基于网络药理学分析海藻-昆布治疗乳腺癌的作用机制

目的通过网络药理学方法分析海藻-昆布治疗乳腺癌的作用机制。方法通过TCMSP数据库检索海藻-昆布的活性成分及其靶点。通过GeneCards和OMIM数据库获取乳腺癌的相关靶标,并通过Cytoscape软件构建“药物-疾病靶点”网络图。利用String平台进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析。采用R语言进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用分子对接技术验证关键化合物与靶点的结合能力,并通过体外实验进行功能验证。结果本研究共获得海藻-昆布的有效化合物11个。海藻-昆布与乳腺癌高度相关的交集靶标为150个,筛选出丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、p53肿瘤蛋白(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、JUN、胱天蛋白酶3(CASP3)、白细胞介素1B(IL1B)、MYC和人表皮生长因子受体(EGFR)共10个核心基因。GO分析表明,这些化合物可能参与信号转导、细胞凋亡、细胞增殖、炎症反应等生物过程。KEGG通路分析表明,主要富集信号通路为PI3K/Akt、MAPK和TNF等信号通路。分子对接和体外实验结果表明,海藻-昆布的主要化学成分岩藻甾醇对乳腺癌三阴型细胞BT-549具有抗增殖作用。结论海藻-昆布可能通过多靶点、多通路来治疗乳腺癌,其主要化学成分岩藻甾醇可有效抑制BT-549细胞增殖活性。

岩藻甾醇的合成工艺研究

岩藻甾醇(1)作为一种具有多种医药活性的植物甾醇,应用前景广阔,但岩藻甾醇天然来源少且提取率较低。本文设计并验证了一条以猪去氧胆酸(2)为起始原料,经甲酯化、磺酰化、选择性消除、DHP保护、水解、缩合、格氏、wittig和脱保护9步反应合成岩藻甾醇的合成路线,总收率为53.31%。该方法原料廉价易得,操作简洁高效,对环境友好,为未来岩藻甾醇的工业化生产提供一种新的思路。目标化合物的结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR和HR-MS确证。

羊栖菜中岩藻甾醇、马尾藻甾醇以及水溶性多糖的综合提取工艺

以羊栖菜为原料从中依次提取岩藻甾醇,马尾藻甾醇及羊栖菜水溶性多糖,实现羊栖菜中甾醇和多糖的综合利用。采用硅胶柱层析、萃取以及重结晶等技术对上述成分进行分离纯化,借助元素分析、质谱、核磁共振以及红外光谱进行分析鉴定。并对及羊栖菜水溶性多糖的几种脱蛋白、脱色方法进行比较。通过正交试验对提取工艺进行优化。结果显示:在影响岩藻甾醇提取率的4个因素(时间、温度、料液比和乙醇浓度)中,料液比对提取率的影响最为显著,其次为乙醇浓度。提取岩藻甾醇最佳工艺为:时间4 h,温度60℃,90%乙醇浓度,料液比1∶20。羊栖菜多糖去蛋白方法以酶解与Sevag法结合效果较好;羊栖菜多糖脱色方法各方面综合考虑,大孔树脂较好。

南中国海海藻叶托马尾藻的化学成分研究

采自南中国海的海藻叶托马尾藻用乙醇提取、乙酸乙酯－水分配后，乙酸乙酯相中的提取物经硅胶减压柱色谱分离得到甾醇和脂肪酸两大组分。用ＧＣ／ＭＳ联用技术对它们进行了分离和鉴定。通过硅胶快速柱色谱，从混合甾醇中分离出一个主成分，经波谱分析鉴定为岩藻甾醇。

薇苷菊提取物对桔全爪螨的产卵驱避作用及有效组分分析

使用甲醇、乙酸乙酯、乙醚提取薇苷菊 Mikania micrantha H.B.K.地上部植株并测试 3种提取物对桔全爪螨 Panonychuscitri Mc Gregor产卵的驱避作用 ,结果发现这些提取物处理后 1d都有显著的产卵驱避效果 ,其中极性最强的甲醇提取物效果最好 ,处理后 1d的产卵驱避率为 74 .2 2 %。用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水依次对薇苷菊甲醇提取物进行萃取 ,生测结果表明只有极性最强的水萃取物具有显著的产卵驱避效果。进一步研究发现薇苷菊甲醇提取物经柱层析分离得到的 6个组分中有 3个对桔全爪螨有显著的产卵驱避作用 ,但效果都不及提取物 ,说明薇苷菊对桔全爪螨的产卵驱避作用是各组分共同作用的结果。用GC- MS对最有效组分的分析表明 :2 ,2′-亚甲基双 (6 -叔丁基 - 4 -甲基 )苯酚是含量最大的成分 ,占 70 .2 4 % ,β-谷甾醇和岩藻甾醇也是有效成分 ,但含量较低 ,分别占 12 .0 3%和 5 .6 1%

