小麦赤霉病禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)产碱性蛋白酶的发酵条件

小麦赤霉病是全球毁灭性作物病害之一。禾谷镰刀菌产生碱性蛋白酶与侵染麦粒有关,纯化碱性蛋白酶对研究真菌降解谷物蛋白有重要作用。本研究探讨了培养基及发酵条件对禾谷镰刀菌菌株F15产碱性蛋白酶的影响。试验结果表明,优化的禾谷镰刀菌产碱性蛋白酶的液体发酵条件为:培养基含葡萄糖3.000%、蛋白胨2.000%、麸皮2.500%、KH2PO40.100%、KC l 0.200%、ZnSO40.001%、CaC l20.001%;培养条件为:初始pH9、接种量8%、种龄60 h,在120 r/m in下28℃振荡培养84 h,碱性蛋白酶活力达534.2 U/m l。

禾谷镰孢菌对氰烯菌酯敏感性基线的建立

采用菌丝生长速率法测定了氰烯菌酯(2-氰基-3-氨基-3-苯基内烯酸乙酯JS399-19)对上海郊区禾谷镰孢菌(Fusarium gramineatum)分离菌的有效中浓度(EC50),并由此建立该药剂的敏感性基线。氰烯菌酯对上述分离菌均具有很强的抑制作用,其EC50值的范围在0.098 0~0.504 1μg/mL之间,平均值为0.258 9±0.055 1μg/mL;其敏感基线呈单锋曲线,接近正态分布。各分离菌株之间对该杀菌剂的敏感性差异较小,且并不因用药年份不同而有明显的差异。氰烯菌酯对禾谷镰孢菌的多菌灵敏感型菌株和抗药型菌株也均具有极强的抑制作用。这表明该药剂在发生多菌灵抗药性的地区可以大面积推广应用,以减少赤霉病的发生。本研究结果对于今后监测上海郊区禾谷镰孢菌群体对氰烯菌酯敏感性的动态变化,制定该药剂合理使用策略具有重要的指导意义。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速分离纯化及其抗体制备

采用高速逆流色谱法结合高效液相色谱法从禾谷镰刀菌固体发酵产物中分离纯化脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。先用高速逆流色谱在以乙酸乙酯-水(1∶1,体积比)为两相溶剂系统、温度为25℃、主机转速为890r·min-1、流速为1.0mL·min-1、检测波长为254nm的条件下进行分离,再用高效液相色谱进一步分离纯化,最终从300g大米发酵培养物中得到了8mg DON,纯度为97.7%。将纯化的DON用于DON人工抗原制备,基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱分析表明,人工抗原制备成功;免疫动物后,研制出了高效价的多克隆抗体。本研究建立的色谱方法操作简单,分离效果较好,纯化的DON可以用于抗体的制备。