一株中华稻蝗内生真菌Fusarium lateritium ZMT01的代谢产物

研究一株中华稻蝗内生真菌Fusarium lateritium ZMT01的代谢产物,采用大米培养基发酵真菌,色谱技术分离纯化单体,波谱分析鉴定结构,共从发酵物中分离鉴定了10个化合物:fusopoltide A(1)、fusopoltide B(2)、fusopoltide D(3)、solaniol(4)、javanicin(5)、(1S,4S,10S)-3,4-dihydro-6,9-dihydroxy-8-methoxy-10(-2-oxopropyl)-1,4-methano-2-benzoxepin-5(1H)-one(6)、2,2′‐methylenebis(4‐methyl‐6‐tert‐butylphenol)(7)、2-hydroxymethyl-5-isopropoxy-4-methoxynaphthalen(8)、β-sitosterol(9)和walterolactone A(10)。其中化合物8、10为首次从Fusarium属中得到,除化合物9外,其他化合物为首次从Fusarium lateritium中分离到。采用二倍稀释法测试抗菌活性,结果显示化合物4和5对O6血清型大肠杆菌Escherichia coli有强抑制活性,MIC为6.25μg/mL,化合物4对尖孢镰孢菌Fusarium oxysporum显示中等抑菌活性,MIC为200μg/mL。

东北红豆杉内生真菌Fusarium tricinctum J8的鉴定及抗菌活性研究

目的:从东北红豆杉内生真菌中筛选出一株对常见致病细菌具有广谱拮抗活性的菌株。方法:以大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌4种常见致病细菌为指示菌,采用滤纸片扩散法筛选具有广谱抗菌活性的内生真菌,基于形态观察与系统发育分析对该菌株进行种属鉴定,利用高效液相色谱(HPLC)分析该菌株不同发酵时间次级代谢产物的代谢情况,通过超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS)分析该菌株可能产生的抗菌物质。结果:通过筛选获得一株广谱拮抗菌株J8,鉴定为三线镰刀菌(Fusarium tricinctum),根据HPLC色谱图对比,确定最佳培养时间为8天,通过mzCloud数据库比对分析其质谱数据,发现该菌株产生环(脯氨酸-亮氨酸)二肽、环(脯氨酸-苏氨酸)二肽、恩镰孢菌素B1、曲酸4种匹配度大于90%的抗菌物质。结论:从东北红豆杉中获得了一株对4种常见致病细菌均具有抑菌活性的菌株Fusarium tricinctum J8,为开发新型抗生素候选药物提供了菌种资源。

皱木耳白毛病病原菌的分离与鉴定

从皱木耳患白毛病的子实体中分离、纯化病原菌,经科赫法则验证,通过形态学观察病原菌的菌落形态特征,并采用ITS序列分析技术,确定了病原菌的分类地位。研究结果表明皱木耳白毛病的病原菌为层出镰刀菌,且该病原菌在皱木耳中首次报道。

雷公藤内生真菌对Fusarium nisikadoi NS-1雷公藤甲素合成的影响

为了解雷公藤内生真菌的雷公藤甲素合成能力以及内生真菌间互作对雷公藤甲素合成的影响,本试验从雷公藤中筛选出1株产雷公藤甲素的内生真菌NS-1,鉴定为Fusarium nisikadoi;通过NS-1与其它内生真菌共培养,发现青霉菌属(Penicilliumn)内生真菌NS-8能够显著促进NS-1的雷公藤甲素合成(P<0.05),是对照的1.6倍.以此为基础,通过制备和添加NS-8菌丝体提取物和发酵液诱导子,进一步研究内生真菌NS-8诱导子对NS-1雷公藤甲素合成的影响.结果表明,NS-8发酵液诱导子促进了NS-1的糖消耗速率,提高了NS-1生物量和培养液pH值,明显促进了NS-1胞外雷公藤甲素的积累,最高含量是对照的4.2倍;NS-8菌丝体提取物诱导子对培养液pH值的影响不显著,NS-1糖消耗速率略有下降,对NS-1生长有一定的抑制作用,胞外雷公藤甲素含量低于对照.两种诱导子对NS-1胞内雷公藤甲素合成均未呈现明显的促进作用.因此,NS-8主要通过其代谢产物强化NS-1雷公藤甲素的合成.

