NoV GⅡ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立

近年来,一种新的诺如病毒GⅡ.2亚型(norovirus GⅡ.2,NoV GⅡ.2)通过牡蛎等生食海鲜感染人群,引发急性胃肠炎,并在全球广泛传播。为实现NoV感染的现场诊断和快速疫情响应,亟需建立快速便捷的NoV GⅡ.2亚型核酸检测方法。本研究通过设计引物、crRNA,经优化反应条件后,建立了NoV GⅡ.2亚型RTRPA-CRISPR/Cas12a检测方法。结果显示:利用引物NoV-GⅡ.2-F1B和NoV-GⅡ.2-R1对NoV GⅡ.2标准RNA进行RT-RPA扩增,结合crRNA1介导的CRISPR/Cas12a报告体系,能在40 min内完成NoV GⅡ.2核酸检测;该方法检测灵敏度为10 copies/μL,且与轮状病毒、腺病毒、星形病毒、人副肠孤病毒、博卡病毒和札如病毒无交叉反应;应用该方法和qRT-PCR法,分别对30份临床模拟样本进行检测,发现总符合率达96.67%。结果表明,本研究建立的NoV GⅡ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法无需依赖昂贵设备,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷快速等特点,为NoV GⅡ.2感染的现场检测和防控提供了新方法。

基于G蛋白信号调节因子2敲低探讨血管紧张素Ⅱ诱导的主动脉夹层形成的机制

目的探讨G蛋白信号调节因子2(RGS2)在调节血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的主动脉夹层形成中的作用。方法将C57BL/6小鼠分为3组:Control组(n=10)、AngⅡ组(n=20)、AngⅡ+sh-RGS2组(n=20)。AngⅡ组和AngⅡ+sh-RGS2组小鼠建立了主动脉夹层模型。在体内评估主动脉夹层的发生率,在体外和体内评估血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化。结果RGS2的敲低逆转了AngⅡ导致的αSMA、ACTA2和MYH11的表达下调,并抑制了AngⅡ诱导的SPP1和Vimentin蛋白表达。AngⅡ组和AngⅡ+sh-RGS2组的主动脉夹层发生率分别为45%(9/20)和10%(2/20)。与AngⅡ组小鼠比较,AngⅡ+sh-RGS2组小鼠中观察到更少的弹性层增厚、主动脉破裂和主动脉壁胶原纤维含量。此外,与AngⅡ组比较,AngⅡ+sh-RGS2组主动脉的最大直径减小(P<0.05),ACTA2、MYH11蛋白增加(P<0.01),RGS2、SPP1、Vimentin蛋白降低(P<0.01)。结论RGS2敲低抑制AngⅡ诱导的VSMC从可收缩表型转变为合成表型,降低了主动脉夹层形成的发生率。

IGF-Ⅱ对人肝癌细胞HepG2中抑癌基因p16和p53表达的影响

目的:观察胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)对人肝癌细胞HepG2中生物学表型变化及抑癌基因p16和p53表达的影响。方法:培养人肝癌细胞株HepG2,IGF-Ⅱ(25、50、100 ng/ml)作用于不同时间点(24、48、72 h),观察各组细胞生物学表型变化。IGF-Ⅱ(50 ng/ml)作用于HepG2 48 h后,分别采用Realtime PCR、Western blot及细胞免疫荧光法检测人肝癌细胞中p16和p53的表达情况,并进行定量分析。结果:IGF-Ⅱ诱导HepG2细胞形态发生一定改变;IGF-Ⅱ可增加HepG2细胞存活率及细胞增殖,但差异无统计学意义(P>0.05);IGF-Ⅱ(50 ng/ml)对HepG2细胞的克隆形成有一定的促进作用,但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,IGF-Ⅱ组HepG2细胞中p16和p53 mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05)。此外,p16和p53阳性表达主要位于细胞核。对照组、IGF-Ⅱ组HepG2细胞中p16荧光表达量分别为(100.00±11.55)%、(68.33±6.01)%,p53荧光表达量分别为(100.00±17.32)%、(57.67±10.11)%。与对照组相比,IGF-Ⅱ组HepG2细胞中p16及p53荧光表达量明显减弱(P<0.05)。结论:IGF-Ⅱ可通过诱导人肝癌细胞HepG2生物学表型的改变,下调抑癌基因p16和p53的mRNA及蛋白表达,继而发挥促进肝癌进展的作用。

