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GPS2对肝癌细胞系MHCC-97H增殖、迁移与侵袭的调控作用 被引量:1
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作者 刘爱霞 张浩 +2 位作者 孙杰 杨丽华 赵晓涛 《基础医学与临床》 2023年第12期1784-1791,共8页
目的探索G蛋白通路抑制因子2(G protein pathway suppressor 2,GPS2)对肝癌细胞增殖、迁移与侵袭的调控作用及分子机制。方法在肝细胞癌(HCC)细胞系MHCC-97H中,使用定量PCR或Western blot检测HCC细胞中GPS2等的表达水平;在HCC细胞中进... 目的探索G蛋白通路抑制因子2(G protein pathway suppressor 2,GPS2)对肝癌细胞增殖、迁移与侵袭的调控作用及分子机制。方法在肝细胞癌(HCC)细胞系MHCC-97H中,使用定量PCR或Western blot检测HCC细胞中GPS2等的表达水平;在HCC细胞中进行转染,分别使用GPS2的表达载体、GPS2基因的shRNA慢病毒载体在HCC细胞中对GPS2进行过表达或者敲低;同时采用克隆形成实验、划痕实验以及Transwell实验等检测GPS2对HCC细胞增殖、迁移与侵袭的影响。结果在HCC细胞中,过表达GPS2能够抑制HCC细胞系MHCC-97H的增殖、迁移与侵袭,而敲低GPS2能够上调其增殖、迁移与侵袭(P<0.05)。进一步,在MHCC-97H细胞中过表达GPS2能够抑制EGFR、MMP1、MMP3以及MMP9等细胞增殖、迁移与侵袭相关因子的表达水平,而敲低GPS2的表达则能够上调这些因子的表达水平(P<0.05)。结论GPS2是新型HCC调控因子,能够抑制HCC细胞系的增殖、迁移与侵袭。 展开更多
关键词 肝细胞癌 g蛋白通路抑制因子2(gps2) 细胞增殖 迁移与侵袭
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EHMT2 promotes tumorigenesis in GNAQ/11-mutant uveal melanoma via ARHGAP29-mediated RhoA pathway
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作者 Yongyun Li Tianyu Zhu +6 位作者 Jie Yang Qianqian Zhang Shiqiong Xu Shengfang Ge Renbing Jia Jianming Zhang Xianqun Fan 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期1187-1203,共17页
Constitutive activation of GNAQ/11 is the initiative oncogenic event in uveal melanoma(UM).Direct targeting GNAQ/11 has yet to be proven feasible as they are vital for a plethora of cellular functions.In search of gen... Constitutive activation of GNAQ/11 is the initiative oncogenic event in uveal melanoma(UM).Direct targeting GNAQ/11 has yet to be proven feasible as they are vital for a plethora of cellular functions.In search of genetic vulnerability for UM,we found that inhibition of euchromatic histone lysine methyltransferase 2(EHMT2)expression or activity significantly reduced the proliferation and migration capacity of cancer cells.Notably,elevated expression of EHMT2 had been validated in UM samples.Furthermore,Kaplan-Meier survival analysis indicated high EHMT2 protein level was related to poor recurrence-free survival and a more advanced T stage.Chromatin immunoprecipitation sequencing analysis and the following mechanistic investigation showed that ARHGAP29 was a downstream target of EHMT2.Its transcription was suppressed by EHMT2 in a methyltransferasedependent pattern in GNAQ/11-mutant UM cells,leading to elevated RhoA activity.Rescuing constitutively active RhoA in UM cells lacking EHMT2 restored oncogenic phenotypes.Simultaneously blocking EHMT2 and GNAQ/11 signaling in vitro and in vivo showed a synergistic effect on UM growth,suggesting the driver role of these two key molecules.In summary,our study shows evidence for an epigenetic program of EHMT2 regulation that influences UM progression and indicates inhibiting EHMT2 and MEK/ERK simultaneously as a therapeutic strategy in GNAQ/11-mutant UM. 展开更多