交流电场与Fusarium sp.A-2耦合对博落回修复铀污染土壤的强化作用

通过盆栽试验研究了交流电场(AC)与Fusarium sp.A-2(A-2)真菌耦合对博落回(P)的生物量、富集铀(U)性能、酶活性以及根际土壤中有机酸含量、生物可利用态铀、根际微生物群落结构的影响.结果表明,在铀(U)污染土壤中,与AC+P+U、A-2+P+U和P+U相比,AC+A-2+P+U组博落回的鲜重、株高、总干重分别升高了10.67%~45.76%、26.87%~92.02%和61.99%~159.98%;总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)含量分别提高了41.24%~133%和15.35%~63.63%;根际土壤中草酸显著增加了13.03%~157.09%;与A-2+P+U和P+U组相比,AC+A-2+P+U组土壤中生物可利用态铀分别提高了12.5%和28.57%.在AC+A-2+P+U组,植物根际土壤中存在大量的镰刀型菌(Fusarium)真菌属和酸杆菌属(Acidobacteria)等细菌菌属,且镰刀型菌属(Fusarium)占比最高,与AC+P+U、A-2+P+U、P+U和A-2+U组相比,Fusarium分别提高了16.67%、81.03%、299.23%和374.47%.AC和A-2耦合强化博落回修复铀污染土壤的可能机理包括AC提高了铀在土壤中的流动性,增加了植物根部与铀的接触,促进了铀的富集;AC刺激了博落回的生理活性,增大了博落回的生物量,提高了抗氧化酶活性,使博落回对铀的耐受性增强;AC刺激了A-2真菌和酸杆菌属(Acidobacteria)的生长,使其比例增大,从而产生大量的有机酸,与铀形成螯合物,降低了铀对植物的胁迫作用,提高了生物可利用态铀的占比,促进了博落回对铀的富集.AC与A-2真菌耦合对P修复铀污染土壤有显著的强化作用,是一种有潜在应用前景的强化方法.

鄂西北烟草根腐病病原菌的分离及鉴定

镰刀菌属引起的根腐病是烟草的重要病害,根腐病危害严重可导致烟草产品质量和产量出现重大损失。为明确鄂西北烟草根腐病病原,从湖北十堰烟区采集典型症状标本分离病原菌,对其进行了形态学和分子生物学鉴定,结合基因系统发育学分析和致病性验证,确定鄂西北烟草根腐病的病原为尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、木贼镰刀菌和接骨木镰刀菌。

棉花根际真菌中拮抗菌的筛选鉴定

为了筛选各品种棉花根际土壤中的拮抗真菌,探索其拮抗机制,以及测定其对棉花种子的安全性。本试验利用稀释平板法,从6个陆地棉品种(中棉所08、中棉所41、中植棉2、冀棉11、鲁棉研28和鲁棉研21)的根际土壤中分离出真菌;用拮抗培养的方法筛选出对赤霉病菌(Fusarium graminearum)F0609和大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)V1070有拮抗作用的真菌;用扫描电镜观察其抑制作用;用浸染法进行种子发芽试验。结果表明,从棉花根际土壤中分离出64株对赤霉病菌F0609具有抑制作用的真菌;筛选10株进行18S rDNA测序,挑选4株与大丽轮枝菌V1070对峙培养,其中黑曲霉(Aspergillus niger)An1对V1070的平均抑菌率达91%,棘孢木霉Tr1(Trichoderma asperellum)抑菌率为87%,高山被孢霉Mo1(Mortierella alpina)抑菌率为76%,层出镰孢霉Fu1(Fusarium laminum sp.)抑制率为70%;拮抗真菌黑曲霉An1能使大丽轮枝菌V1070菌丝破裂,产孢增多;黑曲霉An1对棉花种子发芽率和鲜重积累无明显影响。经筛选鉴定了10株赤霉病菌F0609的拮抗真菌,其中4株对大丽轮枝菌V1070拮抗作用较好,其中An1能使大丽轮枝菌菌丝破裂,且对棉花种子安全性无影响。