岩藻甾醇诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

研究岩藻甾醇对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长及细胞凋亡的影响.采用MTT比色法测岩藻甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用;用Hoechst33258染液染色,在荧光显微镜下观察细胞形态学改变;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡率;比色法检测caspase-9,caspase-3活性.岩藻甾醇能抑制HL-60细胞的生长.MTT法测得岩藻甾醇的IC50为14.2μg/mL.在荧光显微镜下观察药物作用24 h的细胞生长密度逐渐变疏,细胞变小,表面起皱,高质量浓度组大部分细胞破碎.流式细胞仪检测表明,用质量浓度为28.4、14.2、7.1μg/mL的岩藻甾醇作用24 h均出现亚二倍体凋亡峰,凋亡率分别为17.15%、16.42%、15.65%.比色法结果表明岩藻甾醇对HL-60细胞作用24 h后caspase-9、caspase-3的相对活性升高,质量浓度为7.1、14.2、28.4μg/mL的岩藻甾醇对HL-60细胞作用24 h后,caspase-9相对活性分别为135.10%、228.39%、467.74%,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01).caspase-3相对活性分别为131.06%、224.23%、534.64%,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01).岩藻甾醇可以抑制HL-60细胞的生长,诱导HL-60细胞凋亡.

羊栖菜的化学成分研究

从采自中国浙江省南部的羊栖菜[Sargassum fusiforme(Harv.)Setch]中分离到4个化合物,经化学和IR,NMR,MS等光谱分析鉴定了其中3个化合物的结构,分别为甘露醇、岩藻甾醇和saringosterol。

超高效液相色谱法测定羊栖菜中岩藻甾醇的含量

采用超高效液相色谱法测定羊栖菜中岩藻甾醇的含量。羊栖菜试样(2.000 0g)经甲醇-二氯甲烷(1+1)混合液提取,所得提取液以YMC-Pack ODS-A色谱柱为分离柱,以甲醇-乙腈(3+7)混合液为流动相,在检测波长210nm处进行测定。岩藻甾醇的质量浓度在0.5~400mg·L^(-1)内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.16mg·L^(-1)。在25,50,100mg·L^(-1)等3个浓度水平进行加标回收试验,回收率在91.2%~96.8%之间。测定值的日内及日间相对标准偏差(n=6)分别在1.1%~5.4%,2.8%~7.0%之间。

岩藻甾醇对卵巢癌细胞抑制作用的体外研究

目的:探讨岩藻甾醇对卵巢癌细胞分化、增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法:以HO8910、HRA及SKOV 3细胞株作为研究对象,选取对数生长期细胞,分为空白细胞对照、0.1 mmol/L岩藻甾醇组、0.2 mmol/L岩藻甾醇组及0.4 mmol/L岩藻甾醇组。观察各组细胞形态的变化;MTT检测转染岩藻甾醇对肿瘤细胞分裂增殖能力的影响;流式细胞仪检测并评价岩藻甾醇对肿瘤细胞分裂周期的影响;Western blot检测Prx III表达的变化。结果:岩藻甾醇可以诱导细胞以类圆形-星状-梭形的形态转变;与对照组相比,岩藻甾醇组细胞增殖率降低,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少;与对照组相比,0.1 mmol/L、0.2 mmol/L及0.4 mmol/L岩藻甾醇组细胞中Prx III表达升高(F=18.053,P=0.000)。结论:岩藻甾醇可诱导卵巢癌细胞分化,抑制细胞增殖,其作用机制可能与调控Prx III的表达有关。

