不同剂量环磷酰胺对福建黄兔外周血生化指标的影响

探讨不同剂量环磷酰胺对福建黄兔外周血生化指标的影响,为建立福建黄兔免疫抑制动物模型提供实验参考。选用福建黄兔18只(4月龄),随机分为对照组和模型组,模型组连续7天分别腹腔注射浓度为20、40、60、80、100 mg/kg的环磷酰胺,第8天采集外周血。不同剂量的环磷酰胺对外周血的电解质(钾、钠、氯、钙、镁、磷、碳酸氢根、阴离子间隙、渗透压)、肌酶(乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶)、血糖(葡萄糖)、血脂(总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A1、载脂蛋白B)、肝功能(总胆红素、直接总胆红素、间接总胆红素、总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶、谷草转氨酶/谷丙转氨酶、碱性磷酸酶)、肾功能(尿素氮、肌酐、尿酸)等指标与对照组比较有显著的变化,并呈现剂量依赖关系;而不同剂量的环磷酰胺对黄兔外周血的载脂蛋白B/载脂蛋白A1比例(B/A1)、白蛋白/球蛋白比例(A/G)水平没有明显差异。随着环磷酰胺剂量的升高,福建黄兔的肝、肾功能受到严重的影响,表明福建黄兔的生理机能和免疫功能呈逐步下降趋势。

福建地方家兔肉质特性的比较研究

对福建黄兔、黑毛福建兔的肉质常规营养成分、氨基酸和铁进行测定,并与新西兰白兔进行比较分析,结果表明:黑毛福建兔肌肉总氨基酸含量、鲜味氨基酸、必需氨基酸和铁含量比福建黄兔分别高1.61%、1.04%、0.65%和2.41%,粗脂肪低1.68%,差异均显著(P<0.05),与新西兰白兔相比,分别高1.58%、0.96%、0.47%和3.15%,粗脂肪低1.92%,差异均显著(P<0.05),显示黑毛福建兔的肉质营养和风味好于福建黄兔和新西兰白兔。福建黄兔的甘氨酸和谷氨酸含量显著高出新西兰白兔0.19%和0.16%(P<0.05),说明其风味比新西兰白兔好。

福建黄兔微卫星标记的遗传多样性分析

为了从DNA分子水平揭示福建黄兔群体遗传多态性和遗传结构，选择16个微卫星标记检测了40只福建黄兔的遗传变异及多态性。结果表明，在福建黄兔群体中，16个微卫星位点共检测到了100个等位基因，各位点的等位基因数在3～13，平均等位基因数为6．25个，平均有效等位基因数为4．2652。各位点平均基因频率取样方差V（pij）为8．7611×10^-3。16个微卫星位点观察杂合度（Ho）在0．4893～0．8801，平均H。为0．7227；各位点期望杂合度（He）在0．4959～0．8914，平均He为0．7324；各位点多态信息含量（PIC）变动范围为0．3814～0．8679，平均PIC为0．6766，其中有14个位点处于高度多态（PIC〉0．5），16个微卫星位点的平均固定指数（F）为0．0132。经卡方检验，在这16个微卫星位点上，群体偏离Hardy-Weinberg平衡的程度不大。

福建黄兔专门化父系选育

利用福建黄兔保种群,采用家系内个体综合指数法,纯种选育福建黄兔父系。结果表明:第3世代公、母兔4、10、13周龄的体重比第1世代同期体重提高7.4%～13.2%,差异均极显著(P<0.01);公、母兔4至13周平均日增重分别为17.55 g、18.25 g,比第1世代分别提高9.6%、12.4%;第3世代公、母兔13周龄的体长、胸围、耳长、耳宽比第1世代提高3.1%～13.7%,差异均极显著(P<0.01);第3世代公、母兔13周龄体重变异系数与第1世代相比均有下降,13周龄的体长、胸围、耳长、耳宽的变异系数在3个世代内均小于1 2%,体型外貌均匀整齐;3个世代的产仔数和各世代内公、母兔13周龄性别间体重差异均不显著(P>0.05)。

