GPR40反义RNA对胰岛β细胞内Ca^(2+)浓度及胰岛素分泌的影响

目的应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化。结果与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P<0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P<0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P<0.05)。结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌。

GPR120和GPR40表达与卵巢癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨G蛋白偶联受体(GPR)120与GPR40在卵巢癌中的表达及其作为预后分子标志物的临床价值。方法通过免疫组织化学染色检测128例卵巢癌患者的石蜡包埋样本中GPR120与GPR40表达。分析GPR120、GPR40表达与卵巢癌临床病理特征之间的关系,采用Kaplan-Meier法绘制高表达和低表达GPR120、GPR40患者的生存曲线,Cox风险回归模型分析卵巢癌患者无病生存(DFS)率的影响因素。结果卵巢癌患者GPR120与GPR40阳性表达率分别为62.5%(80/128)和56.3%(72/128)。FIGOⅡ—Ⅲ期和组织学G3级患者的GPR120和GPR40高表达率分别高于FIGOⅠ期与组织学G1—G2级。生存分析表明,GPR120高表达者的4年DFS较低表达者下降(56.9%vs.70.7%,Log-rankχ^(2)=5.144,P=0.023)。此外,GPR40高表达者的DFS率亦低于低表达组(57.7%vs.68.4%,Log-rankχ^(2)=4.491,P=0.034)。单、多变量Cox回归分析认定GPR120高表达、GPR40高表达、FIGO分期Ⅱ—Ⅲ期和术后残留灶≥1 cm是卵巢癌患者DFS的独立影响因素。结论GPR120与GPR40是预测卵巢癌侵袭性与不良预后的有效分子标志物,两者可能参与了卵巢癌的恶性转化与进展。

GPR40在相关疾病中调控功能的研究进展

G蛋白偶联受体40(G-protein coupled receptor 40,GPR40),也称为游离脂肪酸受体1(FFAR1),是一种能够被游离脂肪酸激活的具有7次跨膜受体蛋白,在体内能与生理浓度的游离脂肪酸相互作用,并被证明在不同器官病理生理过程中发挥重要调节作用.因此GPR40蛋白可能成为极具前景的疾病治疗靶点.该文通过对近年来GPR40蛋白在胰腺、大脑、肝脏等器官相关研究进行综述,着重叙述GPR40蛋白在相关器官中病理生理过程的调控功能与其作为药物靶点的研究新进展,旨在为GPR40蛋白的更深层次的研究提供理论基础.

G蛋白偶联受体40在游离脂肪酸影响小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用

目的:探讨G蛋白偶联受体40(GPR40)是否介导游离脂肪酸(FFAs)对小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡的影响及其可能机制。方法:观察棕榈酸、油酸(500μmol/L,48h)对NIT-1细胞凋亡的影响,用Hoechst33342染色、TUNEL及流式细胞仪检测凋亡。并利用siRNA技术抑制GPR40在NIT-1细胞表达,观察棕榈酸、油酸对GPR40表达抑制细胞脂性凋亡的影响,行Western blotting观察Bcl-2、Bax和p-c-Jun表达。结果:棕榈酸长期作用可诱导NIT-1细胞凋亡;而油酸可抑制棕榈酸对NIT-1细胞的诱导凋亡作用。抑制GPR40表达后,空转组、control siRNA、GPR40 siRNA转染细胞分别予棕榈酸孵育48h,3组间细胞凋亡率差异无显著;3组细胞分别予棕榈酸、油酸共孵育48h,GPR40 siRNA转染细胞凋亡率明显高于空转组细胞,差异显著(P<0.05),Western blotting显示这一过程伴随c-Jun磷酸化水平下降、Bcl-2、Bax表达无明显变化。结论:GPR40未参与饱和脂肪酸诱导的β细胞凋亡,而介导了不饱和脂肪酸对脂性凋亡的抑制作用,c-Jun可能参与这一过程。提示GPR40参与调节β细胞适应性,为探讨肥胖和T2DM的关系提供了新的线索。