海洋褐藻羊栖菜(Sargassum fusiforme)中马尾藻甾醇、岩藻甾醇的分类纯化及抗菌、抗氧化活性研究

本文评价海洋褐藻羊栖菜(Sargassum fusiforme)中分离纯化的总甾醇、马尾藻甾醇(Saringosterol)和岩藻甾醇(Fucosterol)抗菌和抗氧化活性。马尾藻甾醇和岩藻甾醇化合物采用红外光谱、核磁共振光谱和高分辨质谱确定其结构。实验结果显示,总甾醇含量在30、60和80mg/m L对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和变形链球菌(S.mutans)具有抑制作用。马尾藻甾醇和岩藻甾醇对金黄色葡萄球菌和变形链球菌具有高活性,最小抑制浓度范围为4—32mg/m L。总甾醇还显示出对大肠杆菌(Escherichia coli)菌株1924和1356的抗菌作用。而马尾藻甾醇和岩藻甾醇在4—32mg/m L浓度范围内体外对大肠杆菌的抗菌作用不明显。马尾藻甾醇和岩藻甾醇对耐药性革兰氏阳性临床分离菌株具有显著的抑菌活性。另外,药理实验结果显示,总甾醇、马尾藻甾醇和岩藻甾醇的抗氧化活性与它们清除DPPH、ABTS、超氧化物和羟基自由基的能力有关。

海藻活性成分岩藻甾醇联合运动改善肥胖大鼠脂质代谢

甾醇是功能性食品的重要组成部分。岩藻甾醇(FUC)是海藻中的主要甾醇,具有多种食用和药用价值。为了揭示海藻活性成分岩藻甾醇联合运动对肥胖大鼠的脂质代谢、抗氧化系统和慢性炎症的影响。本实验将大鼠组,对照组使用正常饲料喂养,并进行运动处理,跑台运动和给药时间均为6周。实验后,检测了各组大鼠的体重、血清脂质代谢指标(TC,TG,LDL-c,HDL-c,FFA)、肝脏氧化应激指标(SOD,CAT和MDA)和炎症指标(TNF-α,IL-1β和IL-6)水平。通过RT-qPCR检测肝脏C/EBPα、Adiponectin、SREBP1c、aP2、FAS和Resistin mRNA水平。通过Western blot检测肝脏中细胞核Nrf2蛋白表达和NF-κB p65的磷酸化水平。结果显示,与HFD+E组和HFD+FUC组比较,HFD+E+FUC组大鼠的体重降低(P<0.05);血清TC、TG、LDL-c和FFA水平降低,HDL-c水平升高(P<0.05);肝脏SOD和CAT水平升高,MDA水平降低(P<0.05);肝脏TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低(P<0.05);肝脏C/EBPα、Adiponectin、SREBP1c、aP2、FAS和Resistin mRNA水平降低(P<0.05);肝脏中细胞核Nrf2蛋白表达水平升高,NF-κB p65的磷酸化水平降低(P<0.05)。本实验表明,岩藻甾醇联合运动可最大程度的纠正肥胖大鼠脂质代谢紊乱和抗氧化系统失衡,并抑制慢性炎症,其机制与调节脂质代谢基因转录、Nrf2和NF-κB的活化有关。本实验认为岩藻甾醇可能是来源于海藻的一种优良的运动补充剂。

岩藻甾醇标准样品的研制

目的:根据GB/T 15000.3—2008《标准样品工作导则(3)标准样品:定值的一般原则和统计方法》,经国家标准化管理委员会批准立项,研制岩藻甾醇标准样品。方法:选择海带为原料,通过95%乙醇提取、减压浓缩、反复柱色谱分离、石油醚-乙酸乙酯重结晶、残余溶剂去除等制备和纯化过程,获得高纯度岩藻甾醇单体,采用元素分析、红外光谱、质谱、核磁共振和X射线衍射等技术对其进行结构鉴定。运用高效液相色谱-蒸发光散射检测法进行均匀性检验、稳定性检验和8家实验室联合定值检验。结果:该样品在95%置信区间的样品均匀性良好,在2~4℃条件下24个月内稳定性良好,定值测定结果确定其纯度99.54%,扩展不确定度0.16%,达到了国家标准样品的技术要求,通过了国家标准化管理委员会组织的验收。结论:成功研制了岩藻甾醇国家标准样品,该样品可用于岩藻甾醇含量测定、检测方法评定、相关产品的检测与质量控制。