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利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ 被引量:1
1
作者 姜耀东 郑少斌 +3 位作者 谭万龙 赵善超 任非 张宝 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期307-309,共3页
目的利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ。方法采用PCR法从原有质粒中扩增G250/MN/CAⅨ全长编码序列,将获得的编码序列片段插入pET32a(+)表达载体,转化Rosseta大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,而后进行纯化及Westernblot鉴定。... 目的利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ。方法采用PCR法从原有质粒中扩增G250/MN/CAⅨ全长编码序列,将获得的编码序列片段插入pET32a(+)表达载体,转化Rosseta大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,而后进行纯化及Westernblot鉴定。结果正确构建pET32a(+)/G250重组质粒,重组质粒转化Rosseta菌后,经IPTG诱导,在58000相对分子质量处有明确的条带。目的蛋白表达占菌体总蛋白的32.7%。89.9%的重组蛋白是可溶性的。Westernblot结果显示纯化后的蛋白可以与G250单克隆抗体M75特异性结合。结论在原核系统中成功进行G250/MN/CA Ⅸ的高效表达,为下一步的单克隆抗体制备和蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肾肿瘤 g250/mn/CA Ⅸ抗原 克隆 原核表达载体
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肾癌G250 MN/CAIX重组质粒DNA免疫效应的初步研究 被引量:1
2
作者 李晓飞 刘雷 +4 位作者 吴荣佩 张亚东 李乐军 徐秀章 曹开源 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第B06期7-9,共3页
[目的]观察PCDNA3.0-G250重组质粒在小鼠中诱导产生DNA免疫应答的特点及抑瘤效应。[方法] PCDNA3.0-G250质粒每隔2周肌注射Balb/c小鼠共3次,对照组同法肌注PCDNA3.0质粒。每次免疫10 d后眶后取血,间接免疫荧光法检测血清抗体。6周后取... [目的]观察PCDNA3.0-G250重组质粒在小鼠中诱导产生DNA免疫应答的特点及抑瘤效应。[方法] PCDNA3.0-G250质粒每隔2周肌注射Balb/c小鼠共3次,对照组同法肌注PCDNA3.0质粒。每次免疫10 d后眶后取血,间接免疫荧光法检测血清抗体。6周后取脾细胞观察体外细胞毒效应。同法免疫Balb/c小鼠,第3次免疫时皮下种植sp2/0- PCDNA3.0-G250细胞,观察肿瘤大小及小鼠生存期。[结果]DNA免疫后可检测到特异性抗体,抗体滴度随免疫次数增加逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01)。体外CTL杀伤率与对照组差别有统计学意义。体内实验发现治疗组与对照组抑瘤效应无明显差异(P>0.05)。[结论]G250重组质粒DNA免疫能在小鼠巾诱导产生特异性细胞免疫及体液免疫,无明显体内抑瘤效应。 展开更多
关键词 肾肿瘤 肾细胞癌 g250/mn/CAIX抗原 DNA免疫
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肾癌特异性抗原G250/MN/CAⅨ的克隆及真核表达 被引量:1
3
作者 刘颖 于继云 +2 位作者 陈兴 张贺秋 凌世淦 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期496-499,共4页
目的:克隆人肾细胞癌特异性抗原G250基因,使其能够在真核细胞中表达并锚定修饰于细胞膜上。方法:提取人肾透明细胞癌细胞的总RNA,用RT-PCR扩增出G250基因,插入含有人Igκ链前导信号肽、IgG-Fc和GPI锚定信号肽基因序列的真核表达载体pCI-... 目的:克隆人肾细胞癌特异性抗原G250基因,使其能够在真核细胞中表达并锚定修饰于细胞膜上。方法:提取人肾透明细胞癌细胞的总RNA,用RT-PCR扩增出G250基因,插入含有人Igκ链前导信号肽、IgG-Fc和GPI锚定信号肽基因序列的真核表达载体pCI-neo-GPI中;将构建的重组质粒pCI-neo-GPI-G250转染RenCa细胞,利用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光检测G250在细胞中的表达。结果:构建的重组质粒pCI-neo-GPI-G250经测序正确;用各种方法对筛选得到的稳定转染细胞进行检测,均可以发现G250的表达,表达部位为细胞膜。结论:克隆出人肾细胞癌特异性抗原G250基因,且G250在RenCa细胞膜上可以正常表达,为进一步研究肾癌肿瘤疫苗的免疫原性提供了必要的前期准备。 展开更多
