神经细胞老化与细胞内Ca^(2+)相关性的实验研究

应用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化模型,运用Fura2/AM染色结合计算机图像处理的方法观察神经细胞老化过程中不同时间细胞内Ca^(2+)动态变化过程。实验结果表明:随着培养时间增长,细胞内Ca^(2+)浓度增加,培养一天时细胞内Ca^(2+)浓度为104.8±21.9(±s),培养至21天时细胞内Ca^(2+)浓度变为130.8±29.6(P<0.01)。

川芎嗪对PGF_(2α)诱导心肌肥大的抑制作用

目的研究川芎嗪(Tetraethylpyrazine,TMP)对前列腺素F2α(PGF2α)所致心肌肥大的影响。方法利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径大小、蛋白质含量为心肌肥大反应指标,观察药物的抗心肌肥大效应;用Fura2/AM负载的培养心肌细胞检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)。结果PGF2α107mol/L使心肌细胞明显增大,蛋白质含量明显增加,并使[Ca2+]i显著升高。与PGF2α组比较,TMP106、105和104mol/L可分别使心肌细胞直径缩小36%、44%和55%(P<0.05);蛋白质含量分别减少13%、21%和24%(P<0.01);[Ca2+]i分别降低17%、37%和48%(P<0.05)。结论TMP可抑制PGF2α诱导的心肌细胞肥大,该作用可能与其抑制心肌细胞[Ca2+]i的升高有关。

下调PTEN基因对缺氧损伤后海马神经元NR2B受体调控机制研究

目的:探讨用RNAi干扰技术下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)对缺氧损伤引起的神经元NR2B受体表达调控机制。方法:建立海马神经元培养缺氧缺糖(Oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤模型,转染shRNAspten-GFP质粒,采用细胞比色分析(Colorimetric assay)法观察神经元膜表面NR2B含量,RT-PCR测定NR2B受体的mRNA的表达,采用Fura2-AM法测定胞内Ca2+浓度,AlamarBlue进行神经元活力分析。结果:shRNAspten-GFP能成功转染到神经元中;细胞比色法显示神经元膜表面有大量NR2B表达,与PshGFP对照组相比shRNAspten治疗组NR2B含量明显降低(P<0.05),RT-PCR测定结果与细胞比色法结果基本一致;OGD损伤组比正常组胞内Ca2+浓度显著升高(P<0.05),转染PTEN基因后胞内Ca2+浓度比PshGFP对照组明显降低(P<0.05);无关对照PshGFP组神经元活力较正常对照组和治疗组均有显著下降(P<0.05)。结论:下调PTEN基因可降低NR2B的表达,阻断Ca2+内流,增加细胞活力,从而保护神经元损伤。

三七总皂苷抑制肝细胞钙超载的机制

目的通过测定大鼠肝细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），观察三七总皂苷（ＰＮＧＳ）对肝细胞Ｃａ２＋浓度的影响，探讨其抑制肝细胞钙超载的机制。方法胶原酶分离大鼠肝细胞，Ｆｕｒａ２／ＡＭ技术测定［Ｃａ２＋］ｉ，研究ＰＮＧＳ对静息和被激动状态下肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ的影响。结果１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１血管加压素及１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１血管紧张素分别使肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ增加２００％和９４％，ｖｅｒａｐａｍｉｌ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ和ＰＮＧＳ均能不同程度地抑制血管加压素、血管紧张素激动引起的肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高，ＰＮＧＳ的抑制作用显著强于ｖｅｒａｐａｍｉｌ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ且呈明显的剂量依赖性。ＰＮＧＳ还能轻度降低静息状态下肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ，而ｖｅｒａｐａｍｉｌ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ无此作用。结论ＰＮＧＳ能特异性阻断肝细胞膜上受体依赖性钙通道（ＲＯＣ），抑制肝细胞的钙内流，阻断肝细胞内源性ＩＰ３途径，防止肝细胞内钙超载。ＰＮＧＳ抑制钙超载机制还可能与其本身轻度结合钙离子有关。

在缺氧预处置中钙离子的作用(英文)

本文用 Fura/AM荧光法和钙离子选择电极方法分别测定了急性重复缺氧小鼠脑细胞内和全脑匀浆液中钙离子浓度。结果表明 ,与正常对照组相比 ,所有缺氧组的脑细胞内和全脑匀浆液中钙离子含量明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,但是随着缺氧次数的增加 ,却未见明显的钙离子浓度的升高。这些结果提示 ,在急性重复缺氧这种缺氧预处置中 。

