锐顶镰孢菌Fusarium acuminatum小RNA的鉴定与分析

用高通量测序技术分析了Fusarium acuminatum细胞内小RNA的组成、长度分布、碱基偏好性、分类以及潜在的调控靶标,预测了11个新的miRNAs和6503个潜在的siRNAs.其中,miRNAs的靶基因多定位于膜组织,具有催化或结合活性,主要与代谢相关.研究结果为农业生产中合理有效防治F.acuminatum引起的病害提供了理论基础.

采后苹果镰孢果腐病菌的鉴定及生物学特性分析

利用形态学观察和遗传背景分析确定了锐顶镰孢菌(Fusarium acuminatum)对采后苹果果实的致病性,分析了不同碳源、氮源、温度、pH、光照时间和根系分泌物对锐顶镰孢菌菌落生长的影响.研究结果为精准防治锐顶镰孢菌引起的果蔬采后病害提供了理论基础.

采用EF-1α序列分析法对苜蓿根腐病病原菌——锐顶镰刀菌的鉴定

苜蓿根腐病对苜蓿生长和产量造成严重影响,为了解引起根腐病病原真菌的种类,本文对从陕西省定边县牧草草场紫花苜蓿根部分离得到的根腐病病原菌进行形态学观察、EF-1α序列分析鉴定及接种试验。结果表明:通过对病原菌在PDA培养基中的分离、纯化得到的单菌落形态学观察及显微镜下菌丝、孢子的观察,该病原菌属于引起苜蓿根腐病的镰刀菌属(Fusarium);用CTAB法提取病原菌基因组DNA,并对EF-1α序列进行PCR扩增、回收纯化、克隆测序,将测序结果进行Blast比对,构建系统发育树,分析与Genbank已知近缘种属亲缘关系,结果显示与锐顶镰刀菌(F.acuminatum)亲缘关系最近,可信度达99%;最后通过根部接种试验,接种苜蓿根部发病症状与田间根腐病发病症状一致,鉴定结果显示本试验研究的引起紫花苜蓿根腐病的病原菌为镰刀菌属锐顶镰刀菌(F.acuminatum)。

黑龙江省大豆根腐病菌锐顶镰孢鉴定

2012年从黑龙江省采集的大豆根腐病病株上分离到5个疑似锐顶镰孢的分离物,基于形态学、EF-1α基因序列及锐顶镰孢特异性分子标记检测,将5个分离物鉴定为锐顶镰孢(Fusarium acuminatum)。接种试验表明,5个分离物对大豆品种Williams和合丰25具有较强的致病力,分离物间不存在致病力差异。这是首次报道在黑龙江省发现锐顶镰孢引起大豆根腐病。

玉竹褐斑病拮抗细菌的分离筛选和鉴定

从吉林农业科技学院药植园采集的玉竹根际土壤中分离、纯化获得90株细菌,运用平板对峙法筛选出16株对锐顶镰孢菌(Fusarium acuminatum)具有较好拮抗作用的菌株。采用生长速率法对抑菌能力最强的G-27菌株进行抗菌谱的测定,并进行盆栽实验以验证其对玉竹褐斑病的防治效果。抑菌实验结果表明,G-27菌株发酵液对锐顶镰孢菌的抑制率达87.67%,同时对辣椒疫霉病菌等10种植物病菌也具有较好的抑菌作用,展现了较好的广谱抑菌作用。盆栽实验结果表明,G-27对玉竹褐斑病的防治效果为70.01%和71.52%,与农药对照组相比均具有显著差异(P<0.05),其20倍稀释的发酵液的防效仍能达到50%以上。经形态特征、生理生化特性鉴定及16S r DNA序列分析,确定G-27为解淀粉酶芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

岷县当归根腐病病原菌的分离鉴定及生物学特性研究

为探究当归根腐病病害的主要病原菌及其生物学特性,本研究选取患根腐病的岷县当归为材料,进行了病原菌的分离纯化、菌株形态学观察、分子生物学鉴定等试验,同时分析了不同碳源、氮源、温度、pH、光照对病原菌生长的影响,以及菌丝的致死温度.结果表明,岷县当归根腐病病原菌为燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)和锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum),燕麦镰刀菌在以可溶性淀粉、葡萄糖和蔗糖为碳源,蛋白胨为氮源,温度为20℃,pH值为8时生长较好,光照对燕麦镰刀菌的生长无明显影响,63℃处理10 min可致死;锐顶镰刀菌在以甘露醇、葡萄糖和蔗糖为碳源,蛋白胨为氮源,温度为25℃,pH值为8,连续黑暗或12 h光暗交替培养下生长较好,71℃处理10 min可致死.

