粮农产品及食品中产毒真菌及真菌毒素检测技术研究进展

从粮农产品及食品安全的角度来看,农产食源性痢疾本身对人们和动物造成的感染很少。污染粮农产品及食品的主要是产毒真菌及其产生的真菌毒素,不仅会给人体带来不可逆的伤害,而且对社会经济的发展也存在严重的威胁。目前针对产毒真菌及真菌毒素的研究主要集中在检测方法上,这些检测方法能够更有效地检测出产毒真菌及真菌毒素对粮农产品及食品的污染水平。本文主要介绍了目前产毒真菌及真菌毒素检测方法的研究进展。

松针褐斑病菌的产毒培养和毒素粗提方法

松针褐斑病菌在PD和MS培养基中生长良好 ,能产生毒素。在这两种培养基中加入敏感寄主火炬松的针叶浸汁对毒素的产生和活性没有明显影响。甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿甲醇 (氯仿∶甲醇 =2∶3)混合溶剂等均能把毒素物质充分提取出来 ,苯、氯仿、乙酸乙酯等极性小的溶剂不能充分提取毒素。通过生测和高效液相 (HPLC)比较分析表明 ,采用MS培养液培养病菌 ,以氯仿甲醇混合溶剂提取毒素 ,将有利于毒素的产生和毒素的分离。

昆虫病原真菌毒素的研究进展

根据昆虫病原真菌毒素的分子量和结构分为低分子量毒素和高分子蛋白毒素两大类,根据结构将低分子量毒素分为环缩肽类、色素类、有机酸类和其它类,根据功能将大分子蛋白毒素分为酶类毒素和非酶类蛋白毒素。对白僵菌素、破坏素等多种昆虫病原真菌毒素的结构和性质进行了阐述。从昆虫病原真菌产毒素的适宜培养条件到毒素的分离纯化方法、毒素毒力的生物测定和毒素的致病机理等方面的研究进展情况进行了评述。

松针褐斑病菌毒素的层析分离及紫外吸收特性研究

以生测为导向,采用柱层析和薄层层析相结合,从松针褐斑病菌发酵液中分离出3个致毒活性组分m,p和q。经薄层层析检验可知m,q在A,C两个展开系统中Rf值一致,分别为0.57和0.75,且m,q展开后在254nm和365nm紫外光下都呈蓝色荧光,基本认为m和q是同一组分;p在365nm紫外光下为黄白色荧光,在A、C两个展开系统中Rf值分别为0.46和0.66。层析分离的结果表明,松针褐斑病菌可能含两个或两个以上的毒素物质。对m和p两组分进行紫外扫描的结果显示,m,p分别在波长210nm和208nm处有最大吸收峰,在365nm和254nm紫外光下无吸收或吸收很弱。高效液相分析显示:m,p都不是纯物质,在210nm检测波长下,m有3个吸收峰,保留时间分别为2.41,3.80和16.68min,p有4个吸收峰,保留时间分别为2.46,3.75,12.00和17.25min。研究结果表明组分m和p可能含有相同或相似的化学物质,要获得纯物质还需进一步分离。

松针褐斑病菌毒素活性的生物检测

松针褐斑病菌毒素不仅能伤害湿地松、火炬松等寄主植物的幼苗、针叶、根及愈伤组织 ,对非寄主植物水花生、紫茎泽兰的叶片也有伤害作用。在试验的几种生测材料中 ,湿地松愈伤组织对毒素伤害最敏感 ,湿地松幼苗、幼针叶 ,火炬松幼针叶和紫茎泽兰叶片次之 ,湿地松幼根、老针叶 ,火炬松老针叶 ,水花生和小麦叶片最不敏感。根据生测材料的敏感程度及表现症状的特异性分析可知 ,用湿地松、火炬松幼苗和幼针叶作生测材料较好。比较针刺法、浸渍法和涂抹法等几种生测方法表明 ,用针刺法接种毒素效果最好 ,其反应速度快 ,用量少 ,症状明显。因此建议在松针褐斑病菌毒素的生物检测中 ,以湿地松或火炬松幼苗或幼针叶作为材料 。

松针褐斑病菌毒素的专化性研究

用松针褐斑病菌毒素粗提液处理湿地松、火炬松、黑松和马尾松的切根苗，发现湿地松和火炬松对毒素最为敏感，其次为马尾松，黑松最不敏感。毒素生测的结果与松树在田间自然感染的情况有一定的相似性，但不完全一致。不同湿地松抗病无性系对毒素的反应存在着差别，其中３３ 号所受伤害较轻，１０ 号及３６ 号较重。结合毒素薄层层析半定量试验，利用寄主愈伤组织对毒素的反应，发现毒素对寄主愈伤组织的最低作用浓度应在１００ μｇ／ｍ Ｌ 以下。试验了５ 种杂草对毒素的反应，其中空心莲子草和稞草对毒素敏感。进一步研究利用毒素作为除草剂不失为毒素利用的一个新思路。上述研究表明该毒素为非寄主专化性毒素。

