猕猴桃内生真菌Fusarium tricinctum化学成分研究

为研究猕猴桃内生真菌Fusarium tricinctum的固体发酵次级代谢产物及其抗菌活性,采用正/反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及HPLC制备等方法,从Fusarium tricinctum的大米发酵提取物中分离得到15个化合物.通过核磁共振、高分辨质谱以及文献调查等方法将化合物结构鉴定为:1H-indole-3-carboxaldehyde(1)、indole-3-acetic acid(2)、indole-3-acetic acid methyl ester(3)、nicotinic acid(4)、N-acetylanthranilic acid(5)、4-hydroxybenzaldehyde(6)、methyl 4-hydroxybenzeneacetate(7)、methyl p-hydroxyphenyl acetate(8)、methyl 4-hydroxy3-methoxyphenylacetate(9)、α-hydroxy-β-phenylpropionic acid(10)、methyl 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzeneacet ate(11)、3,4,5-trimethoxyphenylacetic acid methyl ester(12)、3,7,9-trihydroxy-1-methyl-6H-dibenzo[b,d]pyran-6-one(13)、enniatin B1(14)和enniatin A1(15).化合物14对丁香假单胞杆菌猕猴桃变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)有一定的抑制作用(MIC为25µg/mL).

东北红豆杉内生真菌Fusarium tricinctum J8的鉴定及抗菌活性研究

目的:从东北红豆杉内生真菌中筛选出一株对常见致病细菌具有广谱拮抗活性的菌株。方法:以大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌4种常见致病细菌为指示菌,采用滤纸片扩散法筛选具有广谱抗菌活性的内生真菌,基于形态观察与系统发育分析对该菌株进行种属鉴定,利用高效液相色谱(HPLC)分析该菌株不同发酵时间次级代谢产物的代谢情况,通过超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS)分析该菌株可能产生的抗菌物质。结果:通过筛选获得一株广谱拮抗菌株J8,鉴定为三线镰刀菌(Fusarium tricinctum),根据HPLC色谱图对比,确定最佳培养时间为8天,通过mzCloud数据库比对分析其质谱数据,发现该菌株产生环(脯氨酸-亮氨酸)二肽、环(脯氨酸-苏氨酸)二肽、恩镰孢菌素B1、曲酸4种匹配度大于90%的抗菌物质。结论:从东北红豆杉中获得了一株对4种常见致病细菌均具有抑菌活性的菌株Fusarium tricinctum J8,为开发新型抗生素候选药物提供了菌种资源。

黄连内生真菌Fusarium tricinctum发酵液化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、MPLC和(半)制备HPLC的方法对黄连内生真菌Fusarium tricinctum发酵液的乙酸乙酯萃取物进行研究,共分离得到10个化合物,通过波谱学数据分析并结合其物理性质,将其鉴定为:α-呋喃甲酸(1)、2-羟基-3-苯基丙酸(2)、3-乙基-2,5-二丙酸哌嗪(3)、环-(甘氨酸-L-脯氨酸)(4)、环-(L-4-羟基脯氨酸-L-亮氨酸)(5)、环-(苯丙氨酸-丙氨酸)(6)、环-(L-4-羟基脯氨酸-D-苯丙氨酸)(7)、环-(L-4-羟基脯氨酸-L-苯丙氨酸)(8)、(22E,24R)-7,22-二烯-3β,5α,6β-麦角三醇(9)、(24S)-5α,6α-epoxyergosta-7,22-dien-3β,9α-diol(10).以上化合物均首次从F.tricinctum中分离得到.

Two New Alkaloids from Fusarium tricinctum SYPF 7082,an Endophyte from the Root of Panax notoginseng

Panax notoginseng(Araliaceae)is a famous traditional Chinese medicine mainly cultivated in Yunnan and Guangxi provinces of China.Two new alkaloids,rigidiusculamide E(1)and[-(a-oxyisohexanoyl-N-methyl-leucyl)2-](2),together with two known ones,(-)-oxysporidinone(3)and(-)-4,60-anhydrooxysporidinone(4)were isolated from the mycelia culture of Fusarium tricinctum SYPF 7082,an endophytic fungus obtained from the healthy root of P.notoginseng.Their structures were determined on the basis of extensive spectroscopic analyses.Compounds 1-4 were tested for their inhibitory effects against NO production on Murine macrophage cell line,and the new compound 2 showed significant inhibitory activity on NO production with the IC_(50)value of 18.10±0.16μM.