G蛋白偶联受体40/游离脂肪酸受体1的研究进展

Free fatty acids(FFAs) provide an important energy source and also act as signaling molecules.Medium to long-chain free fatty acids can activate the intracellular signal pathways in the pancreatic β-cells and play a role in regulating insulin secretion as an extracellular signal molecular via binding to the FFA receptor G protein-coupled receptor 40(GPR40). Furthermore,GPR40 is associated with several biological effects including cell proliferation and antiapoptosis of nerve cells.GPR40 act an important role in the connection of obesity and diabetes or cancers.GPR40 will probably become a novel kind of antidiabetic and anticancer drugs.

G蛋白偶联受体40与胰岛素分泌的关系研究现状

G蛋白偶联受体40是中、长链游离脂肪酸的特异性受体,在脂肪酸对葡萄糖刺激胰岛素分泌的调节中具有重要作用。但GPR40是否参与了脂肪酸对胰岛β细胞的脂毒性作用,以及GPR40在胰岛β细胞内信号传导途径仍不是很清楚。GPR40激动剂可能成为治疗代谢性疾病的新靶点。

抑制G蛋白偶联受体40通过RhoA/ROCK1信号通路缓解小鼠过敏性哮喘

目的:探究抑制G蛋白偶联受体40(GPR40)减轻过敏性哮喘小鼠症状的作用及机制。方法:将28只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组(用卵清蛋白建立过敏性哮喘模型)、低剂量GPR40抑制剂DC260126干预组(3 mg/kg DC260126组)和高剂量DC260126干预组(10 mg/kg DC260126组),每组7只。通过小鼠肺功能仪检测各组小鼠气道高反应性;对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞分类并予以计数;肺组织切片进行HE染色评估炎症细胞浸润程度和炎症评分;Western blot检测肺组织中GPR40、GTP-RhoA和Rho相关激酶1(ROCK1)蛋白表达水平。结果:与哮喘模型组相比,10 mg/kg DC260126组小鼠气道阻力显著降低(P<0.05),BALF中的炎症细胞显著减少(P<0.05),肺组织嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润显著减少(P<0.01),肺组织中GTPRhoA和ROCK1蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论:抑制GPR40可能通过Rho/ROCK1信号通路减轻小鼠过敏性哮喘气道炎症和气道高反应性。

血清sLOX-1、Apelin-13、YKL-40水平对急性脑梗死患者早期神经功能恶化的预测效能

目的探讨血清可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、孤独G蛋白偶联受体配体-13(Apelin-13)、甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)水平对急性脑梗死(ACI)患者早期神经功能恶化(END)的预测效能。方法选取2021年4月至2024年5月安阳市人民医院收治的219例ACI患者进行前瞻性研究,根据住院期间是否发生END分为END组(n=48)、无END组(n=171)。比较两组基线资料及血清s LOX-1、Apelin-13、YKL-40水平,采用Pearson法、偏相关性系数分析END组血清各指标与△美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性、偏相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析各指标对END的预测价值,采用K-M生存曲线分析各指标表达水平对ACI预后的影响。结果END组患者入院时的NIHSS评分及血清sLOX-1、YKL-40水平分别为(12.96±4.20)分、(3.07±0.93)ng/mL、(119.38±25.76)μg/L,明显高于无END组的(9.17±3.00)分、(2.44±0.78)ng/mL、(87.52±19.43)μg/L,Apelin-1为(40.94±9.58)ng/mL,明显低于无END组的(48.63±12.31)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,血清sLOX-1、YKL-40水平与△NIHSS评分呈正相关性(r=0.679、0.730,P<0.001),Apelin-13与之呈负相关性(r=-0.814,P<0.001);偏相关性分析结果显示,血清s LOX-1、YKL-40水平仍与△NIHSS评分呈正相关性,Apelin-13仍与之呈负相关性(P<0.001);ROC分析结果显示,s LOX-1、Apelin-13、YKL-40联合预测END的曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.961),优于单独预测价值;以Cut-off值为界,K-M生存曲线显示,血清sLOX-1、YKL-40高水平亚组不良预后率分别为27.66%、30.77%,明显高于低水平亚组的4.80%、5.67%,Apelin-13高水平亚组不良预后率为8.41%,明显低于低水平亚组的20.54%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论sLOX-1、Apelin-13在急性ACI发生END患者血清中表达上调,YKL-40表达下调,且各指标水平均与预后相关,联合检测对END具有一定预测价值,可作为临床预测END、评估预后的辅助指标,并指导临床防治工作。