玉竹锐顶镰孢菌的生物学特性及药剂防治

为了研究和掌握玉竹褐斑病的发生规律及更好的防治病害,从温度、pH、光照、碳源、氮源对玉竹锐顶镰孢菌(Fusarium acuminatum)菌落生长的影响以及不同种类杀菌剂对病菌的抑菌效果进行了研究。结果表明,锐顶镰孢菌菌丝生长最适温度为28℃,最适pH为7.0,光暗交替有利于菌丝生长,以可溶性淀粉为碳源、以甘氨酸为氮源时利用最优。药剂筛选中代森铵和吡唑醚菌酯对玉竹锐顶镰孢菌的抑制效果最优。通过对玉竹锐顶镰孢菌生物学特性的了解,得出有机硫类和唑类杀菌剂均可达到一定的防治作用。

绿色木霉和枯草芽孢杆菌对玉竹锐顶镰孢菌的拮抗作用研究

采用平板对峙培养法、对扣培养法和圆盘滤膜法研究绿色木霉和枯草芽孢杆菌对玉竹锐顶镰孢菌的拮抗作用。结果表明:木霉和枯草芽孢杆菌对锐顶镰孢菌菌丝生长具有一定抑制作用,木霉的抑制效果较差,枯草芽孢杆菌的抑制效果较好,其中枯草芽孢杆菌菌株Dc10的抑制作用最强,其非挥发性代谢产物对病原菌的抑制率可达100%。

党参根腐病病原菌鉴定及其室内毒力测定

为明确引起甘肃省渭源县党参根腐病的病原菌,并筛选防治该病害的最佳杀菌剂,试验采用组织分离法和单孢分离法对引起党参根腐病的病原菌进行了分离纯化,通过致病性测定、形态学特征、编码转录延伸因子区序列(TEF-1α)聚类分析对病原菌进行了鉴定,并采用生长速率法进行药剂毒力测定。病原鉴定结果表明,引起甘肃省渭源县党参根腐病的病原菌为茄镰孢菌(Fusarium solani)和锐顶镰孢菌(Fusarium acuminatum);毒力测定结果表明,参试的6种药剂均对其有抑制效果,其中25%腈菌唑乳油、50%多菌灵可湿性粉剂对党参根腐病菌丝生长具有较好的防治效果(EC50<0.05 g·L^-1),可作为防治党参根腐病的主选药剂。

毛壳菌和木霉菌防治山杨根腐病的试验

通过人工诱发试验证明山杨根腐病病原菌为锐顶镰孢菌Ｆｕｓａｒｉｕｍａｃｕｍｉｎａ－ｔｕｍＥｌｉｓ＆Ｅｖｅｒｈａｒｔ，室内用毛壳菌Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｓｐ．和木霉菌Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐ．与锐顶镰孢菌做对峙试验和室外防治试验，发现二者对锐顶镰孢菌都有较好的拮抗作用，是山杨根腐病理想的生防药剂。

甘肃省定西市芹菜根腐病发生及病原优势种类分析

【目的】明确甘肃省定西市芹菜根腐病的发生情况和病原菌种类,为田间防治提供理论依据。【方法】在定西市8个乡镇进行调查,采集根腐病样,经组织和单孢分离获得纯化菌株,采用形态学结合rDNA-ITS与TEF-1α基因序列鉴定病原,按照柯赫氏法则测定其致病性。【结果】定西市芹菜根腐病病田率为63.54%,病株率为24.45%;其田间症状包括茎基部缢缩腐烂以及主根下部腐烂或维管束变色2种类型。分离纯化得到78株镰孢菌(Fusarium spp.),包括尖孢镰孢菌(F.oxysporum)62株、锐顶镰孢菌(F.acuminatum)11株和茄病镰孢菌(F.solani)5株,其分离频率分别为79.49%、14.10%和6.41%。经致病性测定,尖孢镰孢菌、茄病镰孢菌与锐顶镰孢菌的病情指数分别为78.33、24.44和11.11。【结论】尖孢镰孢菌是定西市芹菜根腐病的优势病原菌,且致病性最强,茄病镰孢菌与锐顶镰孢菌的致病性较弱;其中,锐顶镰孢菌引起芹菜根腐病为国内首次报道。