关键词 Uveal melanoma EHMT2 RhoA pathway ARHgAP29 g protein gNAQ gNA11
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G蛋白通路抑制因子2促进肝癌细胞HepG2增殖和迁移
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作者 陆莹 向慎思 +2 位作者 詹轶群 杨晓明 尹荣华 《军事医学》 CAS CSCD 2024年第8期572-578,共7页
目的 探究G蛋白通路抑制因子2(GPS2)对肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响,并揭示其可能的作用机制。方法 通过肿瘤基因组图谱(TCGA)和临床蛋白质组肿瘤分析协作组(CPTAC)在线数据库分析GPS2表达情况;利用慢病毒感染HepG2细胞建立干涉及过表... 目的 探究G蛋白通路抑制因子2(GPS2)对肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响,并揭示其可能的作用机制。方法 通过肿瘤基因组图谱(TCGA)和临床蛋白质组肿瘤分析协作组(CPTAC)在线数据库分析GPS2表达情况;利用慢病毒感染HepG2细胞建立干涉及过表达GPS2的稳定株;利用Western印迹及实时荧光定量PCR(qPCR)检测GPS2蛋白及mRNA表达水平;利用细胞增殖实验检测干涉及过表达GPS2后对HepG2细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验及细胞划痕实验检测干涉及过表达GPS2对HepG2细胞迁移能力的影响;采用qPCR实验检测干涉及过表达GPS2对HepG2细胞上皮间质转化(EMT)标志物和基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响;通过Western印迹检测干涉及过表达GPS2对丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)通路和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的影响。结果 通过TCGA和CPTAC在线数据库分析发现,GPS2在人肝癌组织中高表达。干涉GPS2抑制HepG2细胞的增殖和迁移,而过表达GPS2促进HepG2细胞的增殖和迁移。干涉GPS2上调E钙黏蛋白(E-CAD)的mRNA水平,下调N钙黏蛋白(N-CAD)、波形蛋白(Vim)、MMP2和MMP9的mRNA水平,并抑制AKT和ERK磷酸化;相反,过表达GPS2下调E-CAD的mRNA水平,上调N-CAD、Vim、MMP2和MMP9的mRNA水平,并促进AKT和ERK磷酸化。结论 GPS2可以增强肝癌细胞MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路活化,促进EMT过程并上调MMP表达,提高HepG2细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 g蛋白通路抑制因子2 HEPg2细胞 细胞增殖 细胞迁移 上皮间质转换 基质金属蛋白酶
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GPS2的表达纯化以及抗体的产生
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作者 蒋丽琴 李学敏 +2 位作者 刘玲蓉 熊青青 张其清 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2012年第3期173-176,共4页
目的 旨在克隆表达纯化GPS2蛋白,并制备抗血清用于研究GPS2的功能.方法 用RTPCR得到GPS2基因,并克隆到pET-28a原核表达载体,用Ni2+-NTA树脂纯化GPS2后,免疫兔得到抗血清.结果成功构建了pET-28a-GPS2原核表达质粒,并实现重组蛋白在大肠... 目的 旨在克隆表达纯化GPS2蛋白,并制备抗血清用于研究GPS2的功能.方法 用RTPCR得到GPS2基因,并克隆到pET-28a原核表达载体,用Ni2+-NTA树脂纯化GPS2后,免疫兔得到抗血清.结果成功构建了pET-28a-GPS2原核表达质粒,并实现重组蛋白在大肠杆菌中的高效表达,Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化了GPS2蛋白,经过透析复性后得到质量浓度约为300μg/ml的GPS2纯化蛋白;制备了GPS2蛋白的特异性多克隆抗血清,ELISA测定抗血清效价远远高于1:12 800,Western Blot表明该抗血清能够特异性识别结合GPS2蛋白.结论 GPS2在E.coli高效表达,其纯化产物可用于制备抗血清,用于GPS2的功能分析. 展开更多
关键词 gSP2 克隆 纯化
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G蛋白通路抑制因子2在机械通气肺损伤中的调控作用及机制 被引量:1
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作者 杨丽 谷长平 +2 位作者 颜杰 杨帆 王月兰 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2023年第10期1009-1014,共6页
目的探讨G蛋白通路抑制因子2(G protein pathway suppressor 2,GPS2)在细胞机械牵张及小鼠大潮气量机械通气相关性肺损伤(ventilation‑induced lung injury,VILI)中的作用机制。方法取人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular... 目的探讨G蛋白通路抑制因子2(G protein pathway suppressor 2,GPS2)在细胞机械牵张及小鼠大潮气量机械通气相关性肺损伤(ventilation‑induced lung injury,VILI)中的作用机制。方法取人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVEC)按照随机数字表法分成4组(每组3孔):未进行机械牵张组(Nc组)、低表达GPS2组(GPS2 siRNA组)、机械牵张4 h组(CS 4 h组)和低表达GPS2并机械牵张4 h组(CS 4 h+GPS2 siRNA组)。