapy and high recurrence after transurethral resection. Insulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R) signaling plays a very important role in progression, invasion and metastasis of bladder cancer cells. In this study, we investigated whether IGF-1R was involved in the growth stimulating activity and drug resistance of bladder cancer cells. The results showed: The mRNAs of IGF-1, IGF-2 and IGF-1R were strongly expressed in serum-free cultured T24 cell line, whereas normal urothelial cells did not express these factors/receptors or only in trace levels; T24 cell responded far better to growth stimulation by IGF-1 than did normal urothelial cells; blockage of IGF1R by antisense oligodeoxynucleotide (ODN) significantly inhibited the growth of T24 cell and enhanced sensitivity and apoptosis of T24 cells to mitomycin (MMC). These results suggested that blockage of IGF-IR signaling might potentially contribute to the treatment of bladder cancer cells which are insensitive to chemotherapy. 展开更多
关键词 Antibiotics Antineoplastic Apoptosis Autocrine Communication Bladder Neoplasms Carcinoma Transitional cell cell division CYTOTOXINS Drug Resistance Neoplasm Gene expression Regulation Neoplastic Gene Targeting Humans Insulin-Like Growth Factor I Insulin-Like Growth Factor II Microscopy Electron MITOMYCIN Oligodeoxyribonucleotides Antisense protein Synthesis Inhibitors RNA Messenger Receptor IGF Type 1 Signal Transduction Tumor cells Cultured
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非洲猪瘟病毒p72蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 被引量:4
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作者 吴宏举 李潮 +6 位作者 郑南南 侯浩宇 陈寅龙 靳家鑫 孙爱军 杜永坤 张改平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期1-6,13,122,共8页
为了研发非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的免疫学诊断试剂,试验将ASFV B646L基因克隆至pET-30a(+)载体中构建表达载体pET-30a(+)-p72,利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,采用SDS-PAGE分析诱导表达的大肠杆菌,以镍柱对... 为了研发非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的免疫学诊断试剂,试验将ASFV B646L基因克隆至pET-30a(+)载体中构建表达载体pET-30a(+)-p72,利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,采用SDS-PAGE分析诱导表达的大肠杆菌,以镍柱对重组蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定纯化的重组蛋白。用纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合方法制备杂交瘤细胞。采用间接ELISA方法筛选并检测单克隆抗体,以Western-blot及IFA方法鉴定单克隆抗体的特异性,并通过Mouse Monoclonal Antibody Isotyping ELISA Kit鉴定单克隆抗体的亚型。结果表明:PCR扩增得到大小约为1 941 bp的B646L基因,并成功构建了表达载体pET-30a(+)-p72。诱导表达的大肠杆菌在72 ku处出现目的条带,纯化后的重组蛋白p72在72 ku处出现目的条带。筛选出4种单克隆抗体2C7D8、2E6D12、3B10E3、4G5E6,其效价在1∶100 000~1∶500 000之间,且4种单克隆抗体均能特异性识别真核及原核表达的p72蛋白。4种单克隆抗体的重链亚型均为IgG2b,单克隆抗体2C7D8和4G5E6的轻链亚型为Lambda, 2E6D12和3B10E3的轻链亚型为Kappa。说明利用大肠杆菌表达系统原核表达ASFV重组蛋白p72及制备相应的单克隆抗体是可行的。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 单克隆抗体 原核表达 细胞融合
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肺腺癌组织细胞分裂周期相关蛋白8蛋白表达及与临床病理参数、预后关系分析 被引量:2
14
作者 王镜纯 吴宝 白玉勤 《陕西医学杂志》 CAS 2023年第10期1427-1430,共4页