GPR40激动剂SZZ15-11对自发性2型糖尿病KKAy小鼠糖脂代谢紊乱的调控作用

G蛋白偶联受体40(G protein-coupled receptor 40,GPR40)是G蛋白偶联受体家族成员,对糖脂代谢有重要调控作用。本研究旨在考察新型GPR40激动剂SZZ15-11对自发性2型糖尿病KKAy小鼠糖脂代谢的影响,并探讨其潜在机制。将KKAy小鼠随机分为4组,一组以0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethylcellulose,CMC)灌胃为模型组(vehicle)、一组以TAK875(50 mg·kg^(-1))灌胃为阳性对照组(TAK),另两组分别以不同剂量SZZ15-11(50和100 mg·kg^(-1))灌胃为给药组(SZZ 50 mg·kg^(-1)和SZZ 100 mg·kg^(-1)),每天一次,共45天。于给药期间,检测空腹血糖、随机血糖、血甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)水平,进行口服葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验,同时通过酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠血胰岛素和胰高血糖素水平。实验结束后处死小鼠,取肝组织,测定TG和TC含量,用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝组织病理形态,通过Western blot和RT-PCR探讨肝组织脂代谢相关信号通路改变。实验经中国医学科学院药物研究所实验动物管理和使用委员会的审查批准。在人肝肿瘤细胞HepG2和TNFα诱导3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞模型,通过Western blot探讨SZZ15-11对胰岛素信号通路和脂联素表达的影响。结果显示,SZZ15-11不仅可降低KKAy小鼠的高血糖、高血脂,增强胰岛素敏感性,还可增加小鼠空腹血胰高血糖素水平,促进糖负荷后胰岛素分泌;能改善小鼠肝组织脂肪变性,保护肝功能;在肝组织中,可上调AMPKα磷酸化,使胆固醇代谢相关基因Abcg8表达增加;在肝细胞和胰岛素抵抗脂肪细胞模型,可增强胰岛素信号,明显减弱TNFα对脂联素表达的抑制作用。提示GPR40激动剂SZZ15-11能有效调控糖脂代谢紊乱,是一新型的、有潜力的抗糖尿病候选化合物。

GRP40介导游离脂肪酸对葡萄糖刺激的胰岛素分泌和β细胞内钙离子浓度的变化

目的探讨G蛋白耦联受体40（GPR40）是否介导游离脂肪酸（FFAs）短期、长期作用对小鼠胰岛NIT-1β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）及胞内钙离子浓度的影响。方法利用siRNA技术抑制GPR40在NIT-1细胞的表达，ELISA法检测棕榈酸、油酸短期（2h）、长期（48h）干预对NIT-1细胞GSIS的影响，激光共聚焦显微镜下观察GSIS过程中细胞内钙离子的变化。结果FFAs短期干预促进空转染组、对照siRNA转染组GSIS水平（P〈0．01），而对GPR40 siRNA组GSIS无明显影响，该组细胞GSIS水平明显低于空转染组和对照siRNA转染组（P〈0．01）。FFAs长期干预明显抑制空转染组、对照siRNA转染组细胞GSIS水平，对GPR40 siRNA组GSIS无明显影响。空转染组、对照siRNA组GSIS水平低于GPR40 siRNA组（P〈0．05）。激光共聚焦显微镜结果显示，在GSIS过程中，FFAs短期干预后，GPR40 siRNA组胞内钙离子浓度峰值明显低于对照siRNA组（棕榈酸：5．10vs7．02，油酸：4．27vs6．21，均P〈0．05）；而FFAs长期干预后，GPR40 siRNA组胞内钙离子浓度峰值明显高于对照siRNA组（棕榈酸：3．24vs1．21，油酸：2．83vs1．18，均P〈0．05）。结论GPR40介导FFAs对GSIS和胞内钙离子浓度变化的短期刺激和长期抑制作用。