宁前胡内生真菌Fusarium tricinctum次生代谢产物研究

为研究宁前胡内生真菌Fusariumtricinctum次生代谢产物,采用液体发酵法发酵内生真菌,利用硅胶、凝胶、MPLC、制备液相等多种方法分离获得13个单体化合物。利用波谱方法分别鉴定为cyclo-(L-pro-L-pro)(1)、cyclo-(S-pro-S-leu)(2)、cyclo-(L-phe-L-phe)(3)、cyclo-(D-pro-L-phe)(4)、cyclo-(L-pro-L-phe)(5)、cyclo-(D-pro-L-leu)(6)、cyclo-(S-pro-S-leu)(7)、cyclo-[D-(4-hydroxyprolinyl)]-(L)-leucine(8)、cyclo-[L-(4-hydroxyprolinyl)]-(L)-leucine(9)、cyclo-(trans-4-hydroxy-L-prolyl-L-phenylalanine)(10)、cyclo-(D-cis-hyp-L-phe)(11)、苯甲酸苄酯(12)和苯乙酸(13),所有化合物均首次从内生真菌F.tricinctum中分离得到。体外抗肿瘤活性显示,化合物4、6、7对CAR、CAL27、SCC-4、SCC-9、HSC-3五种口腔癌肿瘤细胞有一定的细胞毒活性。

川芎内生菌Fusarium tricinctum的四个新吡喃-2-酮类成分

采用硅胶、凝胶等柱色谱及反相碳十八制备液相色谱及手性拆分从川芎内生菌Fusariumtricinctum的糙米培养基中分离得到四个具有相同平面结构的2-吡喃酮类化合物,并采用改良的Snatzke法对其绝对构型进行鉴定.

川芎内生菌Fusarium tricinctum的化学成分

采用糙米培养基对川芎内生菌Fusarium tricinctum菌种进行扩大培养,利用萃取、柱色谱、制备色谱等手段对其化学成分进行分离纯化,并通过NMR、ESI-MS等波谱手段对所得化合物进行结构鉴定;采用MTT法对部分化合物进行细胞毒活性测定.共分离得到13个化合物,分别鉴定为苯乙酸(1),3,6-二异丙基-1-甲基哌嗪-2,5-二酮(2),fusarpyroneA(3),fusagerinB(4),N-苯乙基乙酰胺(5),fungerin(6),callyspongidipeptideA(7),环-(S-脯氨酸-R-亮氨酸)(8),vomifolilol(9),环-(4-S-羟基-R-脯氨酸-R-异亮氨酸)(10),N-acetyl-β-oxotryptamine(11),烟酸(12),邻羟基苯乙酸(13).化合物6对OCI-LY10、HT29、MV4-11、Hela、SKOV3具有一定的抑制作用,IC50值分别为23.98±2.37、93.63±1.42、90.64±1.65、77.65±1.35、52.52±2.04μmol/L.上述结果可为该菌种的肿瘤细胞毒活性开发提供一定的研究依据.(表1参28)

川贝母内生真菌Fusarium tricinctum CBY11抗氧化活性及代谢成分研究

结合形态特征和分子生物学方法,将一株分离自川贝母鳞茎的内生真菌CBY11鉴定为Fusarium tricinctum。分别研究其发酵液石油醚提取物(PEE)、乙酸乙酯提取物(EAE)、正丁醇提取物(BAE)和乙醇提取物(ETE)的DPPH自由基清除活性、总抗氧化活性(以ABTS法测定)和总还原力(FRAP法测定),以及其总多酚含量(TPC)、总黄酮含量(TFC)和总皂苷(TSC)含量。结果发现EAE、BAE和ETE均具有较强的DPPH自由基清除活性(IC50分别为1.95mg/m L、1.19mg/m L、1.64mg/m L)和总抗氧化活性(IC50分别为0.43mg/m L、0.58mg/m L、0.43mg/m L),但总还原能力相对较弱;PEE的抗氧化活性整体较低。此外,EAE、BAE和ETE的TPC、TFC及TSC显著高于PEE(P<0.05)。可见TPC、TFC及TSC与抗氧化活性呈现出一定的正相关性。HPLC分析表明EAE含有多种具有较强抗氧化活性的酚酸等物质,如芹菜素。GC/MS分析表明PEE中含有少量抗氧化酚类物质,最主要成分是烷烯烃类。本研究表明川贝母内生真菌CBY11具有产生丰富抗氧化活性成分的能力,具有多种利用价值。

