复方贞术调脂方对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的观察复方贞术调脂方(FTZ)对胰岛素抵抗(IR)HepG2细胞的作用,为开拓FTZ的治疗范围,阐明FTZ调节糖脂代谢的机制提供实验依据。方法用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,用高、中、低3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA的表达,Western blot检测HepG2细胞胰岛素信号转导蛋白IRS1表达。结果模型细胞培养基上清液中葡萄糖含量高于正常细胞(P<0.05)。给予FTZ(1、25、100μg/mL)后,HepG2细胞培养基上清液中葡萄糖含量均低于模型细胞葡萄糖含量(P<0.05)。胰岛素抵抗细胞与正常细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著降低(P<0.05)。给予FTZ干预后,与胰岛素抵抗细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FTZ可改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的摄取。其改善胰岛素抵抗的作用机制之一可能是通过上调胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA和IRS1蛋白质在胰岛素抵抗HepG2细胞的表达。

复方贞术调脂方对游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞的作用

目的探讨复方贞术调脂方(FTZ)对游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛素抵抗Hep G2细胞NF-κBIRS1-GLUT4通路的影响,阐明FTZ缓解胰岛素抵抗的作用机制。方法采用FFA诱导Hep G2细胞使其产生胰岛素抵抗,3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测Hep G2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,酶联免疫法检测Hep G2细胞培养液上清液中TNF-α、IL-6的含量,Western blot检测Hep G2细胞中NF-κB、IRS1、GLUT4蛋白表达,采用PDTC阻断NF-κB蛋白,测定其下游靶点IRS1的蛋白表达。结果FTZ可降低细胞上清液中葡萄糖、TNF-α、IL-6的含量,下调NF-κB的蛋白表达,上调IRS1和GLUT4的蛋白表达。阻断NF-κB之后,再加入FTZ,IRS1的蛋白表达量较未阻断时显著降低。结论 FTZ可改善FFA诱导的胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过抑制NF-κB介导的IRS1-GLUT4通路来改善胰岛素抵抗。NF-κB是FTZ作用的关键靶点。

复方贞术调脂方调节肠道糖吸收功能伴糖代谢改善的机制

目的研究复方贞术调脂方(FTZ)对脂肪萎缩模型小鼠(aP2-SREBP1c转基因小鼠)肠道功能的影响,探讨FTZ改善糖脂代谢病的作用机制。方法aP2-SREBP1c小鼠随机分为模型组(T),二甲双脈组(Met,250mg·kg^-1),FTZ高(FH)、中(FM)、低(FL)剂量组(2.4、1.2、0.6g·-kg^-1),并以同窝野生型小鼠为对照组(W),每组6只;连续灌胃给药16周,每天1次,对照组及模型组给予等量蒸馏水每日记录小鼠体质量变化;给药12周末,小鼠眼眶取血测定葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇水平;给药16周末,取小鼠肠管量取长度、称定肝脏质量并计算肝体比系数;苏木素-伊红染色(HE)观察十二指肠、空肠、回肠形态变化;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测空肠钠-葡萄糖共转运体l(Slc5a1)、葡萄糖转运蛋白l(Slc2a1)、葡萄糖转运蛋白2(Slc2a2)、葡萄糖转运蛋白5(Slc2a5)、血清和糖皮质激素调节激酶1(Sgk1)等糖转运相关基因mRNA水平,以及白细胞介素15(IL15)、BCL2样蛋白(BCL2L1)、髓细胞白血病1基因(MCL-1)、B淋巴细胞瘤/白血病因子3(BCL3)等抗凋亡相关基因mRNA水平;免疫荧光法检测空肠组织中葡萄糖转运蛋白2(Glucose transporter2,GLUT2)蛋白表达:结果与模型组比较,FTZ中剂量组的体质量明显下降(P<0.05).FTZ中、高剂量组的血糖、总胆固醇明显下降(P<0.05),甘油三酯明显升高(P<0.05),对肝体比系数的影响不明显(P>0.05);FTZ高剂量组的肠管长度明显缩短(P<0.05),FTZ中剂量组的近端空肠绒毛长度明显缩短(P<0.05);FTZ中剂量组小鼠空肠组织的Slc2a2 mRNA水平显著升高、GLUT2蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FTZ可恢复aP2-SREBP1c脂肪萎缩模型小鼠肠管长度,缩短空肠组织肠绒毛长度,增加空肠组织Slc2a2(GLUT2)转录水平并增加空肠肠绒毛上皮细胞GLUT2表达,从而恢复小鼠肠道糖吸收功能,这可能是FTZ调节糖代谢平衡的机制之一。

复方贞术调脂方调节肝脏脂肪酸组成防治非酒精性脂肪肝

目的:基于肝脏脂肪酸代谢探讨复方贞术调脂方(Fufang Zhenzhu Tiaozhi Formula,FTZ)对高脂饮食所致的脂代谢紊乱的作用及其可能机制。方法:C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、二甲双胍阳性对照组、FTZ低、高剂量组;除对照组外,高脂饮食造模同时给药16周;检测小鼠空腹血糖(Fasted PlasmaGlucose,FPG)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low DensityLipoprotein-Cholesterol,LDL-C)、游离脂肪酸(Nonesterified Fatty Acid,NEFA)等血液指标,给药16周后进行口服糖耐量实验(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT),并计算曲线下面积(Area Under The Curve,AUC);ELISA法检测血浆中空腹胰岛素(Fasted Insulin,FINS)浓度;HE染色、油红O染色观察肝脏病理情况;采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测肝脏脂肪酸含量。结果:给药16周后,FTZ可以有效降低糖脂代谢紊乱小鼠血浆中FPG、TG、TC、LDL-C、NEFA和FINS浓度,并且可降低HOMA-IR值(Homeostasis Model Assessment-Insulin Resistent,HOMA-IR);OGTT结果显示FTZ可有效减少AUC值(P<0.05)。油红O染色结果显示FTZ可有效减少肝脏脂滴大小与数量。GC-MS结果显示FTZ可降低脂代谢紊乱小鼠肝脏总脂肪酸(Total Fatty Acids,TFA),其中主要的饱和脂肪酸(Saturated Fatty Acid,SFA)的含量下降,而大部分多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acid,PUFA)的PUFA/TFA值有不同程度的升高。结论:FTZ可改善高脂饮食导致的糖脂代谢紊乱小鼠肝脏脂代谢,其机制与降低其肝脏中的SFA和升高肝脏中的PUFA相关。