新型G蛋白偶联受体40激动剂SZZ15-11的抗糖尿病作用及机制初探

目的探讨G蛋白偶联受体(GPR) 40激动剂SZZ15-11的抗糖尿病作用及机制。方法采用基于荧光素酶报告基因的转录激活检测方法考察化合物的GPR40激活作用;用小鼠原代胰岛评价化合物的促胰岛素分泌能力;用正常ICR小鼠单次给药,评价其对血糖、血胰岛素和胰高血糖素样肽-1分泌及胃排空的影响,采用自发2型糖尿病KKAy小鼠模型长期给药,评价其对血糖的影响。结果化合物SZZ15-11对GPR40激动的EC_(50)为1. 2μmol·L^(-1),在10μmol·L^(-1)浓度下可使高葡萄糖(16. 8 mmol·L^(-1))条件下原代胰岛的胰岛素分泌增加61. 1%(P <0. 05);单次给予该化合物(50 mg·kg^(-1))可显著降低正常ICR小鼠口服葡萄糖负荷后血糖的水平(P <0. 05),使血糖曲线下面积(AUC)下降13. 1%,使正常小鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加46. 6%(P <0. 05);此外还可显著延缓正常小鼠胃排空速率,使小鼠血清对乙酰氨基酚浓度-时间曲线下面积降低(P <0. 05);在50和100 mg·kg^(-1)剂量下,能使正常小鼠葡萄糖负荷后的血GLP-1水平增加(P <0. 05);自发性2型糖尿病KKAy小鼠连续灌胃(50和100 mg·kg^(-1)) 4周,其空腹血糖显著降低(P <0. 05),糖化血红蛋白水平降低(P <0. 01和P <0. 05)。结论新型GPR40激动剂SZZ15-11可葡萄糖依赖性地促进胰岛素和GLP-1分泌,从而改善2型糖尿病模型小鼠的糖代谢,是一个潜在的抗糖尿病候选药物,值得进一步研究。

长链游离脂肪酸调控代谢的受体通路研究进展

长链游离脂肪酸(LCFFA)是一类调节机体代谢的重要物质,既可进入细胞激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)等核受体,又可在细胞外作为配体激活G蛋白偶联受体(GPCR)(GPR40和GPR120)。无论是PPARs还是GPR40和GPR120,均在机体各种生理病理过程中发挥重要作用。通过激活相应受体通路,LCFFA调节脂肪、肝脏、骨骼肌、胃肠和胰腺等代谢关键组织器官的激素分泌和物质代谢等过程,实现摄食或饥饿等状态下代谢的协调整合。目前认为,LCFFA受体通路异常与一些代谢性疾病之间存在重要联系。因此,分析整理该通路及其中的重要分子可能为许多代谢性疾病的治疗提供新思路。