福建黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA的克隆与序列分析

从性成熟的福建黄兔母兔脑垂体中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的片段,获得长为1 275bp的黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA片段。将扩增的片段与pMD18-T载体连接,转化至DH5α感受态细胞中。随机挑选阳性重组子进行鉴定、测序,将测序结果与包括人、大猩猩、奶牛、绵羊、小鼠在内的多种哺乳动物基因序列进行同源性比对分析,相似度在85%以上,同时遗传进化分析结果表明兔形目的INHBA基因与灵长目动物的亲缘性相近。黄兔INHBA基因cDNA序列编码424个氨基酸,整个蛋白包括1段20个氨基酸的信号肽和404个氨基酸的成熟肽,该蛋白还同时存在2个结构域,分别为TGFβ和TGFβ前体肽结构域。

福建黄兔促卵泡素β亚基(FSHβ) cDNA序列的克隆与序列分析

从性成熟的福建黄兔母兔脑垂体中提取总RNA，经RT—PCR扩增目的片段，获得长为390bp的黄兔促卵泡素B亚基cDNA片段。将扩增的片段与pMD18-T载体连接，转化至DH5cc感受态细胞中。随机挑选阳性重组子进行鉴定、测序，将测序结果与包括人、奶牛、绵羊、水牛、小鼠在内的多种哺乳动物基因序列进行同源性分析，同源性相似度72．2％～96．5％，同时遗传进化分析结果表明，兔形目的FSHp基因与灵长目动物的亲缘性更高。对福建黄兔与日本白兔已提交的FSHp亚基的cDNA序列进行比较，发现在81bp及219bp处存在c—T和G—A两处突变，但未引起氨基酸变化。

福建黄兔的遗传多态性及分类

用8个微卫星标记对福建黄兔的等位基因频率、多态信息含量、杂合度和有效等位基因数等指标进行统计分析,并在此基础上对其进行聚类分析和分类研究。结果表明:(1)8个微卫星标记在所检测的福建黄兔群体中都表现出较丰富的多态性,在6个群体微卫星标记的平均多态信息含量(PIC)为0.6622(0.5723～0.7222),各群体的PIC差异不显著;全部群体平均杂合度为0.6857(0.5904～0.7267)。这显示黄兔群体的多态信息含量、杂合度等指标有较好的一致性,说明福建黄兔品种内在微卫星位点上均具有丰富的遗传多样性。(2)根据奈氏标准遗传距离,并进行UPGMA聚类分析,结果显示6个群体间的遗传变异不大。福建黄兔地方品种在微卫星位点上具有丰富的遗传多样性;从遗传距离及聚类分析结果表明这些群体黄兔属于同一个地方品种。

可溶性纤维对福建黄兔盲肠体外发酵的影响

在精料中分别按25%的比例将高可溶性纤维(苜蓿干草、甜菜渣、三叶青)、低可溶性纤维(燕麦草)和高不溶性纤维(大麦糠、爱博素)配制成日粮饲喂福建黄兔,进行48 h的盲肠体外试验,测定体外产气量、发酵参数和体外真消化率,研究可溶性纤维对福建黄兔盲肠体外发酵的影响.结果表明:高可溶性纤维组福建黄兔的体外产气量极显著高于高不溶性纤维组(P<0.01),且以甜菜渣组的产气量最高;高可溶性纤维组的体外真消化率最高,三叶青组与燕麦草组的差异不显著(P>0.05);苜蓿干草和甜菜渣组的发酵液p H、氨态氮含量均显著低于高不溶性纤维组(P<0.05),甜菜渣组的p H显著低于其他各组(P<0.05);高可溶性纤维组的乙酸、丙酸和总挥发性脂肪酸浓度均极显著高于高不溶性纤维组(P<0.01),三叶青组的总挥发性脂肪酸浓度与燕麦草组的差异不显著(P>0.05);苜蓿干草和甜菜渣组中乙酸与丙酸的比值均显著低于高不溶性纤维组(P<0.05),而三叶青组中乙酸与丙酸的比值与大麦糠组的差异不显著(P>0.05).结果提示,配制福建黄兔日粮时以甜菜渣做为可溶性纤维来源,其盲肠体外真消化率、体外产气量和总挥发性脂肪酸浓度最高;高不溶性纤维日粮会使福建黄兔的盲肠体外真消化率、体外产气量和总挥发性脂肪酸浓度均降低.