党参外源污染真菌的组成及其产毒特性

【目的】研究药材党参外源污染真菌的组成及分析产毒真菌。【方法】采用平板稀释法分离党参表面外源真菌、形态特征和序列分析方法对菌株进行鉴定及高效液相色谱-质谱联用技术对产毒真菌进行检测。【结果】党参药材外源污染以曲霉Aspergillus为主,青霉Penicillium次之;曲霉属中主要是以塔宾曲霉A.tubingensis和烟曲霉A.fumigatus为优势菌,青霉主要是以橘青霉P.citrinum为优势菌。分离的外源污染真菌中共筛选出3株产毒真菌,均鉴定为黄曲霉A.flavus。黄曲霉GXDC1-5产生黄曲霉毒素B1(AFB1),浓度为11.91 ng/m L;黄曲霉HBDC1-5中产生AFB1和AFB2,浓度分别为9.28和1.53 ng/m L;黄曲霉YNDC1-5产生AFB1、AFB2和AFG2,浓度分别为76.09、2.36和1.49 ng/m L。【结论】从党参的表面分离出了3株产黄曲霉毒素Aflatoxin的黄曲霉。

大骨节病4种病因学说的同步研究

目的 研究大骨节病的始动病因。方法 对大骨节病既往的生物地球化学说(低硒说)、水中有机物中毒说、粮食真菌毒素中毒说3种病因说及我们发现的病毒病因说进行同步研究,探讨该病的始动病因。结果 生物地球化学说(低硒说)、水中有机物中毒说、粮食真菌毒素中毒说均不是大骨节病的始动病因。大骨节病的病因模式应该是与环境条件下的生物毒素中毒(低硒条件下的人类微小病毒B19感染)有较大关联性。结论 大骨节病的始动病因可能是低硒条件下的人类微小病毒B19感染引起的。

河南省小麦穗霉真菌的检测

为了调查河南省小麦穗霉的物种多样性,采集了该省18个地级市共计250余份小麦穗腐标本,经过组织分离、纯化,共得到256株真菌分离物.经鉴定表明,河南省小麦穗霉具有丰富的多样性.对于分离频率较高(>1%)的分离物,结合形态特征和分子生物学特征,鉴定出5个属10个种,包括镰刀菌(Fusarium graminearum,Fusarium pseudograminearum,Fusarium equiseti,Fusarium proliferatum和Fusarium verticillioides)、链格孢(Alternaria alternate)、粉红聚端孢(Trichothecium roseum)、毛壳(Chaetomium funicolum,Chaetomium globosum)和麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana).对于分离频率较低(<1%)的属,通过ITS测序分析鉴定出8个属,包括雪球微座孢(Microdochium sp.)、暗球腔菌(Phaeosphaeria sp.)、团网菌(Arcyria sp.)、茎点霉(Phoma sp.)、木霉(Trichoderma sp.)、附球菌(Epicoccum sp.)、黑孢(Nigrospora sp.)和枝孢(Cladosporium sp.).链格孢(A.alternate)和禾谷镰刀菌(F.graminearum)的分离频率分别占42.2%和29.7%,地区检出率分别为88.9%和83.3%,是河南省小麦穗霉的优势菌群.

冷冻饮品中真菌污染状况及其菌相分布

〔目的〕为了解冷冻饮品产品受真菌污染状况 ,主要菌相分布对不同种类冷冻饮品中真菌的检出情况 ,为我国制定冷冻饮品 ,中真菌的卫生标准提供科学依据。〔方法〕参照食品微生物检验方法中GB4789.15 -94-0 5 -18随机进样 ,对进市及本市生产、销售的 45 0份、98个品种进行了真菌监测、菌属鉴定 ,并加以分析。〔结果〕共检出霉菌样品 170份 ,3 5 7株 ,总检出率 3 7.78% ;酵母菌 166份 ,总检出率 3 6.88% ;主要菌相为霉菌、酵母菌。且同一品种受不同真菌污染严重。〔结论〕冷冻饮品真菌污染严重 ,检出率高 ,应把其检测纳入卫生检验项目 ,并尽快制定我国冷冻饮品中真菌卫生标准。

转Bt基因作物对丛枝菌根真菌的影响研究进展

在过去的十年里,世界范围内转基因作物尤其是抗虫性转Bt基因作物的品种和种植面积迅速增加。同时,转Bt基因作物的环境安全性评价问题成为人们关注和研究的热点。丛枝菌根真菌(AMF)是生态系统中普遍存在的土壤微生物,能与绝大多数植物种类形成共生关系,在农业生态系统中起重要作用。转Bt基因作物环境释放后,其与AMF间的共生关系是否受所转入Bt基因的影响,以及影响机制需要及时研究。为此,综述了转Bt基因作物与AMF共生特征方面的研究进展,并根据Bt毒素发生的空间和时间规律提出了危害机制以及转Bt基因植物的规模化种植将降低农田系统中的AMF的生物多样性的观点。

