Gβ_1γ_2蛋白的纯化及其与腺苷酸环化酶的互作关系

对G蛋白β1γ2亚基及偶联组分在信号传导中的作用进行了初步研究.以离体昆虫细胞Sf9(Spodoptera frugiperda,秋粘虫卵巢细胞)或H5(Trichoplusiani,粉纹夜蛾细胞)为生物反应器,高效表达了G蛋白β1γ2亚基.用Ni—NTA亲和层析柱,经快速蛋白纯化技术(FPLC)获得高纯度的Gβ1γ2.活性测定表明,纯化的Gβ1γ2能显著刺激腺苷酸环化酶(AC2)的活力.应用基于表面胞质团共振现象的BIAcore技术,采用生物传感芯片NTA(biosensor chip NTA)直接证明腺苷酸环化酶2(AC2)的胞质末端C2区域为G蛋白β1γ2亚基的结合区,从而明确了二者互作的活性位点和结合位点同位于该区域.