鸢尾内生真菌Fusarium oxysporum YW1的分离鉴定及其次生代谢产物的研究

为了鉴定鸢尾（Iris tectorum）内生真菌YW1菌株并研究其活性代谢产物,通过菌株形态和其rDNA的ITS序列分析,鉴定其为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）;运用薄层色谱、凝胶色谱和高效制备液相色谱方法从其代谢产物分离到5个生物碱类化合物,经质谱、核磁共振波谱技术鉴定为白僵菌素（1）,4-氧代-乙酰丙酸（2）,N-（4-氧代戊基）-乙酰胺（3）,5-丁基-2-吡啶羧酸（4）,5-丁烯-2-吡啶羧酸（5）.生物活性测定结果表明化合物1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有较强的抑菌活性.化合物1、4、5对HepG2和Hep3B细胞株具有一定的细胞毒活性,IC50值在65.3-120.5μg/mL.

长白红景天内生真菌Fusariums sp.HJT-P-5次级代谢产物研究

目的研究长白红景天植物内生真菌Fusarium sp. HJT-P-5次级代谢产物,以期得到结构新颖的先导化合物。方法采用硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱和高效液相色谱等方法进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据分析鉴定化合物的结构。结果内生真菌Fusarium sp. HJT-P-5次级代谢产物中分离得到7个化合物,分别鉴定为:Fusarnaphthoquinone A(Ⅰ),5-ydroxydihydrofusarubin A(Ⅱ),5-hydroxydihydrofusarubin C(Ⅲ),4a,10a-dihydrofusarubine(Ⅳ),3-acetoxy-4-deoxybostrycin(Ⅴ),Javanicin(Ⅵ),Fusarnaphthoquinone B(Ⅶ)。结论化合物Ⅰ～Ⅶ均为首次从红景天内生微生物中分离得到。

竹子内生真菌Fusarium oxysporum次级代谢产物的研究

[目的]对竹子内生真菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的次级代谢产物进行分离与鉴定。[方法]运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱技术对化合物的结构进行鉴定。[结果]从该菌的次级代谢产物中分离得到9个化合物,分别鉴定为1-(3, 4-二甲氧基苯基)-乙酮(1)、吲哚-3-乙酸乙酯(2)、吲哚-3-乙酸(3)、吲哚-3-乙酮(4)、吲哚-3-乙酸甲酯(5)、latifolicinin C(6)、白僵菌素(7)、1, 3-diamino-1, 3-dimethylurea(8)和2, 3-丁二醇(9)。[结论]除化合物3、7、9外,其余化合物均为首次从竹子内生真菌Fusarium oxysporum中分离得到。

<i>Bacillus subtilis Strains</i>with Antifungal Activity against the Phytopathogenic Fungi

Bacillus strains isolated from the rhizosphere soil of potato roots were evaluated for the potential antagonistic activity against fungal pathogens in vitro and in vivo. Two bacterial isolates were identified as new Bacillus subtilis strains by 16S rRNA and GyrB gene sequencing and were designated GM2 and GM5, respectively. Strains were characterized by their ability to inhibit growth of a number of phytopathogenic fungi. It was shown that GM5 strain inhibited growth of phytopathogenic fungi more effectively than GM2 strain. Both strains were capable of producing a number of hydrolytic enzymes as well as antimicrobial metabolites (ammonia and HCN). In addition, GM2 strain also produced siderophores. Four genes encoding antimicrobial peptides were identified in the genome of GM2 strain: ituC, bmyB, bacA and srfA. Genome of GM5 contained two genes encoding for antimicrobial peptides, srfA and fenD. Purified lipopeptide fraction from GM5 but not from GM2 strain was able to control Fusarium solani spread in the plate assay. Furthermore, Bacillus subtilis strain GM2 promoted growth of wheat but only GM5 strain was able to protect wheat seedlings from Fusarium oxysporum infection.