福建黄兔微卫星标记与生长性状的相关分析

根据兔的遗传图谱及相关报道选择了8个微卫星基因座对195只福建黄兔群体进行群体遗传学检测;计算其有效等位基因数杂合度、多态信息含量,并通过最小二乘分析微卫星遗传标记与体重、体尺性状的相关性。结果表明选用的8个微卫星座位的杂合度在0.5904～0.7267之间,平均为0.6857。多态信息含量在0.5723～0.7222之间,平均为0.6622。许多微卫星基因型与体尺体重有较强相关。微卫星座位Sol33 209bp等位基因对1月龄体重有较强的相关效应;座位Sat12 125bp和座位Sol3 3201bp等2个等位基因对3月龄体重有较强的相关效应;座位Sol33 213bp等位基因对8月龄体重有负面影响;座位Sol44 217bp、座位Sol33 209bp、以及座位Sol03 236bp等4个等位基因对体长性状有相关效应;座位Sol44 227bp、座位Sol33 209bp、座位Sol30 170bp以及座位Sol03 244bp等4个位基因对胸围性状有相关效应;座位Sol44 203bp等位基因对胸围性状有负面影响。5个微卫星基因座的基因型Sol33(209/213)、Sat12(125)、Sol30 170、Sol03(236/244)、Sol44(203/227)对福建黄兔体尺体重存在相关性。这为进一步QTL定位提供理论依据。

福建黄兔与新西兰白兔血液生理生化指标的比较研究

目的比较福建黄兔与新西兰白兔血液生理生化指标的差异,为福建黄兔的实验动物化研究提供参考。方法20只福建黄兔和18只新西兰白兔,体重约2.0 kg,雌雄各半,普通环境饲养,实验前禁食12 h,清醒状态下采血,分别测定24项血液生化指标和20项血液生理指标。结果福建黄兔与新西兰白兔的淋巴细胞数量、嗜中性白细胞百分比、淋巴细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、平均血小板体积、球蛋白、总胆红素、间接胆红素、碱性磷酸酶、高密度脂蛋白、白球比例、甘油三酯、肌酸激酶同工酶差异非常显著(P<0.01);嗜中性白细胞数量、嗜碱粒细胞数量、血红蛋白浓度、平均血红蛋白浓度、谷氨酰转肽酶、尿素氮、尿素氮肌酐比、谷草转氨酶、葡萄糖、尿酸差异显著(P<0.05);其余指标两者差异不显著(P>0.05)。结论福建黄兔与新西兰白兔的生物学特性存在一定的异同。

菌草菌糠替代部分苜蓿草粉饲喂福建黄兔试验

为了研究菌草菌糠替代部分苜蓿草粉对福建黄兔生长性能和肠道酶活性的影响,试验采用体质健康的(35±2)日龄福建黄兔100只,随机分为5组,对照组饲喂含40%苜蓿草粉的基础日粮,试验1,2,3,4组分别以菌草菌糠替代苜蓿草粉25%、50%、75%、100%。结果表明:各组福建黄兔日增重无显著差异(P>0.05);试验2组福建黄兔料重比最低,且日采食量显著低于对照组(P<0.05);试验2组福建黄兔肠道淀粉酶和脂肪酶活性有提高,其中空肠脂肪酶活性极显著高于对照组(P<0.01)。说明菌草菌糠可以替代福建黄兔日粮中的苜蓿草粉,最佳替代比例为50%。

福建黄兔繁殖性状相关研究

本文对３１０只母兔的繁殖性状进行了测定分析，结果表明；妊娠期与产仔数、产活仔数及活仔窝重呈负相关，相关系数分别为－０．４２６＊、－０．３５０＊和－０．５１５头４胎内母兔，胎次对产仔性能无影响，对母兔泌乳性能有一定影响。同样条件下胎次增加。泌乳性能提高，第３胎较第２胎有显著提高。

福建黄兔泌乳性能初探

用本所兔场自繁的１１只福建黄兔健康经产母兔，进行泌乳性能测定。结果表明，本品种的泌乳高峰期出现于产后第９天，第１５天达到高峰，最高日泌乳量１１０．９克，３０天泌乳量２５１１．８克，日平均泌乳量８３．７３克，泌乳力９２５．６克。仔兔适宜补料诱食期应在产后第１５天。

