鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片段的三维结构模建

用Ｂｉｏｓｙｍ公司开发的计算机辅助分子设计系统模建了鼠抗人纤维蛋白抗体Ｆｖ片段的三维结构。Ｆｖ是由重链可变区（Ｖｈ）和轻链可变区（Ｖｌ）两个结构域组成的具有抗原结合能力的最小抗体片段。先分别模建了Ｖｈ和Ｖｌ两个结构域，然后搭建出Ｆｖ片段的整体三维结构，并对模建的结构进行了分子力学和动力学优化。对结构的合理性验证显示模建结构是合理的。本研究为鼠抗人纤维蛋白抗体Ｆｖ片段的人源化的分子设计打下了基础。

具有GPX活力的抗体片段Fv的制备和性质

具有谷胱甘肽 ( GSH)结合部位的鼠抗体 3 H4 ( Ig M)经胃蛋白酶水解 ,产生分子量为 2 50 0 0的抗体 Fv片段 ,用荧光滴定法测定了它与 GSH的亲和常数 Ka=1 .1 7× 1 0 7L/ mol.该片段经苯甲基磺酰氟活化 ,再经Na HSe作用 ,其结合部位的丝氨酸被突变为谷胱甘肽过氧化物酶 ( GPX)的催化基团硒代半胱氨酸 .突变后的 Fv片段表现出很高的 GPX活性 ,其活力高达 2 50 0 U/μmol,称为 Fv抗体酶 .动力学分析表明 ,Fv酶的最适温度为 55℃ ,最适 p H为 7.0 ,催化机制为乒乓机制 ,米氏常数分别为 :Km( GSH) =4 .1 6× 1 0 - 3mol/ L,Km( H2 O2 ) =2 .8× 1 0 - 4 mol/

Fv及其衍生物重组基因的构建

利用蛋白酶解法从完整抗体制备 Fv 片段是个费时费力的繁琐过程,且对于多种McAb 的 Fv 片段制备是不成功的。利用 PCR 方法,从抗体产生细胞中获得可变区基因,并利用基因工程技术,构建不同的目的基因:重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)相连构成 Fv,VH 和VL 连入一基因编码的连接肽(Linker)构成 scFv,两个 scFv 相连构成双价 scFv,两种功能 scFv相连构成双功能 scFv 等。本文就 Fv 抗体及其衍生物基因的体外构建作一综述。

转铁蛋白介导的单克隆抗体治疗胶质瘤动物模型

目的观察转铁蛋白受体单链抗体Fv片段介导的Survivin-siRNA治疗胶质瘤动物模型的效果。方法构建雌性裸鼠的胶质瘤动物模型,设计Survivin-siRNA,构建Survivin-siRNA质粒,构建单链Fv片段抗体-转铁蛋白,将单链抗体-转铁蛋白(scFV)与Survivin-siRNA结合。实验分为对照组、单纯质粒组、对照基因质粒组(Si-M组),Survivin-siRNA质粒组(SiS组),单链抗体Fv片段-转铁蛋白组(scFV组),转铁蛋白受体单链抗体Fv片段Survivin-siRNA组(Si-S-P-scFv组)。分别观察各组裸鼠脑内Survivin蛋白表达与各组裸鼠生存时间。结果小鼠Survivin蛋白表达,Si-S组受到轻度抑制,Si-S-P-scFv组受抑制较强(P<0.01)。小鼠生存时间,Si-S组高于对照组(P=0.02);与对照组和Si-S组比较,Si-SP-scFv组小鼠生存时间最长(分别为P<0.001,P=0.018)。结论转铁蛋白受体单链抗体Fv片段介导的Survivin-siRNA可较理想通过胶质瘤动物模型的血-脑脊液屏障,能明显延长实验动物生存时间。