草莓根腐病生防芽孢杆菌的筛选鉴定与盆栽防效试验

为了获得草莓根腐病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的拮抗芽孢杆菌,对本实验室筛选保存的各类植物病原菌的拮抗芽孢杆菌进行初筛和复筛;对复筛获得的菌株进行形态特征、生理生化试验和16SrDNA序列分析,以确定其种属;采用盆栽试验检测了其生防效果。通过试验获得了一株对尖孢镰刀菌具有较好拮抗活性的芽孢杆菌菌株HD-5,并鉴定其为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),盆栽防治效果达到77.78%,具有较好的草莓根腐病防治潜力。

安徽省长丰县草莓根腐病病原的鉴定

对安徽省长丰县随机采集的20个草莓根腐病病样进行病原鉴定,结果分离获得12个菌株。根据培养特征和形态学鉴定,确定分离到的菌株均为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);选取真菌通用引物ITS1/ITS4对菌株基因组DNA进行PCR扩增并进行克隆和测序,通过与NCBI数据库序列比对,分子鉴定结果与形态学一致。将分离到的菌株回接到健康草莓幼苗上,2~3周后植株表现出与田间发病相似的症状,重新分离能够得到相同的病原物。基于形态学、分子生物学鉴定及致病性检测,最终确定安徽省长丰县草莓根腐病的病原菌为Fusarium oxysporum。

不同抗连作障碍品种草莓根系分泌物化感物质差异分析及其化感效应

以不同抗连作障碍品种‘土特拉’、‘丰香’和‘全明星’为试材,研究了三者根系分泌物中主要酚酸种类和含量的差异、接种镰刀菌后根际微生物的变化、根系分泌物对组培苗和尖孢镰刀菌的化感效应。结果表明:‘全明星’根系分泌物中对羟基苯甲酸和苯甲酸含量分别高达0.062 4mg/g DW和0.017 3mg/g DW,均明显高于‘土特拉’。根系分泌物对‘全明星’株高、根数和鲜重等均表现很强的抑制作用,化感效应指数均在0.50以上;但对‘土特拉’抑制作用最弱,低浓度分泌物能促进根系生长。‘全明星’根系分泌物对尖孢镰刀菌生长的抑制作用最小。接菌后‘全明星’根际细菌和放线菌数量均明显下降,真菌总量和尖孢镰刀菌数量上升;‘土特拉’根际各种微生物数量均呈上升趋势,变化率由高到低依次为尖孢镰刀菌、真菌总量、放线菌和细菌;‘丰香’根际微生物数量变化趋势与‘土特拉’相似,但各变化率均小于‘土特拉’。接菌后各品种根际微生物均由"细菌型"向"真菌型"转化,‘全明星’最明显,‘丰香’和‘土特拉’次之。

三株拮抗细菌的鉴定及抑菌作用研究

为了充分发掘和利用有益微生物资源,本文以草莓根腐尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum为靶标菌,从草莓根际土壤中分离筛选得到3株拮抗细菌,通过培养性状与形态特征、生理生化特征以及16S rDNA同源序列比对分析进行了鉴定,菌株1-9和9-4为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa、菌株12-4为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。这3株细菌对草莓根腐尖孢镰刀菌的抑菌作用进行了初步的研究,结果表明,3株拮抗细菌对草莓根腐尖孢镰刀菌的生长有很好的抑制作用,镜下观察对菌丝有致畸作用,其培养滤液还能够抑制草莓根腐病尖孢镰刀菌分生孢子的产生与萌发。

贝莱斯芽胞杆菌ZZBV-3的鉴定及其对草莓根腐病的防效

为获得草莓根腐病原菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的优良拮抗菌,以草莓种植基地的土壤为拮抗菌来源,通过室内测定不同菌株的抑菌活性,筛选抑菌率最高的菌株,在此基础上对所筛菌株进行分类鉴定,并评价其抑菌谱和防效。结果表明,从土壤中分离获得39株拮抗菌,筛选出3株对尖孢镰刀菌具有明显抑制作用的菌株。其中,菌株ZZBV−3的抑菌作用最强,抑菌圈直径为16.2 mm。经形态学及多基因(包括16S rDNA和gyrB基因)比对分析,确认菌株ZZBV−3为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。菌株ZZBV−3抑菌谱广,对多种植物病原菌均具有良好的抑菌效果。盆栽试验结果表明,菌株ZZBV−3对草莓“红颜”和“甜查理”品种的根腐病防效分别为77.96%和81.18%,生防应用前景良好。