落葵薯内生真菌Fusarium graminearum TSQ-2化学成分研究

目的研究落葵薯内生真菌禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)TSQ-2的化学成分。方法利用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、Prep-HPLC等色谱方法对禾谷镰刀菌固体发酵物乙酸乙酯部位化学成分进行分离纯化,根据理化性质及现代波谱技术对单体化合物进行结构鉴定。初步评价化合物1~5对两种人类肿瘤细胞(SMMC-7721、HepG2)的体外细胞增殖抑制活性和对两种致病菌(MRSA、E.coil)的抗菌活性。结果从禾谷镰刀菌固体发酵物乙酸乙酯部位分离得到5个化合物,分别鉴定为zearalenone(1)、clavatustide C(2)、W493 C(3)、4,4,24-trimethyl cholesta-8,14,24(28)-trien-2α,3β,11α,12β,tetrol 12-acetate(4)和glycerolmonopalmitate(5)。活性实验结果显示化合物4对SMMC-7721、HepG2细胞增殖具有抑制活性(IC50值分别为23.1和24.2μmol·^(L-1))。结论共分离得到5个化合物,其中化合物2、5为首次从该属真菌中分离得到。

枯草芽孢杆菌Ya-1对辣椒枯萎病的防治及其对根际真菌群落的影响

探究生防菌枯草芽孢杆菌Ya-1对辣椒枯萎病的防治效果,及对辣椒受尖孢镰刀菌侵染后根际真菌群落和多样性的影响。以枯草芽孢杆菌Ya-1为接种菌,探究了枯草芽孢杆菌Ya-1对辣椒枯萎病的防治效果,并通过高通量测序研究了接种前,接种后10 d,20 d时受尖孢镰刀菌侵染后辣椒根际真菌群落变化。与FOC处理(C)相比,Ya-1+FOC(D)在第10天和第20天的相对防治效果分别为77.93%和77.26%。同时接种枯草芽孢杆菌Ya-1和辣椒枯萎病菌组真菌α多样性在10 d和20 d时真菌香农指数均高于接种辣椒枯萎病菌组。在进行处理后真菌群落组成发生了显著变化,同一时间点处理组和对照组真菌群落具有显著差异,接种辣椒枯萎病菌组和同时接种辣椒枯萎病菌和枯草芽孢杆菌Ya-1组也具有显著差异(P <0.05)。各处理土壤优势真菌种群分别为子囊菌门、接合菌门、担子菌门。在10 d和20 d,接种病原菌(OTU_1)相对丰度在接种辣椒枯萎病原菌组和同时接种辣椒枯萎病菌组和枯草芽孢杆菌Ya-1组间具有显著差异,相比较接种辣椒枯萎病原菌组,OTU_1相对丰度降低,被孢霉菌(Mortierella)的相对丰度升高。相比较对照组,接种辣椒枯萎病菌处理后连接数减少,而在加入枯草芽孢杆菌Ya-1处理后,正连接数降低。枯草芽孢杆菌Ya-1处理对辣椒枯萎病有较好的防治效果,同时它也改变了接种病原菌辣椒根际真菌群落多样性和结构,降低了真菌群落的复杂度和根际土壤中病原菌的丰度。

Isolation, Identification and Pharmacological Activities of Endophytic Fungi from <i>Aponogeton undulatus</i>Roxb.

The objective of this study is to isolate, identify and investigate the pharmacological activities of the endophytic fungi from an aquatic plant Aponogeton undulatus Roxb. (A. undulatus). Endophytic fungi were isolated and identified based on morphological characters. The molecular identification of the fungal isolates was performed using by analyzing the DNA sequence based on mega BLAST program. Spectrums of antibacterial and antifungal activities were studied by Agar diffusion methods. Extracts of the endophytic fungal strains isolated from the plant A. undulatus were screened for probable cytotoxic activities using brine shrimp lethality bioassay. Six endophytic fungi, namely AULE-1, AULE-2, AULE-3, AURE-1, AURE-3 and AURE-4 were isolated and purified from the leaves and roots of the plant such as strains AULE-1 as Trichooderma sp., AULE-2 as Carvularia sp. AULE-3 as Penicillium sp. strains AURE-1 and AURE-4 as Fusarium sp. and AURE-3 as Mucor sp. Strain AURE-4 was further identified as Fusarium solani. At 300 μg/disc concentration, six ethyl acetate extracts of endophytic fungi of the plant A. undulates showed moderate to significant activities against most of the test bacteria and pathogenic fungi. The strain AURE-4 exhibited strong cytotoxic activities (10.18 μg/mL) compared to the standard antitumor agent vincristine sulphate and this positive result suggests that fungal extracts may contain antitumor or pesticidal compounds. This is the first study to report the isolation, identification, antimicrobial and cytotoxic properties of endophytic fungi of Aponogeton undulatus Roxb. in Bangladesh.