产苦马豆素真菌的筛选与鉴定

为探明青海及内蒙古多种疯草类植物及其根际土壤中是否存在产生苦马豆素的真菌,并对其种属进行鉴定,同时测定其苦马豆素产率。本试验拟对采自内蒙古和青海的疯草样品中的内生真菌及根际土壤真菌进行分离;应用薄层色谱和气相色谱法分别检测菌丝及发酵液中苦马豆素含量,筛选可产生苦马豆素的真菌;运用形态学和分子生物学方法对其属种进行鉴定。从青海采集的疯草样品中分离并筛选出2株可产苦马豆素真菌,一株为土壤真菌,一株为内生真菌,分别命名为FS-5和EFG-7;菌丝中苦马豆素含量分别为0.773和0.11 mg.g-1,结合形态学和分子生物学试验结果,确定这2株真菌分别为裂褶菌属真菌和镰孢菌(霉)属三线镰刀菌。结果显示,我国青海疯草及根际土壤中存在可产生苦马豆素的真菌。

云杉木质素高降解的菌株筛选

以新疆南山、库尔德宁等地区感染白腐病的雪岭云杉为材料,从中分离得到4株具有木质素降解能力的真菌,并确定其分类学地位,初步研究菌株对木质素的降解能力。通过含有0.04%愈创木酚的马铃薯培养基进行初筛,含有1%的苯胺蓝的马铃薯培养基进行复筛,扫描电镜观察法及称重法对木质素降解能力进行初步测定,得到2-A、1-G、2-B、3-E四种菌,对木质素降解率分别为5.82%、6.23%、3.80%、5.14%。18S r DNA序列分析确定2-A在分类学上属于葡萄座腔菌目,葡萄座腔菌科,微壳色单隔孢属(Microdiplodia sp.); 1-G为三隔镰孢菌(Fusarium tricinctum),镰孢菌属(Fusarium)。

三线镰刀菌M-20液体培养的产毒性

研究了三线镰刀菌M-20液体培养的产毒性。该菌株接种于PSC、GMG和SPM 3种液体培养基,放置在19℃和8℃下静止培养24d后,比较菌丝生长特性、抑制豌豆种子萌发和高效液相色谱鉴定产毒性。结果表明,以葡萄糖、黄豆粉和玉米浆为碳、氮源的GMG培养基中菌丝生长最好,生物毒性强,能检出T-2毒素。M-20菌株具有低温产毒的特性。

苜蓿根腐病病原菌的分离鉴定及苜蓿品种的抗性评价

苜蓿根腐病病原菌较为复杂,因此明确不同生态环境下苜蓿根腐病病原菌的种类和优势菌株,对于苜蓿根腐病的防治非常重要。利用柯赫氏法则对采自内蒙古三个不同地点苜蓿田中疑似根腐病的病样进行了分离和鉴定。结果表明,从供试病样中共分离得到6个不同种的镰刀菌:木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)、锐顶镰刀菌(F.acuminatum)、产黄色镰孢菌(F.thapsinum)、变红镰刀菌(F.incarnatum)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)。其中,木贼镰刀菌是上述三个供试地点苜蓿根腐病的优势致病菌。在室内条件下,利用优势菌株木贼镰刀菌以及三线镰刀菌对32个苜蓿品种的抗根腐病水平进行了评价,结果表明供试的品种间对根腐病的抗性水平呈现出一定的差异,其中品种康赛对两种不同的镰刀菌种表现出最高的抗性水平,其病情指数分别为26.07和26.81;按照抗性水平的划分标准,32份供试材料中对三线镰刀菌呈现中抗水平的品种18份,占供试品种的56.25%;表现为中感水平的品种14份,占43.75%,未见高感品种。对木贼镰刀菌而言,呈现中抗水平的苜蓿品种9份,占28.13%;呈现中感品种14份,占43.74%;呈现高感水平的苜蓿品种9份,占28.13%。本研究中未发现针对上述两种根腐病病原菌呈现免疫和高抗水平的苜蓿品种。