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P<0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。

2017-2022年北京市某区GⅡ.2[P16]型诺如病毒感染疫情的分子流行病学特征分析

目的了解2017—2022年北京市某区GⅡ.2[P16]诺如病毒感染疫情的分子流行特征。方法收集2017年1月至2022年12月北京市某区诺如病毒相关疫情信息及样本,应用实时荧光聚合酶链式反应(PCR)进行诺如病毒检测,阳性样本通过逆转录PCR扩增、测序和序列分析;并获得2022年诺如病毒的3株GⅡ.2[P16]全基因组序列。结果2017年1月至2022年12月,共报告诺如病毒暴发137起,83起成功获得基因分型,其中GⅡ.2[P16]占35.04%(48/137),为主要基因型,其季节高峰在冬春季,主要发生在托幼机构和小学。根据基因组进化结果分析,本研究2022年3株GⅡ.2[P16]基因组在VP1与GⅡ.2[P16]亚群(2019—2022)同属一簇;RdRp区与GⅡ.2[P16]亚群(2018—2022)同属一簇。在非结构蛋白P48出现3个氨基酸变异,包括P44S、M163 T和V227I,在RdRp区出现一个氨基酸位点变异,为S1645C。结论GⅡ.2[P16]是2017年1月至2022年12月引起北京市某区诺如病毒疫情的优势流行株,持续监测和基因组分析有助于全面了解流行株变异和进化机制。

人尾加压素Ⅱ及其受体GPR14与2型糖尿病

尾加压素Ⅱ(UⅡ)是最早从鱼尾部下垂体中分离出的血管活性肽,近来已从人体中克隆出来,通过作用于其特异性受体G蛋白耦联受体参与许多生物学效应,其中包括收缩/舒张血管,促内皮细胞、血管平滑肌细胞、心肌纤维细胞增殖及抑制胰岛素分泌等。UⅡ不仅与许多心血管疾病如高血压、充血性心力衰竭、冠心病和动脉粥样硬化有关,而且研究发现,糖尿病患者血液中UⅡ含量升高,同时有许多研究表明,与2型糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病足等慢性并发症的发生均有关。

Bis(L-Asparaginato)Zn(Ⅱ)掺Mn^(2+)晶体的g因子和零场分裂的理论研究(英文)

本文对Bis(L-asparaginato)Zinc(II):Mn2+晶体中Mn2+电子顺磁共振的g因子和零场分裂参量D、E,采用半自洽场3d轨道模型、点电荷模型和平均共价因子模型计算.理论计算数值与实验值符合很好.

我国食源性诺如病毒GⅡ.2[P2]型毒株基因组结构与衣壳蛋白功能研究

食源性诺如病毒(Norovirus)是引起全球食品安全事件的主要微生物病原,具有丰富的遗传多样性,基因型较复杂,近年来GⅡ.2逐渐成为我国主要流行基因型之一。为了解食源性诺如病毒GⅡ.2型变异特点,该研究以2015年在广州地区检出的GⅡ.2[P2]型GZ2015-L335毒株为对象,对其基因组结构及衣壳蛋白功能进行了系统表征。该毒株基因全长为7 496 bp,在线基因分型结果表明其为GⅡ.2[P2]基因型。通过克隆其衣壳蛋白VP1基因,借助杆状病毒表达系统获取重组VP1蛋白,并采用氯化铯密度梯度离心法进行纯化。SDS-PAGE和Western blot实验结果表明重组VP1蛋白分子量约为58 ku;透射电镜结果显示该蛋白可自组装形成直径约为30 nm的病毒样颗粒(Virus-like Particle,VLP);ELISA结果显示该VLP与抗GⅡ.2[P]衣壳P颗粒血清具有较高结合活性。此外,受体结合实验证实该VLP与A/B/O等分泌型及非分泌型唾液呈现出广泛的结合作用。该研究对GⅡ.2[P2]型GZ2015-L335毒株基因组结构进行了系统分析,成功制备并表征了其病毒样颗粒,结果将为食源性诺如病毒的高效抗体研制及新型检测技术研发提供支撑。