关键词 肿瘤疫苗 肾细胞癌 g250/mn/CA 糖基磷脂酰肌醇
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CAIX/MN/G250 mRNA在肾癌根治术前后表达的检测 被引量:2
4
作者 许长宝 王晓甫 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2010年第1期27-30,共4页
目的探讨肾癌相关蛋白CAIX/MN/G250 mRNA在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)手术前后的表达水平及临床意义。方法应用RT-PCR技术检测57例RCC患者癌组织及术前外周血中CAIX/MN/G250 mRNA的表达情况,并选择15例癌旁肾组织、15例正常肾... 目的探讨肾癌相关蛋白CAIX/MN/G250 mRNA在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)手术前后的表达水平及临床意义。方法应用RT-PCR技术检测57例RCC患者癌组织及术前外周血中CAIX/MN/G250 mRNA的表达情况,并选择15例癌旁肾组织、15例正常肾组织及40例健康人外周血作对照,对术前外周血CAIX/MN/G250 mRNA阳性RCC患者术后随访4周,并对其外周血CAIX/MN/G250 mRNA水平进行半定量检测。结果57例RCC患者,其CAIX/MN/G250 mRNA阳性率在外周血中为59.6%(34/57),癌组织中为78.9%(45/57),显著高于对照组(P<0.01)。在肾透明细胞癌患者的外周血及癌组织中,CAIX/MN/G250 mRNA的阳性率分别为76.2%(32/42)和95.2%(40/42),均显著高于相应对照组(P<0.01)。RCC患者外周血及癌组织中CAIX/MN/G250 mRNA阳性率均随临床分期的增加而增加(P<0.01)。34例外周血阳性患者CAIX/MN/G250 mRNA水平术前2h、术后7、14、21和28d分别为0.54±0.13、0.56±0.15、0.34±0.13、0.29±0.18和0.22±0.11。RCC患者外周血CAIX/MN/G250 mRNA水平在肾癌根治术后随时间的推移呈下降趋势(P均<0.05)。结论使用RT-PCR技术检测CAIX/MN/G250 mRNA对肾癌尤其是透明细胞癌有较好的特异性和敏感性。外周血CAIX/MN/G250 mRNA检测可作为肾癌微转移的检测指标用于RCC的诊断、疗效评价及预后判断。 展开更多
关键词 肾细胞 CAIX/mn/g250 MRNA
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肾癌G250/MN/CAIX抗原基因在酿酒酵母中的诱导表达及意义 被引量:2
5
作者 刘雷 李晓飞 +3 位作者 曹开源 吴荣佩 李乐军 张亚东 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期30-34,共5页
【目的】观察G250抗原基因编码区cDNA全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义。【方法】应用基因重组技术将人G250cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NTC,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NT... 【目的】观察G250抗原基因编码区cDNA全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义。【方法】应用基因重组技术将人G250cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NTC,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NTC-G250并转化酿酒酵母菌株INVSc1,筛选阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Westernblot检测。【结果】成功构建pYES2/NTC-G250重组酿酒酵母诱导表达质粒,证实其能够在酿酒酵母中诱导表达,表达量随诱导时间而变化,8~12h达高峰。【结论】人G250基因片段能够在酿酒酵母中表达,为进一步探讨基因重组酿酒酵母G250疫苗抗肿瘤效应及其安全性打下基础。 展开更多
关键词 肾细胞癌(RCC) g250/mn/CAIX(g250)抗原 酿酒酵母 基因表达
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SrAl_(12)O_(19):Mn^(2+)晶体的吸收光谱及g因子的理论研究
6
作者 赵林 杜懋陆 +1 位作者 王先龙 文久富 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第2期269-272,共4页
本文引入平均共价因子,采用点电荷模型,对SrAl1 2O19:Mn 2+晶体的吸收光谱及g因子进行理论研究,计算结果表明理论值与实验值符合较好.其次,利用T=110 K时g因子的实验值,得出了键长随温度变化的关系.
