GⅡ-4型诺如病毒体外结合唾液HBGAs受体的检测与分析

目的建立诺如病毒(Norovirus,NoV)结合唾液HBGAs受体的实验方法、验证2株GⅡ-4型NoV毒株与我国人群唾液HBGAs的结合方式。方法收集健康志愿者唾液标本,采用凝集抑制实验法检测唾液中HBGAs血型物质,用EIA法检测NoV VLPs、阳性毒株与HBGAs的结合情况。结果63份标本检出O型21例(占33.3%),B型14例(占22.2%),A型和非分泌型各13例(分别占20.6%),AB型2例(占3.2%)。rVA387、2株GⅡ-4型毒株均能结合分泌型,与非分泌型唾液不反应。结论本研究成功建立了NoV结合唾液HBGAs受体的实验方法,通过NoV毒株与HBGAs相互作用的研究有助于了解NoV的宿主适应特性及病毒进化和流行规律;同时为筛选防治我国人群的抗NoV药物提供技术平台。

2型糖尿病合并冠心病患者PAI-1基因4G/5G多态性研究

目的 探讨 2型糖尿病患者血浆纤溶酶原激活物抑制因子 - 1(PAI - 1)基因启动区 4G/5G多态性及与并发冠心病的关系。方法 118名 2型糖尿病患者 ,按有无冠心病分为两组。未合并冠心病组 80例 ,合并冠心病组38例。应用PCR扩增PAI 1基因启动区片段 ,γ32P末端标记 2个序列特异性寡核苷酸 (ASO)进行点杂交 ,比较基因型在两组糖尿病人群中的分布及与血浆PAI 1活性的关系。结果 (1)合并冠心病的 2型糖尿病患者较未合并冠心病组 4G基因型的频率升高 ,但未达统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;(2 )两组的血浆PAI 1活性差异明显 (10 .32± 2 .6 5vs8.87± 3 .2 4)kU/L ,P <0 .0 5 ;(3)两组的血TG水平差异明显 (1.99± 1.0 4vs 1.5 6± 0 .72 )mmol/L ,P <0 .0 5 ;(4)两组的空腹胰岛素水平差异明显 (14.6± 5 .8vs 11.2± 4.3)kU/L ,P <0 .0 5 ;(5 )在 4G/4G基因型患者中血浆PAI 1活性与TG明显相关 (r=0 .5 7,P <0 .0 5 )。结论 PAI 1活性升高及PAI 1基因启动区

Toll样受体4参与介导黄曲霉毒素G1对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的致损伤作用

目的在基因水平上探讨Toll样受体4(TLR4)参与介导黄曲霉毒素G1(AFG1)对肺泡Ⅱ型上皮细胞的致损伤生物学效应,及其作用机制和途径。方法分离、纯化、培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞并配置3个不同浓度的AFG1液体。实验随机分为正常组、实验组、溶剂对照组,每组6个样本。正常组加入同等量的无菌生理盐水;实验组加入不同浓度的AFG1液(高、中、低浓度分组),溶剂对照组加入同等量的二甲基亚砜(DMSO),终浓度为0.4 ml/L;同时处理24 h后在上述5组提取细胞mRNA,采用RT-PCR法检测各组TLR4 mRNA、NF-κBmRNA、TNF-αmRNA和IL-6mRNA的表达水平。结果正常组肺泡Ⅱ型上皮细胞上TLR4 mRNA、NF-κBmRNA、TNF-αmRNA和IL-6mRNA的表达量较低。实验组经AFG1液作用后,各项指标的表达量显著高于正常组(P<0.05)和溶剂对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性增高。溶剂对照组各项指标的表达量与正常对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论 TLR4→NF-κB→炎症介质信号转导通路参与AFG1对AT-Ⅱcells的损伤作用。

吉林省2012～2013年<5岁婴幼儿中检出诺如病毒GⅡ.4Sydney(悉尼)2012变异株

目的了解吉林省2012~2013年诺如病毒（Norovirus,NV）流行型别及感染状况。方法收集长春市儿童医院2012~2013年〈5岁住院腹泻患儿的粪便标本,采用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测粪便标本中的NV,阳性标本进行核苷酸序列测定,构建系统进化树进行分析。结果检测粪便标本共770份,NV阳性139份,总阳性率为18.1%,其中2012年总阳性率为18.6%（72/387）,2013年总阳性率为17.5%（67/383）,〈2岁婴幼儿感染占总标本数的97.1%,全部为基因Ⅱ组（GenogroupⅡ,GⅡ）。PCR产物进行序列测定,取得测序结果的共97份,其中GⅡ.4型53份,占54.6%;GⅡ.3型41份,占42.3%;GⅡ.13型2份,占2.1%;GⅡ.6型1份,占1.0%。2012年检出GⅡ.4 Sydney（悉尼）2012变异株2份,占2012年阳性总数的4.9%;2013年检出26份,占2013年阳性总数的46.4%。结论吉林省存在多种NV基因型的感染,2013年流行优势株为GⅡ.4 Sydney2012变异株。