食管鳞癌组织中ABCG2、p16表达变化及意义

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)及p16表达变化,并探讨其临床意义。方法选取136例份ESCC组织及37例份正常食管黏膜组织(距癌组织>5 cm),用免疫组化SP染色法检测两种组织中ABCG2及p16蛋白表达,用qRT-PCR法检测两种组织中ABCG2与p16 mRNA表达。分析ABCG2及p16蛋白阳性表达与患者临床病理参数的关系,用Spearman等级相关分析ABCG2、p16表达的相关性。结果与正常食管黏膜组织比较,ESCC组织中ABCG2蛋白阳性表达率高(P<0.05)、p16蛋白阳性表达率低(P<0.05)。与正常食管黏膜组织比较,ESCC组织中ABCG2 mRNA相对表达量高(P<0.05)、p16 mRNA相对表达量低(P<0.05)。ABCG2及p16蛋白阳性表达与食管鳞癌肿瘤浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄及肿瘤组织学分级无关(P均>0.05)。ESCC组织中ABCG2与p16蛋白表达呈负相关(r=-0.438,P<0.05)。结论 ABCG2在ESCC组织中呈高表达,p16呈低表达;二者可能协同作用参与ESCC的发生发展。

地高辛通过上调RGS2表达以减缓AngⅡ诱导小鼠高血压性心肌肥厚发生发展的研究

目的通过观察地高辛(Digoxin)干预血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的ApoE-/-小鼠高血压性心肌肥厚模型后,对G蛋白调节因子2(regulator of G protein signaling 2,RGS2)的影响,探讨地高辛治疗高血压性心肌肥厚的作用与可能的机制。方法 30只雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组、AngⅡ模型组和AngⅡ+Digoxin治疗组。所有小鼠从术前1d至术后处死前均接受0.5%二甲基亚砜或地高辛溶液腹腔注射治疗,并且在术后28d获取心脏组织,通过组织学检查、苏木精-伊红(HE)染色切片分析技术评定心肌组织形态学变化、RGS2的mRNA及蛋白表达水平来评价地高辛的作用。结果与AngⅡ模型组相比,AngⅡ+Digoxin组全心重量、左心室壁厚度、心肌细胞直径均明显减少(P<0.05或P<0.01),RGS2mRNA变化不明显,而蛋白表达增高(P<0.01),心肌肥厚明显减轻。同时检测小鼠在术前3d,手术当天,术后3、7、14、28d的血压,发现AngⅡ+Digoxin组与AngⅡ模型组比较,术后7d和14d血压下降(均P<0.05),术后28d则差异无统计学意义。结论地高辛可能通过上调ApoE-/-小鼠高血压心肌肥厚模型RGS2的表达,有效减轻心肌肥厚,这说明地高辛可能在抑制心肌细胞肥大中起重要作用。

卵巢上皮性癌P170g、GST-π、Top-Ⅱ表达与化疗耐药的关系

目的 :研究卵巢癌组织中P170 g、GST π、Top Ⅱ表达及其与耐药的关系。 方法 :采用免疫组化的方法测定 31例初治、19例术后复发者卵巢癌组织中P170 g、GST π、Top Ⅱ的表达频率。 结果 :①卵巢癌组织中P170 g、GST π、Top Ⅱ表达频率分别为 4 4 % ( 2 /50 )、60 % ( 30 /50 )、4 2 % ( 2 1/50 )。② 31例初治患者卵巢癌组织中三者阳性表达率分别为 35 5% ( 11/31)、4 8 4 % ( 15/31)、54 84 % ( 17/31)。 19例复发患者三者阳性表达率分别为 57 9% ( 11/19)、78 9% ( 15/19)、2 1 1% ( 4 /19)。初治与复发者中GST π、Top Ⅱ表达差异有显著性 (P <0 0 5)。③GST π阳性者化疗有效率 ( 36 67% )明显低于GST π阴性者 ( 70 % ) ,GST π阳性者预后较差。结论 :卵巢癌组织中GST π和Top Ⅱ表达与其化疗耐药有关 ,GST π可作为判断化疗敏感性及预后的因素之一。