N—乙基沛心达对大鼠心肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

N—乙基沛心达对静息状态下心肌细胞胞浆)[Ca^(2+)]i无显著影响,对高钾诱发心肌细胞胞浆[Ca^(2+)]i升高,N—乙基沛心达2μmol/L,虽有抑制作用,但与对照组相比无显著差异(p>0.05),N—乙基沛心达10μmol/L可显著抑制大鼠心肌细胞胞浆[Ca^(2+)]i升高,与对照组相比,差异显著(p<0.01)。

Effects of Tetrandrine on Cytosolic Free Calcium in Cultured Bovine Aortic Smooth Muscle Cells

\ The effects of tetrandrine (Tet) on cytosolic free calcium ([Ca2+]i) in subcultured bovine aortic smooth muscle cells (SMC) were studied by Fura2 and ARCMMIC cation measurement system. Tet (1～100 μmol·L-1) had no effect on the resting [Ca2+]i, but had inhibitory effects on [Ca2+]i elevation induced by high K+, 5HT, ATP, Ang II and NE in the presence of extracellular Ca2+. High concentration of Tet also inhibited Pheinduced [Ca2+]i elevation in absence of extracellular Ca2+. Tet (1～100 μmol·L-1) inhibited KCl (60 mmol·L-1) induced [Ca2+]i elevation in dosedependent manner, the IC50 value was 9.2 (95% confidence limits: 5.7～14.9) mmol·L-1. The results suggested that Tet had blocking effects on both VOC and ROC in bovine aortic SMC. It appears that the mechanisms of blocking effect of Tet on ROC might be primarily due to its Ca2+ entry blocking effects.

氯胺酮、利多卡因对分化的PC12细胞内游离钙浓度的影响

目的探讨不同浓度的氯胺酮、利多卡因对PC12细胞内游离钙的影响及其作用机制。方法将经NGF诱导分化的神经元样PC12细胞接种于24孔板内,培养8~12h后,细胞随机分为氯胺酮处理组(K组):分别为10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)倍比稀释的氯胺酮;利多卡因处理组(L组):分别为10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)、10^(-7)、10^(-8)倍比稀释的利多卡因。用Fura 2-AM染料作为Ca^(2+)指示剂,37℃下共孵育40min,人工脑脊液洗涤后,选定多个细胞分别观察加入染料后340/380nm激发荧光强度比值的变化,代表细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i)的变化。结果10^(-2)~10^(-6)倍比稀释的氯胺酮或10^(-2)~10^(-8)倍比稀释的利多卡因使分化的PC12细胞340/380nm激发荧光强度比值明显下降。结论一定浓度的氯胺酮或利多卡因明显降低分化的PC12细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i),可能分别与NMDA受体和钠通道被抑制有关。

左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞钙超负荷的作用

目的观察左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞钙离子超负荷的保护性作用。方法体外增养心肌细胞并建立心肌细胞缺氧模型,采用Fura2/am荧光探针在荧光分光光度计下直接测定各组心肌细胞内的游离钙离子浓度,通过RT-PCR方法分析细胞质膜上钙离子ATP酶的表达,并同时用WesternBlot方法测定肌浆网上钙泵的量。结果在左旋氨氯地平干预下缺氧心肌细胞的游离钙离子浓度显著降低(359.06±75.00nmol/L),同时增强了缺氧条件下的细胞质膜钙离子ATP酶的表达及肌浆网上钙泵的含量。结论左旋氨氯地平可以通过提高钙泵的表达来增强心肌细胞在缺氧条件下对钙超负荷的抵抗能力。

针刺正常骼肌及力竭肌对胞浆自由钙离子浓度的影响机制

利用荧光指示剂Fura2测定离体青蛙半腱肌胞浆自由钙离子浓度（[Ca2+]i），已发现肌肉经长时间电刺激至力竭后，[Ca2+]i上升。对针刺影响力竭肌[Ca2+]i的机制进行了进一步探讨。研究发现，针刺正常肌使[Ca2+]i上升，其上升可被钙通道阻滞剂异博定大部分阻断；针刺电刺激后半腱肌则使[Ca2+]i下降，其下降可被Na－Ca交换阻断剂奎尼丁阻断。如在针刺前予先加入奎尼丁，可抑制针刺对电刺激肌的降钙作用。上述结果证实：1）针刺正常肌的升钙作用主要由于细胞膜慢钙通道开放：2）针刺电刺激肌的降钙作用则是通过提高细胞膜对Na+通透性，促进Na－Ca交换而完成。研究亦发现，在针刺入肌肉的留针期内，细胞内Ca2+有上升和下降两类反应。其意义与机制尚待探讨。