2012年广西首次检出诺如病毒GⅡ.4 Sydney变异株

目的了解2012年广西壮族自治区(广西)罗城县诺如病毒流行株基因型谱分布。方法 2012年收集323例5岁以下腹泻患儿粪便标本,反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测诺如病毒,对VP1区部分核苷酸序列进行测定并构建核苷酸系统进化树。结果检测323例病例粪便标本,诺如病毒阳性24份(7.43%);诺如病毒GⅠ基因组2份(8.33%),GⅠ.4和GⅠ.6各1份;GⅡ基因组22份(91.67%),GⅡ.6基因型1份(1/22),GⅡ.4基因型21份(21/22)。GⅡ.4中,18份(85.71%)属于2006b变异株簇,3份(14.29%)属于Sydney变异株簇。结论 2012年广西罗城县诺如病毒流行株基因型呈现多样性,以GⅡ.42006b变异株为优势流行株,首次检出GⅡ.4 Sydney变异株。

广州地区婴幼儿感染Noro病毒基因型的初步研究

目的 探讨广州地区婴幼儿腹泻中感染Noro病毒的基因型。方法 用Clustal W比对GⅡ组Noro病毒后，设计处于ORF1与ORF2连接点两旁两对简并引物，进行巢式RT—PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，对ORF1与ORF2连接点两旁序列和衣壳蛋白N／S区用Clustal W进行同源性分析，用phylip 3．65软件、邻接法构建进化树。结果 标本NVgz100、NVgz10成功扩增出ORF1与ORF2连接点两旁1208bp片段（相对于Hawaii virus，U07611位置为4476—5683），包含ORF1的3’端RdRp的大部分基因和ORF2基因的5’端的S区。对标本NVgz100、NVgz10与另一实验NVgz01（DQ369797）的1208bp进行同源性分析发现，3份标本与GⅠ组同源性为58％～61％，与GⅡ组同源性为74％～92％；将这3份标本与GⅠ、GⅡ组构建进化树，可发现NVgz100、NVgz10和NVgz01与GⅡ组Bristol等病毒密切相关，将NVgz100、NVgz10和NVgz01的衣壳蛋白N／S区与GⅡ组各基酬型进行同源性比较，发现3份标本与GⅡ4基因型Camberwell、Bristolt Grimsby同源性较高（92％～96％），与其他基因型同源性为70％～73％，以N／S区构建进化树可发现3份标本与Camberwell、Bristol、Grimsby、Lordsdale处于同一簇中。结论 本实验结果表明Noro病毒株以GⅡ组为主，病毒流行的基因型为与Camberwell、Bristol、Grimsby和Lordsdale等密切相关的GⅡ-4基因型。

安徽省诺如病毒G II.4/Sydney 2012变异株分子特征分析

目的了解安徽省某高校一起急性胃肠炎暴发疫情的病原体基因分型和分子特征。方法采用实时荧光定量PCR法（Real-time PCR）对6份粪便/肛拭子标本检测诺如病毒核酸,检出的阳性标本经传统RT-PCR扩增衣壳蛋白区（ORF2）部分序列、基因测序和型别鉴定,利用Clustal X 2.0和Mega 6.0软件对测定序列进行核苷酸同源性比对和构建基因进化和亲缘性关系树。结果检出4份标本诺如病毒核酸阳性,阳性率为66.67%（4/6）;基因序列比对和进化亲缘性关系显示：诺如病毒基因型为GII.4型;2毒株序列之间核苷酸同源性为100%;与2014~2015年上海株、香港株核酸同源性最高,均为100%;与2012澳大利亚Sydney株（JX459908）同源性为99.6%;与上海和香港两地区毒株亲缘性关系最近,聚为独立一簇,同属GII.4/Sydney 2012分支。结论引发该起急性胃肠炎暴发的病原体为GII.4型诺如病毒,且属于GII.4 Sydney 2012变异株。