黄连温胆汤调控SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路干预2型糖尿病模型大鼠的作用机制

目的:基于SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路研究黄连温胆汤对2型糖尿病模型大鼠的干预机制。方法:选择SPF级SD雄性大鼠80只,先随机分10只为正常对照组,其余大鼠以高糖高脂乳剂10 mL/kg灌胃,监测血糖1次/w, 8 w后,腹腔注射STZ 35 mg/kg诱导2型糖尿病模型,5 d后选取空腹血糖值大于11.10 mmol/L造模成功的大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍0.25 g/kg组和黄连温胆汤3、6、12 g/kg组。各组灌胃给予相应的药物或生理盐水,1次/d,连续给药4 w后,取材检测。生化试剂检测大鼠葡萄糖耐量(OGTT)、血脂全套指标;气相色谱法测定大鼠结肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)含量;ELISA法检测大鼠结肠组织GLP1、PYY的含量;RT-qPCR法检测大鼠结肠组织G蛋白偶联受体41(Gpr41)、Gpr43、胰高血糖素样肽-1(Glp1)、肽YY(Pyy) mRNA的表达;Western blot法检测大鼠结肠组织GPR41、GLP1、PYY蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠OGTT试验中血糖含量明显升高,血脂中TC、TG、LDL-C、HbA1c含量显著升高,HDL-C含量显著下降(P<0.01);结肠内容物SCFAs中乙酸、丙酸、正丁酸的含量均显著下降(P<0.01);结肠组织GLP1、PYY含量显著降低,Gpr41、Gpr43、Glp1、Pyy mRNA和GPR41、GLP1、PYY蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,黄连温胆汤3、6、12 g/kg组和二甲双胍0.25 g/kg组大鼠OGTT血糖含量明显降低,血脂中TC、TG、LDL-C、HbA1c含量明显降低,HDL-C含量明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠内容物乙酸、丙酸、正丁酸的含量明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠组织GLP1、PYY含量明显升高,Gpr41、Gpr43、Glp1、Pyy mRNA和GPR41、GLP1、PYY蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:黄连温胆汤抗2型糖尿病作用机制可能与增加SCFAs,调控SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路,促进GLP1、PYY的分泌,降低体内血糖、血脂,改善机体胰岛素抵抗相关。

靶向G偶联蛋白受体87基因shRNA重组表达质粒的构建及鉴定

目的构建靶向G偶联蛋白受体(G protein-coupled receptor,GPR)87基因的shRNA重组表达质粒,并进行鉴定。方法根据NCBI基因数据库中的GPR87基因mRNA序列设计并合成3对靶向GPR87基因的shRNA,同时设阴性对照GPR87-HK序列,分别与线性化质粒pGenesil-1.1连接,构建靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒GPR87-1、GPR87-2、GPR87-3及GPR87-HK,在Lipofectamine 2000介导下,分别转染BIU87膀胱癌细胞,通过RTPCR和Western blot法检测各组细胞中GPR87基因mRNA转录和蛋白表达水平,并计算表达抑制率。结果 3种重组质粒经单酶切及测序鉴定,证明构建正确;转染BIU87膀胱癌细胞48 h后,镜下观察均可见绿色荧光;GPR87-1组、GPR87-2组和GPR87-3组细胞中GPR87基因和蛋白表达水平均显著低于GPR87-HK组(P<0.01),mRNA表达抑制率分别为76%、52%和50%,蛋白表达抑制率分别为90%、45%和41%。结论成功构建了靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒,为后续研究GPR87基因对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及耐药的影响奠定了基础。

新型抗2型糖尿病靶点药物的研究进展

糖尿病是一种血液中有异常高水平葡萄糖的慢性代谢性疾病,其中2型糖尿病患者高达90%。目前糖尿病的患病率在全球范围内持续上升,尤其是在发展中国家。对于糖尿病的治疗有多种药物,针对α-葡萄糖苷酶、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体、二肽基肽酶IV(DPP-4)和钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)等靶点的药物已经上市,同时一些新的靶点如G蛋白偶联受体119(GPR119)、蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)、胰高血糖素受体(GCGr)、G蛋白偶联受体40(GPR40)、糖原合成酶激酶3(GSK-3)、糖原磷酸化酶(GP)、11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)等也对开发抗糖尿病药物具有重要的价值。这些新靶点为抗糖尿病药物的研发提供了更多的方向,对治疗糖尿病具有重大的意义。