镰刀菌引起的北京市草莓根腐病病原鉴定

对北京市昌平区采集的35个草莓根腐病病样进行病原鉴定,结果分离获得13个菌株,根据培养特征和形态学鉴定,确定分离到的菌株均为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);选取真菌通用引物ITS1/ITS4扩增菌株的rDNA-ITS序列并进行测序,通过与GenBank数据库序列比对,分子鉴定结果与形态学一致。将分离到的菌株回接到健康草莓幼苗上,植株表现出与田间发病相似的症状,重新分离能够得到相同的病原物。基于形态学、分子生物学鉴定及致病性检测,最终确定北京市昌平区草莓根腐病的病原菌为Fusarium oxysporum。

4种杀菌剂对天津地区草莓镰刀根腐病菌的室内毒力测定

本文采用菌丝生长速率法,测定4种杀菌剂对天津地区草莓镰刀根腐病菌的室内毒力。结果表明,咯菌腈、氟啶胺、多菌灵和啶氧菌酯对天津地区草莓根腐病菌菌株的EC50值范围分别为0. 020 5~5. 920 8μg/m L、0. 055 7~0. 556 0μg/m L、0. 064 3~4. 192 6μg/m L和3. 862 3~151. 273 9μg/m L,供试菌株对4种杀菌剂敏感性的地区性差异不明显,但同一地区不同菌株间的敏感性差异较大。

草莓镰刀型根腐病菌对4种杀菌剂的敏感性

采用菌丝生长速率法评价草莓镰刀型根腐病菌(Fusarium oxysporum)对4种常用杀菌剂的敏感性,为草莓根腐病的科学防治提供理论指导。结果显示:不同供试菌株对氰烯菌酯、苯醚甲环唑、吡唑醚菌酯和福美双的敏感性存在差异,其EC50值分别为0.0582~5.0350μg·mL^(-1),0.0385~5.0793μg·mL^(-1),1.5224~17.7860μg·mL^(-1),3.8211~17.2538μg·mL^(-1)。其中菌株WQ1对氰烯菌酯和WQ4对福美双的敏感性均最低,而WQ3对这2种杀菌剂最敏感;WQ7对苯醚甲环唑和WQ2对吡唑醚菌酯的敏感性均最低,而对苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯最敏感的菌株分别是WQ5和WQ1。系统聚类分析结果表明,供试菌株仅对福美双的敏感性存在明显的地区性差异。

引起草莓根腐病的镰刀菌种类鉴定

草莓(Fragaria×ananassa Duch)属于蔷薇科(Rosaceae)草莓属(Fragaria)的多年生常绿草本植物[1]。在园艺学中草莓被划归为浆果类果树,原产于南美洲,在世界范围内广泛种植[2]。草莓的栽培形式多为暖棚种植,其种植的区域较为固定,因此多发生连作现象,造成了土传病害的不断发生[3]。草莓根腐病是典型土传病害,1980年首次在日本报道,随后在中国、澳大利亚、荷兰等国家相继发生,造成了严重的经济损失[4]。

对羟基苯甲酸胁迫下尖孢镰刀菌侵染草莓根系的组织结构观察

以‘丰香’(Toyonoka)和‘土特拉’(Tutela)草莓品种为试材,利用石蜡切片技术研究了在自毒物质对羟基苯甲酸胁迫下,尖孢镰刀菌草莓专化型(Fusarium oxysporum f.sp.fragariae)侵染根系引起的组织结构变化。结果表明:对羟基苯甲酸胁迫下,尖孢镰刀菌菌丝在‘丰香’和‘土特拉’根系中的侵染速率明显加快,对根系表皮、皮层、中柱薄壁细胞及导管壁结构的破坏程度也明显加重,且对‘丰香’的破坏程度明显重于‘土特拉’。对羟基苯甲酸胁迫显著提高了‘丰香’和‘土特拉’根系组织含菌丝导管的比例,分别为22.5%和15.8%;但‘土特拉’根系含胶状物导管的比例为26.3%,明显高于‘丰香’(16.3%)。在对羟基苯甲酸胁迫下,‘土特拉’根系组织产生胶状物比‘丰香’早。‘土特拉’单独接菌处理根系内含有侵填体导管的比例为1.6%,明显高于‘丰香’单独接菌处理和对羟基苯甲酸胁迫下‘土特拉’接菌处理(1.0%和1.2%)。对羟基苯甲酸胁迫下接种尖孢镰刀菌可明显加重草莓根系组织受损程度,且‘丰香’枯萎病发生较重。