2011年广州从化地区诺如病毒感染的分子流行病学研究

目的探讨广州从化地区诺如病毒分子流行病学特点,分析从化地区诺如病毒的基因型。方法收集2011年1—12月从化地区腹泻患者标本218份,采用荧光RT-PCR对临床标本进行检测,同时针对诺如病毒ORF2基因区段设计引物,随机选取5株病毒进行ORF2基因序列测定。用ClustalW和MEGA5.0等软件进行序列特性分析和基因型分析。结果 218份临床标本中检测到38份阳性标本,检出率为17.43%。阳性率较高的月份为9、10、11、12月,全年最低检出率的时间为6、7月份(均为0),最高检出率的时间为11月份(32%)。扩增了5株诺如病毒ORF2基因序列,序列分析发现与GenBank中GⅡ组诺如病毒的相似性为76%～98%,与GⅠ组为43%～55%,其中与GⅡ-4组Farmington Hills、Lorsdale、ShanghaiSH52009等株同源性为94%～98%,确认该5株诺如病毒属于GⅡ-4型。进一步的氨基酸序列分析发现与f亚型2006b新变株同源性为97%。结论广州从化地区诺如病毒主要流行季节是冬季,克隆的5株诺如病毒属于GⅡ-4f 2006b型。2011年从化地区以GⅡ-4f2006b新变异株为主要流行株。

诺如病毒67株基因分型

目的了解2014年苏州地区诺如病毒的感染状况及其基因型别。方法收集2014年苏州大学附属儿童医院疑似病毒性腹泻粪便标本322份，反转录（RT ）‐PCR定性检测G Ⅰ和G Ⅱ组诺如病毒，采用聚合酶区（A区）及衣壳蛋白区（C区）引物对诺如病毒阳性标本进行RT‐PCR扩增以鉴定诺如病毒基因型别。通过对相同样本不同区域测序分析得到比较全面的诺如病毒分子特征。结果322份粪便标本中，检测到67株诺如病毒G Ⅱ基因组，未检测到G Ⅰ基因组。A区测序成功42株，G Ⅱ．e型35株，GⅡ．7型3株，G Ⅱ．17型2株，G Ⅱ．12型2株；C区测序成功53株，G Ⅱ．4‐2012Sydney型44株， G Ⅱ．6型4株，G Ⅱ．17型2株，G Ⅱ．3型2株，G Ⅱ．2型1株。结论2014年苏州地区的诺如病毒以G Ⅱ．4‐2012Sydney亚型为主，同时发现G Ⅱ．17型毒株、G Ⅱ．7／G Ⅱ．6和G Ⅱ．12／G Ⅱ．3重组毒株。

2013年海盐县诺如病毒流行株的监测和基因型分析

目的了解2013年海盐县诺如病毒流行株基因型谱分布。方法 2013年收集170例腹泻患者粪便标本,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诺如病毒核酸,挑选部分毒株进行核苷酸序列测定并构建系统进化树。结果检测170例腹泻患者粪便标本,诺如病毒阳性24份,检出率为14.12%;其中诺如病毒GⅠ基因组1份,占4.17%,序列测定为GⅠ.2基因型;GⅡ基因组23份,占95.83%,选4株进行序列测定,比对结果 1株属于GⅡ.4基因型2006b变异株,3株属于GⅡ.4基因型Sydney变异株。结论 2013年海盐县诺如病毒流行株基因型呈现多样性,以GⅡ.4 Sydney变异株为优势流行株,首次检出GⅠ基因组。

江苏省近期急性胃肠炎暴发中诺如病毒分子特征分析

目的了解江苏省胃肠炎暴发疫情中诺如病毒（NOV）感染状况，并对其病原分子流行病学特征进行初步研究。方法收集江苏省2012年10月至2013年3月7起胃肠炎暴发疫情患者肛拭子标本共67份，采用实时荧光RT-PCR定性检测，NoV阳性标本用RT-PCR扩增其聚合酶区及VPl区基因片段进一步测序分型。结果7起疫情均为NoV感染引起的暴发，检测阳性率为67．2％（45／67）。全部45株阳性毒株序列分析表明7起疫情中除一起是由GII．3型感染引起外，其余6起均由新GⅡ．4感染引起，其中38株毒株与2012年澳大利亚参考株GII．4／Sydney株同源性均在99％以上。进一步对6株新型Sydney变异株的衣壳蛋白VPl区扩增测序，并与9株近年流行株的VPI区氨基酸序列比对，发现该6株毒株的VPl区部分氨基酸已出现突变，而氨基酸位点的突变是与病毒抗原性密切相关。结论江苏省7起疫情暴发聚集且感染毒株型别单一，说明已出现新NoV变异株，其原型株GlI．4／Sydney已在国外多地引起暴发和流行，提示该毒株将是今后防控监’钡ll的重点。