GPS2 siRNA组与CS 4 h+GPS2 siRNA组HPMVEC转染GPS2干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA),CS 4 h组和CS 4 h+GPS2 siRNA组进行幅度为20%、频率为0.5 Hz的循环拉伸的方法建立机械牵张模型。Western blot法检测连环蛋白(p120)、紧密连接蛋白(Occludin)和GPS2水平,免疫荧光法检测p120和Occludin的定位及表达,流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平。健康雄性C56BL/6小鼠40只,采用随机数字表法分为4组(每组10只):对照组(C组)、GPS2敲低组(si‑GPS2组)、机械通气4 h组(MV 4 h组)、GPS2敲低+机械通气4 h组(MV 4 h+si‑GPS2组)。si‑GPS2组和MV 4 h+si‑GPS2组小鼠通过尾静脉注射GPS2 siRNA转染复合物,1周2次;MV 4 h组和MV 4 h+si‑GPS2组小鼠进行气管插管机械通气4 h。采用H‑E染色观察小鼠肺组织病理学改变,检测肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平。结果细胞实验中:与Nc组比较,GPS2 siRNA组、CS 4 h组和CS 4 h+GPS2 siR‑NA组GPS2、p120、Occludin水平下降(P<0.05),ROS水平增加(P<0.05),MMP水平降低(P<0.05),p120、Occludin表达荧光强度减弱、分布减少、细胞间隙增大;与CS 4 h组比较,CS 4 h+GPS2 siRNA组GPS2、p120和Occludin水平进一步下降(P<0.05),ROS水平增加(P<0.05),MMP水平降低(P<0.05),p120、Occludin表达荧光强度进一步减弱、分布进一步减少、细胞间隙进一步增大。动物实验中:与C组比较,si‑GPS2组、MV 4 h组、MV 4 h+si‑GPS2组小鼠肺组织MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),肺组织出现明显损伤改变;与MV 4 h组比较,MV 4 h+si‑GPS2组小鼠肺组织MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),肺组织损伤改变加重。结论GPS2可通过调控线粒体功能参与细胞机械牵张及小鼠大潮气量VILI。 展开更多
关键词 g蛋白通路抑制因子2 活性氧 机械通气相关性肺损伤 细胞连接
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G protein b_1λ_2 subunits purification and their interaction with adenylyl cyclase 被引量:1
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作者 陈巨莲 倪汉祥 +1 位作者 孙京瑞 WENG Gezhi 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2003年第2期212-223,共12页
A preliminary study on the interaction of G protein (guanine triphosphate binding pro- tein) b1g2 subunits and their coupled components in cell signal transduction was conducted in vitro. The insect cell lines, Sf9 (S... A preliminary study on the interaction of G protein (guanine triphosphate binding pro- tein) b1g2 subunits and their coupled components in cell signal transduction was conducted in vitro. The insect cell lines, Sf9 (Spodoptera frugiperda) and H5 (Trichoplusia ni ) were used to express the recombinant protein Gb1g2. The cell membrane containing Gb1g2 was isolated through affinity chromatography column with Ni-NTA agarose by FPLC method, and the highly purified protein was obtained. The adenylyl cyclase 2 (AC2) activity assay showed that the purified Gb1g2 could signifi-cantly stimulate AC2 activity. The interaction of b1g2 subunits of G protein with the cytoplasmic tail of various mammalian adenylyl cyclases was monitored by BIAcore technology using NTA sensor chip, which relies on the phenomenon of surface plasmon resonance (SPR). The experiments showed the direct binding of Gb1g2 to the cytoplasmic tail C2 domain of AC2. The specific binding domain of AC2 with Gb1g2 was the same as AC2 activity domain which was stimulated by Gb1g2. 展开更多
关键词 g protein b1g2 subunits g protein coupled signal transductional pathway surface plasmon resonance (SPR) BIAcore technology adenylyl cyclase (AC).
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