福建兔血清抗氧化能力及羟脯氨酸含量的测定

目的测定福建兔3个主要品系(黄毛系、黑毛系、白毛系)的血清抗氧化能力及羟脯氨酸含量。方法选用健康发育良好,日龄105～135 d、体重1.8～2.5 kg的3个品系福建兔各20只,雌、雄各半,耳静脉采血,分离血清。检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧能力(T-AOC)和游离羟脯氨酸。结果黑毛品系和黄毛品系的MDA含量与白毛品系相比差异显著(P<0.01);白毛品系和黄毛品系血清SOD活力与黑毛品系相比差异显著(P<0.01);白毛品系和黄毛品系血清T-AOC测定值较黑毛品系显著偏低(P<0.01)。血清游离羟脯氨酸含量3个品系无显著差异,范围在1.87～2.16μmol/L。结论本实验结果可作为福建兔的正常参考值及生物学特性指标的基础数据。

福建黄兔肌纤维性状及Myh6基因表达水平分析

选取我国地方品种福建黄兔为研究对象,利用冰冻切片技术对不同发育阶段福建黄兔背肌和腿肌的肌纤维性状进行研究,通过荧光定量聚合酶链式反应技术分析在肌肉发育过程中起重要作用的Myh6基因在福建黄兔不同发育阶段表达水平的差异,并与肌纤维性状进行相关性分析。结果显示:2、4、6、8、10和12周龄福建黄兔的白肌纤维密度均显著大于红肌纤维和中间型肌纤维,白肌纤维的面积显著高于红肌纤维,长径和短径的大小排列为白肌纤维>中间型肌纤维>红肌纤维,但差异无统计学意义;在6周龄前,背肌和腿肌中各类肌纤维长径、短径和面积呈显著增大的趋势,而6周龄后增大趋势逐渐变缓;Myh6基因在公母兔背部和腿部的表达均呈先上升后下降的趋势,其中母兔在4周龄表达量最高,公兔在6周龄表达量最高;Myh6基因的表达量与肌纤维面积、长径和短径的变化一致。表明Myh6基因与肌纤维类型和肌纤维的生长发育密切相关。

蛋氨酸羟基类似物异丙酯(HMBi)对福建黄兔屠宰性能、肠道黏膜形态和肠道酶活的影响

本试验旨在研究蛋氨酸羟基类似物异丙酯(HMBi)对福建黄兔屠宰性能、肠道组织形态和肠道酶活的影响。选取体重相近、健康的断奶福建黄兔100只(公、母各半),随机分为4组,每组5个重复,每个重复5只。对照组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加0.20%、0.40%、0.60%HMBi。预试期10d,正试期52d。结果表明,1与对照组相比,Ⅱ组屠体重和屠宰率分别显著和极显著提高(P<0.05;P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组胴体重显著提高(P<0.05)。2与对照组相比,Ⅱ组十二指肠和空肠绒毛高度极显著提高(P<0.01),Ⅲ组空肠和回肠绒毛高度极显著提高(P<0.01);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组十二指肠和空肠隐窝深度显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组回肠隐窝深度显著提高(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组十二指肠和回肠绒毛高度/隐窝深度比值显著或极显著提高(P<0.05;P<0.01),Ⅲ组空肠绒毛高度/隐窝深度比值极显著提高(P<0.01)。3与对照组相比,Ⅱ、Ⅲ组淀粉酶活性显著提高(P<0.05)。综上所述,HMBi可提高福建黄兔的屠宰率,改善小肠黏膜形态,增加肠道酶活性;在本试验条件下,福建黄兔日粮中HMBi的适宜添加水平为0.40%。