p^(21)/waf1调节血管紧张素Ⅱ的抗增生作用

为了研究血管紧张素 (Ang )的抗内皮细胞增生作用及其分子生物学调节机制 ,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第 3代 ,用 Ang 培养并在不同时间计数细胞密度。用 TUNEL 或 EL ISA方法证明 Ang 或 CGP42 112 A诱导内皮细胞凋亡。用 RT- PCR和 Western Blot检测 p2 1 / waf1m RNA和 P2 1 蛋白的表达并测定条带的光密度。结果表明 ,在 Ang 培养后不同时间 ,细胞密度比对照减少 30 %左右 (P<0 .0 1)。Ang 作用后可以诱导典型的凋亡 ,阳性率极显著高于阴性对照组并具有剂量依赖性。Ang 组或 CGP42 112 A组的 p2 1 / waf1m RNA表达分别是对照组的 (4 73.6 9± 39.97) %和 (391.5 8± 48.2 4) %(P<0 .0 1)。Ang 组的 P2 1 蛋白表达比对照组极显著地增加并具有时间依赖性。认为 Ang 具有抗内皮细胞增生作用 ,其细胞内机制是同时诱导凋亡和 p2 1 / waf1m RNA与 P2 1 蛋白的高表达 ,使细胞发生 G1 期阻滞 ,增殖受抑。

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球内皮细胞炎性损伤过程中G蛋白耦联受体激酶表达变化

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球内皮细胞(GENC)炎性损伤过程中内皮细胞单层通透性及G蛋白耦联受体激酶2(GRK2)表达的变化,探讨GRK2在GENC损伤中的作用及其机制。方法体外分离、培养大鼠GENC,随机分为AngⅡ组(予10mg/mL AngⅡ)、单纯滤膜组和正常对照组(予等量培养基)。体外培养12h后,应用二室弥散系统检测GENC单层通透性,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRK2 mRNA表达水平,Western印迹法检测GRK2蛋白表达水平。结果 AngⅡ组的单层通透率为(99.62±0.71)%,显著高于单纯滤膜组的(27.78±0.48)%和正常对照组的(34.83±1.20)%(P值均<0.01),后两组间的差异也有统计学意义(P<0.05)。AngⅡ组的GRK2 mRNA和蛋白水平均显著高于正常对照组(P值分别<0.01、0.05)。结论 10mg/mL AngⅡ诱导GENC 12h,单层通透性增加,导致细胞炎性损伤,同时GRK2 mRNA和蛋白表达水平增加,表明GRK2可能在GENC炎性损伤中发挥一定的调控作用。

尾加压素Ⅱ及其受体在2型糖尿病小鼠肝脏中表达的变化

目的观察2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,2DM)小鼠肝脏中尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)及其受体表达的变化。方法应用血糖测定仪检测小鼠空腹血糖浓度,应用放射免疫方法检测血浆中UⅡ及胰岛素的含量,用免疫组化方法观察UⅡ在肝脏中的表达,应用RT-PCR法测定GPR14 mRNA在肝脏的表达。结果2DM小鼠空腹血糖及血浆胰岛素含量高于正常对照组,血浆UⅡ含量高于正常对照组,肝脏免疫活性UⅡ表达及其受体GPR14 mRNA的表达均明显高于正常对照小鼠。结论2 DM小鼠肝脏UⅡ表达增高可能是血浆UⅡ增高的来源之一,受体GPR14 mRNA表达也增高,其在2DM发病中的意义值得进一步探讨。

Co^(2+)离子在MgF_2和ZnF_2晶体中的各向异性g因子的理论研究

利用基于基团模型的 3d7离子在斜方对称中的高阶微扰公式计算了MgF2 和ZnF2 晶体中Co2 + 杂质中心的各向异性g因子 gx,gy 和gz.在计算中 ,考虑了共价效应 ,组态相互作用和斜方晶体场的贡献 ;而且与此相关的参量可由所研究的晶体的光谱和结构数据得到 .计算结果与实验符合较好 .