花椒流胶病病原鉴定及其生物学特性

【目的】分离鉴定甘肃陇南地区花椒流胶病病原菌,明确该病原菌的生物学的特性.【方法】采用形态学结合分子生物学的方法对花椒流胶病病原菌进行分离纯化及鉴定,确定造成花椒流胶病的主要病原菌;采用菌丝生长速率法,测定光照、pH、温度、不同培养基、碳源和氮源对病原菌生长的影响.【结果】造成花椒流胶病的主要致病菌为三线镰孢菌(Fusarium tricinctum)和小穴壳菌属(Dothiorella sp.).三线镰孢菌在黑暗条件下有利于菌丝生长,适宜pH值为6～8,生长最适温度为25℃,最适培养基为PDA培养基,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为硝酸钠;小穴壳菌属在光暗交替条件下有利于菌丝生长,适宜pH为6～8,生长最适温度为25℃,最适培养基为PSA培养基,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为硝酸钠.【结论】花椒流胶病病原菌具有碳氮源营养来源广泛,适宜偏碱环境生长,耐高温的生物学特性,为花椒流胶病的防治研究奠定了初步的基础.

不同杀菌剂对花椒流胶病菌的室内毒力测定

【目的】筛选防治花椒流胶病的高效低毒杀菌剂,缓解和控制病菌对药剂的抗性.【方法】采用菌丝生长速率法,在室内离体条件下测定了6种杀菌剂对花椒流胶病主要病原真菌——三线镰孢菌(Fusarium tricinctum)和小穴壳菌属(Dothiorellasp.)的抑菌效果.【结果】6种杀菌剂对三线镰孢菌和小穴壳菌属均表现一定的抑制作用,其中以多菌灵对两种供试菌种的毒力最强,其对三线镰孢菌和小穴壳菌属的EC50值分别为0.144 6g/L和0.568 0g/L,烯酰·福美双次之,硫磺·三唑酮对两种供试菌种的抑菌效果不好,其中三线镰孢菌对其最不敏感,EC50值为10.249 4g/L.【结论】多菌灵、烯酰·福美双对三线镰孢菌和小穴壳菌属均有很好的抑菌效果,可作为防治花椒流胶病的高效低毒杀菌剂进一步在田间试验推广.

5种杀菌剂对马铃薯干腐病菌的室内毒力测定

为筛选出防控马铃薯干腐病高效低毒的化学药剂,采用菌丝生长速率法,选用50%硫磺·多菌灵(WP)、60%唑醚·代森联(WG)、60 g/L戊唑醇(SC)、80%多菌灵(WP)和80%代森锰锌(WP)对马铃薯干腐病菌三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)进行抑菌率和室内毒力测定,探究不同种类干腐病菌对不同杀菌剂的敏感性。结果表明:5种药剂对3种病原菌表现出不同程度的抑制作用,60 g/L戊唑醇和60%唑醚·代森联对三线镰刀菌毒力最强,EC 50分别为5.01、7.24 mg/L;60 g/L戊唑醇和50%硫磺·多菌灵对尖孢镰刀菌毒力最强,EC 50分别为5.75、50.11 mg/L;60 g/L戊唑醇和50%硫磺·多菌灵对木贼镰刀菌毒力最强,EC 50分别为2.40、28.84 mg/L。综上所述,60 g/L戊唑醇的毒力较强,且在稀释500~1000倍时对3种病原菌的抑制率也较高,表现出较强的抑制作用。

天祝高寒草地三线镰孢的分离鉴定及β-tubulin基因序列分析

按30 m的梯度将海拔2 880～3 360 m分为16个采样点,在同一海拔高度按照"Z"字形取样,共取5个点,对16个采样点的土样混匀后以根残体分离法在镰刀菌选择性培养基上进行分离,对分离得到的镰刀菌菌落进行纯化和单孢分离后,以形态学为基础,参照Nelson分类系统进行鉴定.结果表明:在分离到的212个镰刀菌菌株中,有5个菌株为三线镰孢(Fusarium tricinctum).随机选取2株三线镰孢菌株进行β-tubulin基因序列分析,将PCR产物回收测序后在Genbank上比对,菌株TZh-4-3-7和TZh-11-5-2与GenBank上登记的6个新西兰菌株的亲缘关系最近,同源性达96%.利用DNAStar软件绘制其系统发育树状图,结果显示,菌株TZh-4-3-7和TZh-11-5-2与以上6个F.tricinctum菌株均位于系统发育树的同一分支,聚为一类.本研究采用的β-tubulin基因序列分析结果验证了利用形态学鉴定镰刀菌的准确性;将β-tubulin基因序列分析应用于三线镰孢的鉴定中,拓宽了鉴定途径,提高了鉴定的准确性;并了解了三线镰孢在天祝高寒草原不同海拔高度的分布,丰富了我国草原镰刀菌资源库,为进一步探讨镰刀菌与草原退化的关系奠定了基础.