不同来源饲粮纤维对福建黄兔盲肠发酵参数及菌群数量的影响

本试验旨在研究不同来源饲粮纤维对福建黄兔盲肠发酵参数及菌群数量的影响。选取200只体重相近、健康的(35±2)日龄断奶福建黄兔,采用单因子完全随机区组试验设计,随机分为4组,分别饲喂以苜蓿干草、甜菜渣、燕麦草、大麦糠为粗饲料原料,以25%的添加比例配制成的4种等能等粗蛋白质的配合饲粮,即高可溶性纤维(HSDF)饲粮(包括2种纤维源,分别为苜蓿干草和甜菜渣)、高不溶性纤维(HIDF)饲粮(纤维源为大麦糠)和对照(CK)饲粮(纤维源为燕麦草),每组5个重复,每个重复10只。预试期为7 d,正试期为53 d。在试验期末,测定盲肠内容物pH、氨态氮(NH3-N)和挥发性脂肪酸(VFA)含量及盲肠菌群数量。结果表明:1)HSDF组的pH、NH3-N含量极显著低于HIDF组(P<0.01);同时HSDF组的乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)含量极显著高于对照组和HIDF组(P<0.01)。2) HSDF组的乳酸杆菌数量极显著高于对照组和HIDF组(P<0.01),其中甜菜渣组的大肠杆菌数量极显著高于苜蓿干草组(P<0.01)。HSDF组的黄色瘤胃球菌数量最高,极显著高于HIDF组和对照组(P<0.01)。由此可见,HSDF(苜蓿干草、甜菜渣)对福建黄兔盲肠发酵及菌群有较好的效果。

环磷酰胺对福建黄兔肝肾损伤的试验研究

本试验旨在探讨不同剂量环磷酰胺对福建黄兔肝肾组织造成的损伤程度。选择雌性成年福建黄兔18只,随机分为对照组(生理盐水),剂量组(Ⅰ~Ⅴ,环磷酰胺浓度分别为20 mg/kg、40 mg/kg、60 mg/kg、80 mg/kg、100 mg/kg),每组3只,连续腹腔注射7 d,第8 d处死动物并解剖取肝脏、肾脏组织,制备肝肾组织石蜡切片,光学显微镜检查组织学结构变化。结果显示,低剂量(20 mg/kg)环磷酰胺对福建黄兔肝肾组织形态无明显影响,高剂量(80 mg/kg及以上)可诱导福建黄兔肝细胞变性,严重者坏死,同时可导致肾小管上皮变性,肾间质水肿、渗出,肾小管上皮细胞坏死脱落,肾小球缺血萎缩。二者病变均随剂量增加而加重。研究表明,不同剂量环磷酰胺造成福建黄兔肝脏、肾脏组织不同程度的损伤。

黑白花兔与福建黄兔生长发育及肉质特性的比较研究

随机选择36只黑白花兔和32只福建黄兔作为试验动物,对2个家兔种群早期生长发育、饲料转化率、屠宰性能和肉质特性进行比较研究。结果表明：黑白花兔不同日龄体重均低于福建黄兔;黑白花兔在生长后期（62~90日龄）饲料转化率极显著低于福建黄兔（P〈0.01）;黑白花兔90日龄屠宰全净膛率与福建黄兔差异不显著（P〉0.05）,其半净膛率比福建黄兔多1.57百分点,差异极显著（P〈0.01）;背最长肌pH值、剪切力、滴水损失和后大腿肌熟肉率黑白花兔与福建黄兔差异均不显著（P〉0.05）,说明黑白花兔也具有较好的肌肉品质,但生长速度相对较慢。

福建黄兔Nramp1基因的克隆及序列分析

为掌握福建黄兔自然巨噬细胞抗性相关蛋白1(natural macro-phage resistant association protein one,Nramp1)基因的分子基础,应用RT-PCR和RACE技术从脾脏组织总RNA中克隆出福建黄兔Nramp1基因的cDNA序列并进行序列分析。结果显示:福建黄兔Nramp1克隆序列全长为2 180 bp(GenBank登录号KT943979),其中5′非翻译区103 bp,3′非翻译区443 bp,1 635 bp的开放阅渎框编码544个氨基酸;福建黄兔与人、猪、马、黄牛、水牛、绵羊、鹿和犬的核苷酸序列同源性分别为86.0%、84.7%、86.2%、84.9%、85.0%、85.4%、85.2%和85.9%。研究结果为进一步研究福建黄兔Nramp1基因的结构、表达及抗病育种等提供基础数据。