关键词 SrAl12O19:mn2+晶体 吸收光谱 g因子 平均共价因子
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CaZrO3∶Mn^4+晶体g因子及光谱的研究
7
作者 吴晓轩 冯文林 郑文琛 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1705-1707,共3页
推导了晶体中立方(Oh对称)的3d3八面体基团的g因子的高阶微扰公式;其中,既包括了传统的晶场机制(涉及与d—d跃迁光谱有关的晶场激发态与基态的相互作用)的贡献,也包括了以前在晶体场理论中被忽略的荷移机制(涉及与电荷转移光谱有关的荷... 推导了晶体中立方(Oh对称)的3d3八面体基团的g因子的高阶微扰公式;其中,既包括了传统的晶场机制(涉及与d—d跃迁光谱有关的晶场激发态与基态的相互作用)的贡献,也包括了以前在晶体场理论中被忽略的荷移机制(涉及与电荷转移光谱有关的荷移激发态与基态的相互作用)的贡献。采用这个公式和由CaZrO3∶Mn4+晶体光谱所得的参量,文章计算了该晶体的g因子(也包括了d—d跃迁光谱),计算结果与实验值能很好地吻合一致。计算中发现,荷移机制对g因子移动Δg(≈g-2.0023)的贡献在符号上与晶场机制的贡献相反,但大小已达到晶场机制贡献的62%。这表明,对晶体中高价态的3d3离子(如Mn4+和Fe5+)八面体基团,合理地解释其g因子(或其他电子顺磁共振谱参量)应同时考虑晶场机制和荷移机制的贡献。 展开更多
关键词 电子顺磁共振 g因子 荷移机制 晶体场和配位场理论 CaZrO3∶mn^4+晶体
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Bis(L-Asparaginato)Zn(Ⅱ)掺Mn^(2+)晶体的g因子和零场分裂的理论研究(英文)
8
作者 余萍 杜懋陆 段文倩 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第6期1024-1027,共4页
本文对Bis(L-asparaginato)Zinc(II):Mn2+晶体中Mn2+电子顺磁共振的g因子和零场分裂参量D、E,采用半自洽场3d轨道模型、点电荷模型和平均共价因子模型计算.理论计算数值与实验值符合很好.
关键词 Bis(L-asparaginato)Zinc(II):mn2+晶体 D2h对称 g因子 零场分裂参量
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G250、Ki-67和Bax在肾细胞癌组织中的表达与术后生存率的关系 被引量:5
9
作者 郑志学 陈晓 +1 位作者 张鑫 闫鸣 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2009年第5期286-290,共5页
目的检测G250/MN/CA(简称G250)、Ki-67和Bax在肾细胞癌及癌旁组织中的表达,探讨G250在肿瘤发展过程中的作用,以及G250、Ki-67和Bax表达对肾细胞癌患者术后生存率的影响。方法采用免疫组化SP法检测54例肾癌组织和18例癌旁组织中G250、Ki... 目的检测G250/MN/CA(简称G250)、Ki-67和Bax在肾细胞癌及癌旁组织中的表达,探讨G250在肿瘤发展过程中的作用,以及G250、Ki-67和Bax表达对肾细胞癌患者术后生存率的影响。方法采用免疫组化SP法检测54例肾癌组织和18例癌旁组织中G250、Ki-67和Bax的表达。结果G250、Ki-67和Bax免疫染色位于肾癌细胞的细胞膜、细胞核和细胞质,三者在肾细胞癌与癌旁组织中的阳性表达差异均有统计学意义;Ki-67和Bax在肾细胞癌不同病理分级和临床分期中的阳性表达差异有统计学意义,而G250的阳性表达差异无统计学意义。随访的47例患者中,G250阳性组患者术后远期无瘤生存率低于G250阴性组,但二者间的差异无统计学意义;进一步研究表明G250阳性高表达的患者术后无瘤生存率明显高于低表达者,经Log-rank检验差异有统计学意义。Ki-67阳性组患者术后远期无瘤生存率低于Ki-67阴性组,二者间的差异无统计学意义。Bax阳性组患者术后远期无瘤生存率高于Bax阴性组,二者间的差异有统计学意义。结论G250作为一种新的肾细胞癌特异性标志物,在肾细胞癌尤其是肾透明细胞癌的诊断、筛选方面具有良好的前景,并可能影响患者的术后无瘤生存率,但其表达与肾细胞癌临床分期及病理分级无明显相关;肾细胞癌中Ki-67和Bax的表达与肾细胞癌临床分期及病理分级有明显相关性,后者的表达同时也会影响患者术后的无瘤生存率。联合检测肾细胞癌组织中G250、Ki-67和Bax的表达有利于早期诊断肾细胞癌,并有利于判断患者的预后情况,对临床工作有指导意义。 展开更多
关键词 肾肿瘤 预后 g250/mn/CA KI-67 BAX
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肾癌G250抗原基因在sp2/0细胞中的表达及其意义 被引量:1
10
作者 张亚东 吴荣佩 +3 位作者 刘雷 李乐 曹开源 李晓飞 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期16-19,共4页
