Fura-2荧光指示剂法研究稀土离子跨红细胞膜的作用

文章采用 Fura- 2荧光指示剂法研究了稀土离子跨红细胞膜的作用 ,结果发现 ,即使在很低的浓度下也能检测到稀土离子的跨膜现象 。

拟南芥花粉细胞质游离钙离子荧光测定法

以拟南芥花粉为材料,利用低温装载法在完整的花粉粒中,成功地载入酯化形式的钙离子荧光探针Fura-2/AM。利用荧光比率分析法对花粉细胞质中游离钙离子的分布特点进行研究并测定了花粉细胞内游离钙离子浓度。结果表明花粉萌发初期细胞质内游离钙离子呈极性分布,萌发沟附近的钙离子浓度明显高于其它部位,萌发孔附近最高,花粉细胞核中最低。花粉粒细胞萌发状态下的[Ca2+]i=246±38nmol/L,该值与花粉粒细胞萌发状态下游离钙离子浓度用其它方法测得值接近,进一步表明所建立的用Fura-2/AM检测拟南芥花粉粒细胞质游离钙离子的方法是可靠的。

用Fura 2－AM检测血小板胞浆游离钙浓度

本文对应用荧光指示剂Ｆｕｒａ２－ＡＭ（国产）测定血小板胞浆游离钙浓度的某些实验条件进行了探讨。结果表明：实验最适ｐＨ范围为７．３５～７．４５。实验不受溶血、黄疸及高脂血样品的干扰。批内ＣＶ４．９８％，批间ＣＶ５．６％。正常成人参考值为１６７．７５±２０．６６ｎｍｏｌ／Ｌ。与使用进口Ｆｕｒａ２－ＡＭ（Ｓｉｇｍａ产品）检测结果比较，结果无统计学差异，相关系数：γ＝０．９８。

Na^+/Ca^(2+)交换介导的Nd^(3+)跨淋巴细胞膜的行为研究

利用Fura 2荧光浓度指示剂法对Na+ Ca2 + 交换介导的Nd3+ 跨人外周血淋巴细胞膜行为进行了一系列研究 .结果表明 :当细胞形成向外的Na+ 梯度时Nd3+ 能跨膜进入细胞 ,电压依赖性L 型Ca2 + 通道对Nd3+ 进入无贡献 ,提出了Na+ Ca2 +交换系统是Nd3+ 进入细胞的主要途径 ;在安全浓度范围内进入胞内的游离Nd3+ 浓度与胞外的Nd3+ 浓度成正比 ,计算表明进入胞内的最大游离Nd3+ 浓度为 ( 3 67± 0 32 )× 10 - 1 4 mol·L- 1 ;当胞外pH值降低时进入胞内的游离Nd3+ 浓度减小 ,胞内游离Ca2 + 浓度减小时进入的游离Nd3+ 浓度略微增大 ,胞外Nd3+ 和Ca2 + 竞争Na+ Ca2 + 交换位点 ;结果进一步推测进入胞内的Nd3+ 可被质膜钙泵泵出胞外 ,初步实验表明进入胞浆中的Nd3+ 会在内质网中进一步累积 。

溴氰菊酯对大鼠神经细胞内游离钙的影响

目的 研究溴氰菊酯对大鼠神经细胞内游离钙 ([Ca2 +]i)的影响 ,并探讨其可能机制。方法 用溴氰菊酯处理分离的大鼠脑细胞 ,用Fura 2 AM为细胞内钙离子荧光指示剂 ,测定神经细胞内游离钙浓度 ;并利用NMDA受体竞争性拮抗剂AP5、非竞争性拮抗剂MK 80 1、Na+离子通道阻断剂TTX、电压依赖性钙通道阻断剂尼莫地平 ,探讨了溴氰菊酯影响胞内钙的可能机制 ;另外还观察了去除胞外钙时溴氰菊酯对胞内钙的影响情况。结果 溴氰菊酯浓度在 0～ 2 0 0nmol L范围内 ,可以显著提高大鼠皮层和海马细胞内游离钙的浓度 (P <0 0 1) ,并有良好的剂量 反应关系 (相关系数分别为r =0 96 4,r =0 981) ;AP5、MK 80 1和TTX可以有效阻断溴氰菊酯的升钙作用 ;而尼莫地平则无影响 ;去除胞外钙时 ,溴氰菊酯的升钙作用也消失。结论 溴氰菊酯导致的胞内钙升高 ,主要是由谷氨酸激活NMDA受体门控钙通道引起的胞外钙内流 ,和电压依赖性钙通道及胞内钙库释放无关。

体外冲击波碎石术致肾细胞内钙水平与氧自由基的变化

目的:观察体外冲击波碎石术(E SW L)对肾细胞内游离钙(犤C a2犦i)水平和肾组织氧自由基的影响及+钙通道阻滞剂的干预作用,探讨肾损伤机制。方法:30只家兔制成单肾模型,随机等分为对照组、E SW L组和E SW L+维拉帕米预处理组。E SW L后24h获取肾脏,采用Fura-2/A M荧光指示剂测定肾细胞内犤C a2+犦i浓度变化,同时测定肾组织超氧化物歧化酶(SO D)活性和脂质过氧化终产物丙二醛M D A。结果:ESW L后肾细胞内犤C a2+犦i增高,肾组()织SO D活性降低、M D A生成增加(P<0.01);维拉帕米预处理能抑制细胞内犤C a2犦i和M D A增加(P<0.01,P<+0.05),提高SO D活性P<0.01)。结论:E SW L所致肾细胞内C a2+犦i超载和肾组织氧自由基侵袭,可能在E SW L肾(犤损害病理过程中起重要作用。

镧离子跨入红细胞膜的研究

本文采用 fura- 2荧光指示剂技术研究了在不同条件下镧离子跨红细胞膜的行为 ,结果发现 :在正常条件下无论是钙或镧离子都不能跨膜进入新鲜红细胞 ;红细胞 ATP耗竭后出现明显的 Ca2 +内流现象 ,而镧离子仍不能观察到跨膜现象 .由此可见 ,稀土镧离子在过膜上与钙离子表现出很大的差异性 。

PLC对血小板游离钙离子浓度作用实验条件研究

对荧光法测定磷酯酶C对血小板细胞质游离钙离子浓度作用的实验条件进行了研究.结果表明,在本实验条件下,Fura 2／AM合适的浓度为4μmol／L;最适pH为7.4;血小板的浓度在1×108～3×108个／L;保护剂ASA及激活剂ADP的浓度分别为0.937mmol／L和20mmol／L;波长选用350nm和380nm;背景值对实验结果没有影响.