贵州省草莓根腐病病原鉴定

为了查明贵州草莓根腐病病原菌的种类,从贵州省草莓主要产区采集草莓根腐病病株,对其开展了分离纯化和柯赫氏法则验证,并采用形态学鉴定与rDNA–ITS序列分析鉴定相结合的方式对分离到的病原菌进行鉴定。结果表明,贵州省草莓根腐病的病原菌为锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum)。锐顶镰刀菌(F.acuminatum)侵染草莓引起草莓根腐病,在国内属于首次报道。

引起黄芪根腐病的锐顶镰刀菌的RPA检测方法

黄芪根腐病是可由多种镰刀菌引起的土传病害,锐顶镰刀菌为主要病原菌。根据锐顶镰刀菌转录延伸因子(TEF-1α)的特异性区段设计引物,通过优化反应温度、反应时间、灵敏度和特异性试验,以及开展对实际样品的检测,建立了锐顶镰刀菌的的重组酶聚合酶扩增(RPA)检测方法。该方法的最优反应条件为39℃、30 min,能够特异性检测锐顶镰刀菌,检测灵敏度为10μg/mL;该方法应用于实际样品检测,具有检测速度快、灵敏度高、特异性强的优点,有利于黄芪根腐病的病原监测与病害的早期诊断。

辽宁省大豆根腐病病原菌的分离鉴定及其生物学特性和对常用杀菌剂的敏感性

为明确辽宁省沈阳市大豆根腐病病原菌的分类地位,使用形态学特征和分子生物学技术对分离菌株进行鉴定,于室内对其最适生长温度、碳源及氮源进行测定,采用分生孢子悬浮液蘸根测定其对大豆品种合丰47的致病力,并采用菌丝生长速率法和分生孢子萌发率法测定16种常用杀菌剂对其的毒力。结果表明,从感根腐病大豆样品中共分离到31株镰孢菌菌株,基于培养性状从中选择3株疑似锐顶镰孢菌Fusarium acuminatum菌株进行鉴定和分析。这3株菌株在PDA培养基上形成的菌落呈白色绒毡状,产生黄色色素;大型分生孢子大小为3.3~7.2μm×29.0~62.0μm,小型分生孢子大小为2.5~5.7μm×9.1~16.8μm;结合翻译延伸因子(translation elongation factor,TEF)序列系统发育分析结果将3株菌株最终鉴定为锐顶镰孢菌F.acuminatum。该菌菌丝生长和孢子萌发的最适温度为25℃;最适生长碳源为葡萄糖和蔗糖,最适生长氮源为硝酸钠、硝酸钾和尿素;其对大豆合丰47的致病力较弱,发病植株的株高、根长和鲜重较空白对照显著降低了22.8%、12.2%和26.7%。在16种常用杀菌剂中,98%咯菌腈对锐顶镰孢菌的抑制效果最好,EC50为0.014μg/mL,99%腐霉利的抑制效果较差,EC50为11.630μg/mL。表明生产中可利用咯菌腈等效果较好的杀菌剂防治由锐顶镰孢菌引起的大豆根腐病。

锐顶镰孢致病性及苜蓿品种间的抗病性研究

为了探明锐顶镰孢菌对接种后苜蓿种苗的致病性,本研究采用菌饼接种法,将分离自4个地点的15个锐顶镰孢菌株接种于14个紫花苜蓿品种的种子上,接种后14 d测定相对根长、苗高、发芽率,并计算病情指数。结果表明,参试的15个菌株均显著降低了苜蓿种苗的根长(P<0.05)。总体来看,各菌株之间的致病性有所不同,从苜蓿品种WL-323HQ中分离出来的5号菌株的致病性最强,从WL-525HQ中分离出来的13号菌株的致病性最弱,从WL-525HQ、Legacy、Affinity和M illionaire中分离出来的12号、10号、8号和6号菌株的致病性较强,从Aohan、Farmers、WL-323M L和Dingdian中分离出来的1号、4号、7号和9号菌株的致病性较弱;参试的14个苜蓿品种之间的抗病性也各不相同,Amerimultileaf的抗病性最强,Amerileaf721、Victoria、Powerplant和Legacy的抗病性较强,Sandy、Phabulous、Hunter river和Alfaking的抗病性较弱,Vernal的抗病性最弱。

