GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白的表达和纯化鉴定

目的通过杆状病毒表达系统,获取高纯度GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆和多克隆抗体提供免疫原。方法将GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白基因片段修饰后插入p HTA表达载体中,经测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化到MAX Efficiency~DH10Bac^(TM)感受态细胞中,获取表达杆粒并转染SF9细胞,表达GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白。重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定。结果 SDS-PAGE和Western blot结果表达了分子量约为60 k Da的重组蛋白,动物试验表明重组蛋白具有较好的免疫原性,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆抗体和多克隆抗体、建立相应的免疫学检测方法奠定了基础。结论构建了GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白表达载体,并获得GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白。

抗GⅡ.3型诺如病毒阻断型单克隆抗体的制备和鉴定

诺如病毒(norovirus,NoV)是引起非细菌性急性肠胃炎的主要病原体之一。目前国内外还没有关于抗GⅡ.3NoV组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)阻断型单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的报道,本研究制备了抗GⅡ.3型NoV HBGA阻断型mAbs,并对这些抗体特性进行了初步的鉴定。采用纯化的GⅡ.3型(GenBank登录号:KY767665)NoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)免疫BALB/c小鼠。将GⅡ.3,GⅡ.4(GenBank登录号,KF306214),GⅡ.3S/GⅡ.6P,GⅡ.6S/GⅡ.3P,GⅡ.4-VP1/GⅡ.3-P2主要衣壳蛋白(VP1)抗原或嵌合抗原作为包被抗原采用间接ELISA方法分别对细胞克隆株进行筛选,采用体外HBGA-VLP结合阻断实验对筛选的mAbs进行阻断活性鉴定,利用基于涵盖GⅡ.3突环区(protruding domain,P区)的重叠多肽ELISA和western blot(WB)对阻断抗体结合位点进行特性分析。体外HBGA-VLPs阻断实验显示三株细胞分泌抗体具有阻断活性。挑选目标株制备腹水并对mAbs进行纯化。WB结果显示三株HBGA阻断型mAbs只识别非变性的GⅡ.3 VP1蛋白;基于GⅡ.3 P区重叠多肽的间接ELISA结果显示三株HBGA阻断型mAbs与被检测多肽无结合活性。本研究制备了具有HBGAs阻断活性的GⅡ.3 NoV特异性mAbs,全部只识别非变性的GⅡ.3 VP1蛋白,且结合位点位于GⅡ.3 VP1 P2区。抗GⅡ.3 NoV HBGAs阻断型mAbs的获得为后续研究GⅡ.3 NoV的进化、感染机制和HBGAs结合位点提供了原材料。

一起重庆市GⅡ.3型诺如病毒聚集性疫情的流行病学调查

目的分析重庆市某学校一起诺如病毒感染性腹泻疫情的发生特点及其感染病毒的基因型别,为有效控制疫情提供科学依据,同时为类似疫情现场处置提供经验。方法运用描述性和分析性流行病学方法对疫情的流行特征和危险因素进行分析,采集病例、可能的无症状感染者、桶装水及环境有关标本,采用实时荧光定量RTPCR检测标本诺如病毒RNA,阳性标本进行逆转录PCR扩增、电泳、测序和发育树分析。结果本次疫情共有8例病例,均发生在同一班级,该班共有28名学生,班级学生罹患率28.57%,男生、女生罹患率分别为30.77%和26.67%;主要临床症状为呕吐、腹痛、腹泻,8名患病学生、4名无任何症状的该班老师、学生课桌、学生晨检牌检出诺如病毒GⅡ阳性。8株疫情病毒经序列测定和比对分析,均为GⅡ.3亚型。结论该起事件是由诺如病毒GⅡ.3感染所致的群体性事件。密切接触、无症状感染者以及共用物品可能导致此次诺如病毒的传播。

一起幼儿园诺如病毒暴发疫情调查及分子流行病学特征分析

目的 调查2021年西安市一起幼儿园诺如病毒暴发疫情的流行特征和暴发原因,并对病原体进行分子鉴定分型。方法 根据诺如病毒疑似病例定义主动搜索病例,同时开展现场卫生学调查;采用描述性流行病学方法描述病例的临床症状和三间分布特征,结合队列研究方法分析疫情暴发原因;采集典型病例肛拭子样本进行诺如病毒核酸检测和基因测序分型。结果 该起暴发疫情共持续3 d,累计报告病例31例,病例均为幼儿,罹患率为14.16%(31/219),其中4岁病例占比最大(93.55%,29/31),小(4)班罹患率最高(40.00%,12/30);病例临床症状主要为呕吐(100%)、腹泻(12.90%)和腹痛(6.45%),无重症和死亡病例。流行曲线提示疫情为一次性暴露后同源感染引起。队列研究显示近距离暴露呕吐物幼儿发病风险是远距离暴露幼儿的3.98倍(相对危险度=3.98,95%置信区间:2.159~7.334)。病例样本诺如病毒阳性检出率为61.54%(8/13),经基因测序和鉴定分型确定渉疫毒株为GⅡ.3[P12]基因型诺如病毒。结论 该起疫情暴发原因是托幼儿童暴露于首发病例呕吐物形成的气溶胶,感染毒株为GⅡ.3[P12]基因型诺如病毒。建议托幼机构加强教职工诺如病毒疫情防控知识培训,尤其是对病例呕吐物和排泄物的应急处置,防止类似疫情再次发生。

一起急性胃肠炎暴发疫情的病原分子特征分析

目的了解合肥市一起急性胃肠炎疫情的病原分子特征。方法采用实时荧光PCR(Real-time PCR)对13份肛拭标本同时进行札如病毒、诺如病毒、星状病毒核酸检测,检出的札如病毒核酸阳性标本采用传统RT-PCR扩增VP1基因片段,并测定基因序列,构建系统进化树。结果 Real-time PCR检出8份札如病毒核酸PCR阳性标本,诺如病毒、星状病毒核酸结果均为阴性。1份RT-PCR扩增产物测序成功,基因序列比对和进化分析显示为札如病毒GⅡ.3基因亚型。结论引起该起急性胃肠炎疫情的病原体为GⅡ.3型札如病毒。