旋毛虫p49抗原相关抗体的快速检测

目的 建立旋毛虫病的快速检测技术。方法 基因工程抗原包被有色乳胶颗粒，抗抗体包被磁性颗粒，在抗体存在下形成抗原－ 乳胶－ 抗体－ 抗抗体－ 磁性颗粒的复合场，在磁场作用下沉淀下来，从而达到快速检测旋毛虫相关抗体的目的。结果 １９ 份人工感染鼠血清、５ 份人工感染猪血清、３ 份旋毛虫病猪血清、４ 份病人血清均呈阳性反应，而对照血清均为阴性反应；该方法在鼠感染旋毛虫后第五天可测出ＩｇＭ 抗体，第九天可测出ＩｇＧ抗体。结论 本检测技术简便易行，不需专用设备，可望成为一种快速诊断旋毛虫病的有效方法。

迁移侵袭抑制蛋白MIIP基因K167E位点突变体的构建和表达

目的构建人迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)蛋白K167E突变体的原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP(K167E)并进行表达和纯化,为MIIP的后续功能研究提供有效工具。方法以pGEX-4T-1-MIIP重组质粒为模板,PCR扩增得到人MIIP基因(K167E)突变体的cDNA全长,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中诱导表达,纯化获得GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结果酶切鉴定和测序结果显示,pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体构建成功。经诱导表达及纯化后,成功获得的GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结论成功构建了pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体,并获得了GST-MIIP(K167E)融合蛋白。

GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化

应用PCR方法扩增talin1的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST-talin1融合蛋白,为下阶段深入的研究talin1的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础。经酶切、序列鉴定,选择正确重组子,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用G lutath ione Sepharose 4B柱纯化,western b lot鉴定。克隆得到了一个2400bp的talin1的cDNA片断,重组质粒目的DNA测序正确,纯化出分子量约为121.6kD的融合蛋白。用基因工程方法使GST-talin1重组质粒在原核细胞表达并成功纯化出GST-talin1融合蛋白。