木贼镰刀菌的鉴定及其对桃蚜的致病性测定

从罹病桃蚜虫尸上分离到了一株昆虫病原真菌,命名为JMF-01,本文旨在确定该菌株分类地位并探索其生防潜能。对罹病的桃蚜虫尸进行分离纯化,基于形态学观察和r DNA-ITS、RPB2、IGS序列分析,构建系统发育树对该菌株进行鉴定。采用浸叶浸虫法研究该菌株不同浓度条件下对桃蚜的致病力并进行温室防效测定。结果表明菌株JMF-01在PDA培养基上5 d后菌落直径58~60 mm,分生孢子镰刀形,3~7隔。菌株JMF-01对桃蚜具有较强致病力,处理桃蚜在7 d后累计校正死亡率和LC_(50)达到85%和9.87×10~5cfu/mL;孢子悬浮液最高浓度的温室防效在14 d时高于70%。该菌株的r DNA-ITS序列(MW404610)与木贼镰刀菌Fusarium equiseti(Gen Bank登录号:JF773657)相似度达100%,位于系统发育树的同一分支;RPB2、IGS序列分别与木贼镰刀菌(GenBank登录号:MK077112,KX583611)的相似度也达到99%以上,聚在系统发育树的同一分支。菌株JMF-01经鉴定为桃蚜的病原真菌木贼镰刀菌,具有生防潜力。

蕙兰‘红香妃’内生真菌分离鉴定及体外抑菌效应

【目的】从蕙兰‘红香妃’Cymbidium faberi‘Hongxiangfei’中筛选获得兰科Orchidaceae植物病害生防菌,为蕙兰菌根化栽培及绿色生物防治提供科学依据。【方法】通过蕙兰‘红香妃’健康根段培养、分离、纯化、鉴定内生真菌;以5株常见植物病原菌为指示菌,通过平板对峙培养法筛选出生物防治效果最优的内生真菌,并用活体接种法验证其抑菌效果。【结果】在蕙兰‘红香妃’健康植株根段培养中共分离筛选出6株内生真菌,经鉴定4株属于毛壳属Chaetomium spp.,1株属于镰刀属Fusarium spp.,另1株属于赛多孢属Scedosporium spp.。在平板对峙培养中发现:6株内生真菌对5株病原菌均具有一定的抑菌效果,其中Z2菌株腐皮镰刀菌Fusarium solani对兰花茎腐病致病菌——尖孢镰刀菌F.oxysporum的抑制效果明显,抑制率为67.51%;Z3菌株蝇生二叉毛壳菌Dichotomopilus funicola对兰花炭疽病致病菌——胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides的抑制率达68.56%。活体接种研究表明:经Z3菌株处理,春兰‘绿云’C.goeringii‘Green Cloud’的病叶率、病情指数极显著(P<0.01)低于对照。【结论】Z3菌株是筛选出的防治兰科植物病害的优势拮抗生物防治菌。

基于巢式PCR技术对玉米种子携带禾谷镰刀菌的检测体系

禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)是真菌性玉米茎基腐病的主要致病菌之一,为了减少种子带菌对该病害的传播,本研究采用巢式PCR技术构建玉米种子检测体系,并对其进行特异性、灵敏度和可行性检测。结果表明,该体系可有效检测到玉米(Zeamays)种子携带禾谷镰刀菌的情况,灵敏度达4.224 pg·μL^(-1),是一种快速、灵敏、特异性强的检测体系,为玉米茎基腐病种子带菌检测、早期诊断和及时防治提供技术支持和理论依据。本研究是运用巢式PCR技术检测玉米茎基腐病主要致病菌-禾谷镰刀菌在国内的首次报道。