直接薄层层析技术快速检出黄曲霉毒素产生菌株

直接硅胶板薄层层析快速检出黄曲霉毒素产生菌株，简化了分离培养、萃取纯化等繁琐步骤，大大缩短样品检测所需时间，做到快速灵敏。检验时取生长待测菌珠的琼脂块，直接以硅胶薄层板展开浸出溶液，在短波紫外先下产毒株色谱带中毒素斑点清晰易辨。所用试剂、设备简单，费用低廉，容易掌握，无假阳性结果。尤其适用于大量菌株分离筛选。应用此方法，检测了３０８个真菌菌株的产毒能力。

虫生真菌毒素的性质与分离研究进展

虫生真菌是一类重要的生防真菌,生产中广泛应用．现对虫生真菌的界定、侵染机制以及对已发现的虫生真菌毒素的性质、结构和分离纯化方法进行了综述．

噬线虫真菌的应用现状及前景分析

在自然界,噬线虫真菌对线虫的控制,起着重要作用。噬线虫真菌分布广泛,是防治线虫病的一种安全、无残留、无污染的生物防治材料。文章就噬线虫真菌的种类、作用机理及在生物防治动植物线虫病方面的应用研究进展进行了综述,为家畜寄生线虫病的防治提供参考。

虫生真菌杀虫增效途径研究进展

为促进虫生真菌在生产实践中的应用,通过查阅国内外相关文献,回顾了化学杀虫剂、营养类物质、菌种间复配及菌种代谢产物、表面活性剂,以及基因工程菌株等提高虫生真菌毒力的相关研究。总结得出在化学杀虫剂、营养类物质、表面活性剂与虫生真菌相容性较好的情况下,将其按一定比例添加可增强虫生真菌的毒力。菌株间复配及应用菌株代谢产物可拓宽虫生真菌的杀虫谱。强致病力基因在虫生真菌中高效表达后亦可增强虫生真菌的毒力。

生防菌粗毒素对猪殃殃防御酶及叶片细胞膜透性的影响

为了揭示生防菌的致病机理,用3株生防菌粗毒素处理猪殃殃叶片,测定其过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活性、电导率和丙二醛(MDA)含量,探讨生防菌粗毒素对叶片防御酶活性及叶片细胞膜透性的影响。结果表明,3株生防菌粗毒素使猪殃殃叶片组织细胞膜透性上升,MDA含量上升;毒素处理后的猪殃殃叶片中POD、SOD和CAT的活性均较不处理的对照升高。

植物病原菌毒素研究进展

毒素是病原菌致病的因子之一 ,近年来越来越受到植物病理学家的重视。本文对植物病原细菌毒素及植物病原真菌毒素的种类、化学结构及作用机理的研究进展作了综述 。

交链孢酚诱发人胎食管上皮增生的实验研究

应用AOH作用体外培养的人胎儿食管上皮组织24h,继续培养一周后,四例胎儿的食管上皮组织均表现基底层细胞增厚,达7～8层,是空白对照的2～3倍,细胞排列紧密紊乱,胞核增大,不规则且浓染,可见双核仁,并呈乳头状内生性增生,在固有层及粘膜下层形成上皮细胞团。用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)处理人胎食管上皮,上皮组织亦增生;而溶剂对照组无明显改变。本实验结果提示AOH对人胎儿食管上皮具诱变作用,为AOH与人食管癌的关系提供了客观依据。

云南常见鹅膏毒素粗提物对几种植物病原真菌的抑制活性研究

研究了白刺头鹅膏、土黄鹅膏、隐花青鹅膏、红黄鹅膏和格文鹅膏甲醇提取物对3种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用。结果表明：土黄鹅膏和白刺头鹅膏毒素粗提物对烟草赤星病菌（ Alternaria alternate）、魔芋软腐病菌（ Rhizopus stolonifer）、蚕豆基腐病菌（Fusarium avenaceum）菌丝生长的抑制作用较强，EC50为13．2138～25．7256 g／L；其他3种鹅膏甲醇提取物对上述3种真菌菌丝生长的抑制作用很弱。

食品中产毒真菌核酸检测方法的研究进展

食品中最常见的产毒真菌主要包括黄曲霉、赭曲霉、青霉属和镰刀菌属等,能够对人和动物机体造成不可逆转的伤害甚至死亡。针对产毒真菌检测可在毒素形成早期预测其产毒性能,为前置化干预毒素危害提供技术支撑,概述了近年来应用于食品中产毒真菌检测的常规PCR方法、实时荧光定量PCR方法和DNA指纹图谱方法、DNA条形码方法等,并对未来产毒真菌检测方法的发展趋势进行了展望。