目的:分析肺腺癌(LUAD)组织细胞分裂周期相关蛋白8(CDCA8)蛋白表达水平,并探究CDCA8蛋白表达与临床病理参数、预后的关系。方法:选择98例LUAD患者,按照CDCA8蛋白表达水平分为高阳性组(67例)和低阳性组(31例)。收集并比较两组临床病理参... 目的:分析肺腺癌(LUAD)组织细胞分裂周期相关蛋白8(CDCA8)蛋白表达水平,并探究CDCA8蛋白表达与临床病理参数、预后的关系。方法:选择98例LUAD患者,按照CDCA8蛋白表达水平分为高阳性组(67例)和低阳性组(31例)。收集并比较两组临床病理参数,并通过生存曲线来比较两组LUAD患者无病生存率和总生存率。结果:以CDCA8蛋白表达为因浓度变量,并以TNM分期、肿瘤体积、淋巴结转移、脏层胸膜侵犯为协变量,Logistics回归分析结果显示肿瘤体积(10~30 mm^(2)、>30 mm^(2))、淋巴结转移是CDCA8蛋白高阳性表达的影响因素(P<0.05)。CDCA8蛋白高阳性组无病生存率、总生存率为28.5%、60.9%,低于低阳性组的51.6%、80.0%(均P<0.05)。结论:LUAD组织CDCA8(1∶500稀释)蛋白表达与临床病理参数、预后存在直接关联,检测CDCA8(1∶500稀释)蛋白表达水平可以帮助临床医生判断LUAD患者病情进展和预后,利于指导治疗方案制定。 展开更多
关键词 肺腺癌 细胞分裂周期相关蛋白8 蛋白表达 病理参数 预后 生存分析
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人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用 被引量:6
15
作者 赵晶 贾林涛 +5 位作者 许彦鸣 金明 张淼丽 李继硕 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期113-116,共4页
目的  观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用。 方法用RT-PCR法获取人granzyme B全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段 PE转膜肽序列融合。将所获重组基因... 目的  观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用。 方法用RT-PCR法获取人granzyme B全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段 PE转膜肽序列融合。将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞。用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达,荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构。 结果成功地获得了野生型granzyme B cDNA及其融合蛋白基因,并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体。转染HeLa细胞后,检测到目的蛋白的表达。荧光显微镜观察转染细胞有两种变化:一种表现为体积增大并常伴随多核现象;另一种出现细胞质和细胞核的固缩。电镜观察显示,多核巨细胞生长状态良好,固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征。结论granzyme B融合蛋白在HeLa细胞中异位表达,可使转染细胞的形态发生变化,出现多核的大细胞和核固缩的小细胞。 展开更多
关键词 granzymeB 融合蛋白 HELA细胞 基因表达
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重组BPI_(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达 被引量:6
16
作者 徐俊杰 徐静 +1 位作者 童贻刚 王海涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期587-589,共3页
The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and... The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and selection by methotrexate,the cell lines expressing the fusion protein were obtained.The recombinant protein was purified using cation\|exchange chromatography and its bioactivity was proved with bactericidal assays. 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 BPI23-Fcγ1融合蛋白 表达 CHO细胞 重组
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胶质瘤细胞c-fos基因表达水平对其增殖和凋亡的影响 被引量:5
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作者 赵文娟 于士柱 +2 位作者 浦佩玉 安同岭 管欣琴 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2007年第2期141-145,共5页
目的原癌基因c-fos属快反应即刻早期应答基因,其编码蛋白是真核细胞内重要的转录因子,可诱导下游报道基因mRNA的转录和蛋白表达,参与细胞增殖和凋亡的调控,当其表达异常增加时可干扰细胞增殖和凋亡的动态平衡,诱导细胞转化和肿瘤形成。... 目的原癌基因c-fos属快反应即刻早期应答基因,其编码蛋白是真核细胞内重要的转录因子,可诱导下游报道基因mRNA的转录和蛋白表达,参与细胞增殖和凋亡的调控,当其表达异常增加时可干扰细胞增殖和凋亡的动态平衡,诱导细胞转化和肿瘤形成。通过检测胶质瘤c-fos基因的表达水平观察c-fos基因与肿瘤恶性程度的关系以及对胶质瘤细胞增殖活性和凋亡程度的影响。方法用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组织化学染色方法观察73例不同级别人胶质瘤组织标本。结果73例胶质瘤均不同程度地表达c-fos mRNA和c-Fos蛋白(100%),这两种阳性肿瘤细胞密度均随肿瘤恶性程度的升高而相应增加,Ⅰ~Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。73例胶质瘤标本的增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞和凋亡肿瘤细胞的检出率均为100%,增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应增加,Ⅰ~Ⅱ级组低于Ⅲ级组,Ⅲ级组低于Ⅳ级组,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);凋亡肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应减低,Ⅰ~Ⅱ级组高于Ⅲ级组,Ⅲ级组高于Ⅳ级组,3组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。直线相关分析证实,c-fos mRNA阳性肿瘤细胞密度、c-Fos蛋白阳性肿瘤细胞密度及增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关(r=0.648~0.917,P<0.001),这3种阳性肿瘤细胞的密度均与凋亡肿瘤细胞密度呈显著性负相关(r=%0.727~%0.775,P<0.001)。结论c-fos基因表达水平对评价胶质瘤生物学行为有重要参考价值。胶质瘤细胞c-fos基因表达异常增加可能是促进肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素,并在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 原癌基因蛋白质C-FOS类 基因表达 细胞分裂 凋亡