单纯疱疹病毒2型糖蛋白G的基因扩增、克隆及其B细胞抗原表位分析

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白G-2(gG-2)全长基因并对糖蛋白G-2进行B细胞抗原表位预测.方法:用PCR法扩增HSV-2的gG-2基因,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α株后测序.利用Lasergene,C lustal X等软件,进行B细胞抗原表位预测.结果:完成单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆.通过B细胞抗原表位分析,发现HSV-1的gG-1和HSV-2的gG-2氨基端的同源性很低.gG-2蛋白在“独特区”存在抗原指数非常强的抗原表位.结论:成功构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆,为单纯疱疹病毒感染的诊断试剂的研发及抗单纯疱疹病毒疫苗研究寻找更好的靶位点提供研究材料和参考.

尾加压素Ⅱ与2型糖尿病关系的研究进展

尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ)是从鱼尾部下垂体中分离出的血管活性肽,通过作用于其特异性受体G蛋白偶联受体(GPR)14参与多种生物学效应。初步研究表明,尾加压素Ⅱ的基因多态性和2型糖尿病的发生有关。尾加压素Ⅱ还可抑制胰岛素的释放,在葡萄糖代谢及2型糖尿病肾病的发病中起重要作用。对尾加压素Ⅱ的研究将为探讨2型糖尿病的发病机制和治疗方案提供新的线索。

鸡Ⅱ型胶原对胶原性关节炎大鼠肠系膜淋巴结β_2肾上腺素受体脱敏的影响

目的研究鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)对胶原性关节炎(C IA)大鼠肠系膜淋巴结(MLNs)中β2肾上腺素受体(β2-AR)、G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)、GRK3和β-arrestin1、2表达的影响。方法 SD大鼠随机分成5组:正常组、模型组和CC II(10、20、40μg/kg)3个剂量组,采用CCⅡ皮内注射诱导大鼠C IA模型,运用免疫组化法检测各组MLNs中β2-AR、GRK2、GRK3和β-arrestin1、2蛋白的表达。结果正常SD大鼠MLNs中β2-AR、GRK2、GRK3和β-arrestin1、2均有表达,模型组β-arrestin1、2表达明显高于正常组,而β2-AR、GRK2、GRK3低于正常组;CCⅡ(10、20、40μg/kg)组可显著下调β-arrestin1、2蛋白的表达,上调β2-AR、GRK2、GRK3蛋白的表达。结论 CCⅡ下调β-arrestin1、2蛋白的表达,上调β2-AR、GRK2、GRK3蛋白的表达,MLNs淋巴细胞β2-AR的脱敏异常在C IA的发病过程中可能发挥重要作用,CCⅡ可能通过调节MLNS淋巴细胞β2-AR的脱敏发挥治疗C IA的作用。

在小肠上皮细胞中稳定过表达ACE2的AAV血清型确立

血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2),是血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的同源物,可将血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)裂解成血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7),后者通过G蛋白偶联受体Mas发挥作用,作为肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)的调节轴,与经典级联信号ACE/AngII/AT1(AngII type 1 receptor)相拮抗[1]。ACE2/Ang1-7/Mas信号途径的激活对维持胰岛、肝脏、骨骼肌、脂肪组织的代谢稳定性至关重要[2]。

考虑V2G影响的光伏电动汽车充电站多目标容量配置优化方法

大量电动汽车接入微电网将带来很多问题。本文在考虑V2G的情况下,提出了两种充放电模式,构建了基于出行习惯的无序充放电模式和考虑峰谷电价的有序充放电模式的电动汽车充放电负荷模型,运用蒙特卡罗法对实例进行仿真验证。在基于V2G的两种不同充放电模式下,建立以能源利用率最大化和系统投资、运行成本最小化为目标函数的数学模型,给出了决策变量范围,功率平衡要求的约束条件及能量交换策略。运用NSGA-Ⅱ和NSGA-SA算法对实例分别进行仿真验证。通过对比两种不同模式的仿真结果,证明了考虑V2G的有序充放电模式在缓解电网压力、减少系统投资、提高能源效率等方面明显优于无序充放电模式。