越橘镰孢果腐病菌的生物学特性测定及防治药剂初步筛选

对新发现的越橘镰孢果腐病菌(Fusarium acuminatum)的生物学特性及药剂防治进行了研究。结果表明:病菌菌丝生长最适培养基为PSA培养基,产孢最适培养基为OA培养基,菌丝生长最适温度为20℃,产孢最适温度为21℃;菌丝生长和产孢的最佳碳源分别为麦芽糖和羧甲基纤维素钠,最佳氮源分别为酵母粉和尿素;pH 5~6适宜菌丝生长,pH 6产孢最佳;全黑暗条件有利于菌丝生长,但全光照有利于产孢;菌丝致死温度为51℃(10 min),分生孢子致死温度为67℃(10 min)。病菌生长因素正交试验结果表明温度对病菌生长的影响最大。采用生长速率法测定了病菌对21种杀菌剂的敏感性,结果表明:病菌对多粘类芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、咯菌腈、丙环·嘧菌酯和枯草芽孢杆菌的敏感性较高,其EC50<0.5000 mg·L^(-1)。防效试验结果表明,咯菌腈和多粘类芽孢杆菌处理越橘镰孢菌果腐病的发病率和病斑直径均明显小于对照,防效较好,能有效控制该病害的发生。

一株地黄叶枯病致病菌的鉴定及生物学特性研究

2019年在河南省温县地黄种植园发现一种地黄叶枯病。采集具有褐色病斑症状的地黄植株,从叶部感病部位分离、纯化出3株病原菌。通过对病原菌致病性测定、形态学典型特征观察以及ITS、EF1-α、Tub多基因序列分析,鉴定出3株病原菌,分别为层出镰刀菌Fusarium proliferatum、尖孢镰刀菌F.oxysporum和锐顶镰刀菌F.acuminatum,其中锐顶镰刀菌F.acuminatum尚未见有侵染地黄的报道,是地黄叶部病害的新型致病菌。为明确锐顶镰刀菌F.acuminatum的生物学特性,测定了光照、pH、温度、培养基、碳源和氮源在5 d的培养期内对病原菌菌丝生长速率的影响,并探究了菌丝生长的致死温度。研究结果表明,锐顶镰刀菌F.acuminatum菌丝在12 h光照/12 h黑暗条件下生长最好;在5~40℃均可生长,最适生长温度为25℃;在pH 4~11均可生长,最适生长pH 7.0;在多种培养基上均可生长,其中燕麦琼脂培养基上生长最快;对多种碳氮源均可利用,其中利用率最高碳源为可溶性淀粉,利用率最高氮源为硝酸钠;菌丝致死温度51℃,10 min。该研究结果可为锐顶镰刀菌F.acuminatum引起的地黄病害田间诊断和防治提供科学依据。

镉胁迫下深色有隔内生真菌对玉米生长和根际土壤养分的影响

为探究重金属胁迫下深色有隔内生真菌(Dark septate endophytes,DSE)对植物和土壤微环境的影响,设置3个水平土壤Cd质量浓度(0,5,10 mg/kg),选择6种DSE菌种(链格孢菌Alternaria terricola、尖镰孢菌Fusarium acuminatum、穗状弯孢菌Curvularia spicifera、高粱细基格孢菌Ulocladium sorghi、丛赤壳菌Neonectria radicicola和根异茎点霉菌Phoma radicina)进行玉米回接试验,以阐明Cd胁迫下DSE真菌对玉米生长、光合作用、抗氧化性,以及土壤pH、养分及酶活性的重要意义。结果表明:Cd胁迫下,6种DSE菌种均能定殖玉米根系。双因素方差分析结果表明,DSE与Cd胁迫及其交互作用显著影响玉米地径、叶绿素含量、丙二醛(MDA)、过氧化物酶(POD)、土壤pH和养分及酶活性(P<0.05)。当植物未受到Cd污染时,菌株U.sorghi(US)显著增加地下干质量和土壤有机质含量,降低MDA的积累和土壤速效磷含量。在5,10 mg/kg Cd质量浓度下,A.terricola(AT)显著增加玉米叶片数和地径;菌株P.radicina(PR)和N.radicicola(NR)显著提高植物地上干质量;AT、C.spicifera(CS)、F.acuminatum(FA)和US显著提高叶片中叶绿素含量和降低MDA在植物中的积累;AT降低了土壤速效磷含量;US显著提高土壤有机质含量并对土壤酸性磷酸酶和脲酶活性具有抑制作用(P<0.05)。Pearson相关性分析表明:土壤pH与地径和叶绿素含量显著正相关,有机质与植物谷胱甘肽显著负相关,速效磷与叶片数显著负相关(P<0.05)。方差分解表明:DSE菌种、Cd浓度和土壤因子共解释玉米生长和生理指标的42.1%和14.5%,其中DSE单独解释了27.4%和8.4%。随着Cd浓度升高,DSE显著促进植物生长,增加植物抵抗重金属能力,提高土壤养分可利用性,证明了在土壤Cd胁迫下DSE对植物生长和抗逆性有重要影响。