【目的】将G250抗原cDNA片段转染入sp2/0细胞中并获得稳定表达,为G250基因疫苗研究提供实验工具。【方法】用脂质体转染法将鉴定好的重组质粒转染入sp2/0细胞中,经G418筛选得到稳定表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、间接免疫荧光... 【目的】将G250抗原cDNA片段转染入sp2/0细胞中并获得稳定表达,为G250基因疫苗研究提供实验工具。【方法】用脂质体转染法将鉴定好的重组质粒转染入sp2/0细胞中,经G418筛选得到稳定表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、间接免疫荧光、Western blot检测G250基因在sp2/0细胞中的表达。【结果】转染2周后,筛选出阳性sp2/0细胞克隆,通过RT-PCR证实有G250mRNA转录,间接免疫荧光可以见到阳性细胞,Western blot证实有G250抗原表达。【结论】建立了稳定表达G250抗原的肿瘤细胞模型,为研究基于肾癌G250基因的肿瘤基因疫苗治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 肾细胞癌(RCC) g250/mn/CAIX(g250)抗原 基因表达
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抗肾细胞癌异种化G250抗原基因疫苗的构建及真核表达
11
作者 田仁礼 高江平 +6 位作者 阎谨琦 贾锐 张亮 李韧 韩刚 董金凯 于继云 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第2期191-193,共3页
目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250主要T细胞表位区域、猴和鼠G250部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导... 目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250主要T细胞表位区域、猴和鼠G250部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中;将重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI转染COS7细胞,流式细胞仪和免疫荧光检测其表达情况。结果:tG250融合基因经测序正确,PCR和酶切鉴定证明已成功连入真核表达载体pCI-Fc-tG250-GPI中;流式细胞仪和免疫荧光检测显示,重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI在COS7细胞中得到很好的表达。结论:成功构建了重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI,且在COS7细胞中可以有效表达,为以G250抗原为靶点基因疫苗的后续功能研究打下良好基础。 展开更多
关键词 肾肿瘤 疫苗 DNA 基因表达 g250/mn/CA
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自支撑石墨烯/二氧化锰/泡沫镍复合材料的电化学性能 被引量:1
12
作者 马骏 晋日亚 +1 位作者 郑璐 孙友谊 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期114-116,118,共4页
以三维泡沫镍(NF)为模板,在不添加模板剂的条件下,通过电沉积法沉积石墨烯(G),再采用水热合成制备纳米片二氧化锰(Mn O_2),得到自支撑电极复合材料G/Mn O_2/NF,改善其作为电极材料的电化学性能。用X射线衍射(XRD)、拉曼光谱(Raman)和扫... 以三维泡沫镍(NF)为模板,在不添加模板剂的条件下,通过电沉积法沉积石墨烯(G),再采用水热合成制备纳米片二氧化锰(Mn O_2),得到自支撑电极复合材料G/Mn O_2/NF,改善其作为电极材料的电化学性能。用X射线衍射(XRD)、拉曼光谱(Raman)和扫描电子显微镜(SEM)对复合材料的微观结构和表面形貌进行分析,通过循环伏安(CV)、恒电流充放电(GCD)、交流阻抗(EIS)测试了电极复合材料的电化学性能。结果表明:在电流密度为1 A/g的条件下,复合电极材料的比电容达到722 F/g,经过1 000次循环后比电容保持率为97%。 展开更多
关键词 无粘结剂 自支撑 g/mn O2/NF 超级电容器 电化学性能
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肾癌肿瘤相关抗原G250/MN/CAⅨ基因的克隆、表达及鉴定 被引量:3
13
作者 姜耀东 郑少斌 +1 位作者 王战会 谭万龙 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期90-92,共3页
目的报道G250/MN/CAⅨ基因的克隆,蛋白表达及鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR法扩增G250/MN/CAⅨ全长cDNA,将获得的cDNA片段插入pET22b(+)表达载体,转化BL21大肠杆菌中,以IPTG诱导进行蛋白表达,SDSPAGE凝胶电泳观察结果,实... 目的报道G250/MN/CAⅨ基因的克隆,蛋白表达及鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR法扩增G250/MN/CAⅨ全长cDNA,将获得的cDNA片段插入pET22b(+)表达载体,转化BL21大肠杆菌中,以IPTG诱导进行蛋白表达,SDSPAGE凝胶电泳观察结果,实验验证。结果克隆的G250/MN/CAⅨ基因经测序证实序列正确,构建重组质粒pET22b(+)/G250并在原核系统中表达G250/MN/CAⅨ重组蛋白,该蛋白具有较好的抗原性和特异性。结论成功完成G250基因克隆,为在G250蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 肾肿瘤 肾癌 基因 抗原 g250/mn/CA Ⅸ基因 克隆