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鸟氨酸脱羧酶抗酶融合蛋白高表达对小鼠黑素瘤细胞B16-F1细胞周期的影响 被引量:4
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作者 刘梦瑶 韩钰 +2 位作者 蔡富强 何玲 王艳林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期662-665,682,共5页
目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)与绿色荧光蛋白融合蛋白GFP-OAZ1和GFP-OAZ2高表达对小鼠黑色素瘤B16-F1细胞周期的影响。方法构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达质粒并经脂质体法瞬时转染B16-F1细胞,然后用Western blot分析法和... 目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)与绿色荧光蛋白融合蛋白GFP-OAZ1和GFP-OAZ2高表达对小鼠黑色素瘤B16-F1细胞周期的影响。方法构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达质粒并经脂质体法瞬时转染B16-F1细胞,然后用Western blot分析法和荧光显微镜下观察融合蛋白在B16-F1细胞中的表达。流式细胞分析用于检测GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞周期的影响。Western blot分析法鉴定GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞中鸟氨酸脱羧酶(ODC)酶蛋白水平的影响。结果成功构建的GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因B16-F1细胞中正确高效表达。经流式细胞检测发现,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达导致细胞G0/G1期阻滞。当用OAZ1和OAZ2分别与ODC共转染B16-F1细胞时,OAZ1融合蛋白高表达显著性减低细胞内ODC蛋白水平,但OAZ2融合蛋白高表达无此种影响。结论成功构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达载体,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达均能将B16-F1细胞阻滞于G0/G1期,但仅OAZ1融合蛋白能显著性促进ODC降解,OAZ2融合蛋白无此种功能。 展开更多
关键词 OAZ1 OAZ2 融合蛋白 真核表达 细胞周期
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PD-L1-Ig融合蛋白的酵母表达及其对T细胞的抑制作用 被引量:3
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作者 张意 吴聪 +2 位作者 蒋应明 龙瑶 陈国友 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期464-468,共5页
目的:利用毕赤酵母表达系统表达PD-L1-Ig融合蛋白,检测该融合蛋白的生物学活性。方法:化学合成hPD-L1-IgG4融合基因,构建携带该基因的酵母表达载体,转化GS115酵母菌株后分泌表达融合蛋白,亲和层析和离子交换层析法纯化,SDS-PAGE和Wester... 目的:利用毕赤酵母表达系统表达PD-L1-Ig融合蛋白,检测该融合蛋白的生物学活性。方法:化学合成hPD-L1-IgG4融合基因,构建携带该基因的酵母表达载体,转化GS115酵母菌株后分泌表达融合蛋白,亲和层析和离子交换层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。ELISA法检测融合蛋白与受体PD-1的结合能力,混合淋巴细胞反应检测融合蛋白对T细胞功能的抑制能力,51Cr稀释法检测其对CTL杀伤人结肠癌SW480细胞效应的抑制作用。结果:成功构建酵母表达载体pPIC9K-PD-L1-IgG4,转化菌株分泌表达PD-L1-IgG4融合蛋白,相对分子质量为55000,含量为120μg/ml。发酵菌株,纯化制备融合蛋白。融合蛋白与受体PD-1具有良好的结合能力,能够显著抑制T细胞增殖、活化(P<0.01),并抑制CTL对结肠癌细胞的杀伤(P<0.01)。结论:成功制备了酵母表达PD-L1-IgG4融合蛋白,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为深入研究其在肿瘤免疫应答中的调控效应奠定了良好基础。 展开更多
关键词 PD-L1 融合蛋白 酵母表达系统 PD-1 T细胞 结肠癌细胞
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高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1 被引量:4
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作者 张志珍 毛积芳 +1 位作者 杨生生 窦鸿 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期254-256,共3页
目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 E.coli BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角... 目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 E.coli BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。 结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P- 展开更多
关键词 高密度培养 人胰高血糖素样肽-1 基因表达 融合蛋白质类 大肠杆菌 强降血糖肽
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