辣椒根腐病生防菌的筛选鉴定及生防作用

为获得高效的辣椒根腐病生防菌,从健康辣椒根际土壤中分离出真菌菌株,通过与辣椒根腐病病原菌茄镰刀菌(Fusarium solani)进行对峙培养,筛选出对茄镰刀菌抑制率达到79.29%的生防菌株M20210527-2。结合形态学及ITS分子生物学分析,将菌株M20210527-2鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。菌株M20210527-2可通过重寄生、快速争夺生长空间以及分泌抗真菌代谢产物来高效抑制茄镰刀菌的生长。菌株M20210527-2处理对辣椒根腐病相对防效高达94.25%,可显著降低根腐病发病率和严重程度。培养条件研究表明,菌株M20210527-2最适生长温度为25℃,最佳pH为6~7,最适生长碳源为蔗糖、葡萄糖和淀粉,最适生长氮源为蛋白胨、酵母粉和牛肉膏。

防风根际真菌的分离鉴定及其生防潜力评价

作为世界性分布的镰刀属常见病原真菌,尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和木贼镰刀菌(F.equiseti)对包括经济作物及药用植物等的生长均有较大危害。利用源自于植物根际土壤的有益微生物防控尖孢镰刀菌和木贼镰刀菌引起的真菌性病害,是目前较为理想的植物病害管理策略。为获得可有效抑制尖孢镰刀菌和木贼镰刀菌的生防菌源,于防风根际土壤中分离纯化真菌104株,基于平板对峙法筛选获得1株对尖孢镰刀菌和木贼镰刀菌具有显著抑制效果的菌株MR-43,结合形态特征、ITS序列分析,将其确定为Sirastachys castanedae(GenBank登录号:OK287148.1),隶属于Sirastachys组进化分支,发现其可宿生于植物根际土壤。基于盆栽试验法,探究MR-43在防风栽培土壤中的定殖能力,评价MR-43对由尖孢镰刀菌引起的防风枯萎病和由木贼镰刀菌引起的防风根腐病的防病能力,及其对防风植株的促生能力。结果显示,Sirastachys castanedae MR-43对尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌的抑菌率为57%以上,且经多次验证抑菌效果稳定;菌株MR-43可稳定定殖于防风栽培土壤并实现有效扩繁;菌株MR-43的孢子悬液可有效控制防风枯萎病和防风根腐病,平均防效达68.52%,与多菌灵、代森锰锌的防病效果无显著性差异(P>0.05);此外,MR-43对防风植株生长具有明显促进作用。因此,Sirastachys castanedae MR-43在防风枯萎病、根腐病等真菌性病害管理方面具有较好的开发价值及应用潜力。

木醋液对植物病原真菌呼吸作用的影响

为探究木醋液在植物病害生物防治中的实际应用及对其病原真菌呼吸作用的影响,试验采用菌丝生长速率法测定其对7种植物病原真菌的抑菌活性,并研究其对供试敏感菌株黄色镰刀菌(Fusariumculmorum)的菌体三羧酸循环关键酶和能量代谢的影响。结果表明,木醋液对7种供试植物病原真菌均有一定的抑制效果,其中对供试敏感菌株黄色镰刀菌的抑菌作用表现最为显著,其EC50值为4.98μL/mL,在浓度5.5μL/mL时,木醋液对其孢子萌发和生物量抑制率分别达90.09%和95.22%;经木醋液处理后,黄色镰刀菌的呼吸速率受到抑制,琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活性降低,三磷酸腺苷含量降低,二磷酸腺苷和磷酸腺苷含量先升高后降低,能荷水平降低,表明木醋液抑制了黄色镰刀菌的呼吸代谢,阻碍了三羧酸循环的正常运行,干扰了其能量代谢,导致菌体细胞功能紊乱。初步探明,木醋液主要是通过破坏菌体呼吸代谢来实现其抑菌效果。