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甘肃省“两西”地区草地农业现状与发展策略 被引量:4
14
作者 李广 侯扶江 黄高宝 《水土保持学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期184-188,共5页
“两西”地区草地组成变坏,生产力下降,可利用面积减少和环境恶化,分析了草地退化非生物因素、生物因素和社会因素。提出了退化草地治理的原则:生态建设产业化,因地制宜与系统整治相结合,重恢复、中保护、轻利用和保持政策连续性。河西... “两西”地区草地组成变坏,生产力下降,可利用面积减少和环境恶化,分析了草地退化非生物因素、生物因素和社会因素。提出了退化草地治理的原则:生态建设产业化,因地制宜与系统整治相结合,重恢复、中保护、轻利用和保持政策连续性。河西地区的目标是通过山地-绿洲-荒漠系统耦合建成具有地域特色和优势的复合型草地农业系统及其产业链,定西地区是参与建立黄土高原巨型畜牧业基地,两地区以草业为纽带建立灌溉农耕区-雨养农耕区耦合系统。 展开更多
关键词 甘肃 “两西”地区 草地 农业现状 发展策略
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The g-tensor theory of cubic d^5 complexes and the research of optical and magnetic properties of Mn^(2+):CaF_2 and Mn^(2+):KZnF_3
15
作者 周康巍 杨建华 彭隆才 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1996年第12期982-987,共6页
The problem of how to give a unified interpretation for the electron paramagntic res-onance(EPR) parameters (the zero-field splitting parameter a and the g-tensor) and the op-tical spectrum of a cubic d^5 complex had ... The problem of how to give a unified interpretation for the electron paramagntic res-onance(EPR) parameters (the zero-field splitting parameter a and the g-tensor) and the op-tical spectrum of a cubic d^5 complex had long been open since it was put forward by VanVleck and Penny in 1934. In the 1990s, two different methods for the unified calculationof the parameter a and spectrum of a cubic d^5 complex were proposed respectively byKang and Zhou et al, respectively. However, they did not deal with how to 展开更多
关键词 g-TENSOR THEORY OPTICAL and MAgNETIC properties of mn2+ PARAMAgNETIC resonance.
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肾癌G250抗原基因真核表达载体的构建和序列测定 被引量:7
16
作者 李晓飞 曹开源 +4 位作者 徐霖 袁广卿 张亚东 肖娜 刘晓华 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-8,共4页
目的构建肾癌G250抗原基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0,并进行序列测定。结果肾癌组织RT-PCR扩增后... 目的构建肾癌G250抗原基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0,并进行序列测定。结果肾癌组织RT-PCR扩增后,均产生特异性条带,位置在1000 bp和1600 bp之间,与预定相符。pcDNA3.0-G250分别用H indⅢ、XhoⅠ双酶切后产生2条带,均与预定位置相符;抗原基因编码区序列与Genbank登录号BC014950文献报道的序列同源性为100%,目的基因与载体正确连接。结论成功克隆了肾癌G250抗原的基因编码区序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.0-G250,为核素标记的G250单克隆抗体在诊断和治疗的应用及G250基因修饰的树突状细胞疫苗的肾癌生物治疗提供了依据。 展开更多
关键词 肾肿瘤 g250/mn/CAIX抗原 逆转录-聚合酶链式反应 克隆 序列分析
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