IGF-Ⅱ对人肝癌细胞HepG2中抑癌基因p16和p53表达的影响

目的:观察胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)对人肝癌细胞HepG2中生物学表型变化及抑癌基因p16和p53表达的影响。方法:培养人肝癌细胞株HepG2,IGF-Ⅱ(25、50、100 ng/ml)作用于不同时间点(24、48、72 h),观察各组细胞生物学表型变化。IGF-Ⅱ(50 ng/ml)作用于HepG2 48 h后,分别采用Realtime PCR、Western blot及细胞免疫荧光法检测人肝癌细胞中p16和p53的表达情况,并进行定量分析。结果:IGF-Ⅱ诱导HepG2细胞形态发生一定改变;IGF-Ⅱ可增加HepG2细胞存活率及细胞增殖,但差异无统计学意义(P>0.05);IGF-Ⅱ(50 ng/ml)对HepG2细胞的克隆形成有一定的促进作用,但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,IGF-Ⅱ组HepG2细胞中p16和p53 mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05)。此外,p16和p53阳性表达主要位于细胞核。对照组、IGF-Ⅱ组HepG2细胞中p16荧光表达量分别为(100.00±11.55)%、(68.33±6.01)%,p53荧光表达量分别为(100.00±17.32)%、(57.67±10.11)%。与对照组相比,IGF-Ⅱ组HepG2细胞中p16及p53荧光表达量明显减弱(P<0.05)。结论:IGF-Ⅱ可通过诱导人肝癌细胞HepG2生物学表型的改变,下调抑癌基因p16和p53的mRNA及蛋白表达,继而发挥促进肝癌进展的作用。

2017-2022年北京市某区GⅡ.2[P16]型诺如病毒感染疫情的分子流行病学特征分析

目的了解2017—2022年北京市某区GⅡ.2[P16]诺如病毒感染疫情的分子流行特征。方法收集2017年1月至2022年12月北京市某区诺如病毒相关疫情信息及样本,应用实时荧光聚合酶链式反应(PCR)进行诺如病毒检测,阳性样本通过逆转录PCR扩增、测序和序列分析;并获得2022年诺如病毒的3株GⅡ.2[P16]全基因组序列。结果2017年1月至2022年12月,共报告诺如病毒暴发137起,83起成功获得基因分型,其中GⅡ.2[P16]占35.04%(48/137),为主要基因型,其季节高峰在冬春季,主要发生在托幼机构和小学。根据基因组进化结果分析,本研究2022年3株GⅡ.2[P16]基因组在VP1与GⅡ.2[P16]亚群(2019—2022)同属一簇;RdRp区与GⅡ.2[P16]亚群(2018—2022)同属一簇。在非结构蛋白P48出现3个氨基酸变异,包括P44S、M163 T和V227I,在RdRp区出现一个氨基酸位点变异,为S1645C。结论GⅡ.2[P16]是2017年1月至2022年12月引起北京市某区诺如病毒疫情的优势流行株,持续监测和基因组分析有助于全面了解流行株变异和进化机制。

我国食源性诺如病毒GⅡ.2[P2]型毒株基因组结构与衣壳蛋白功能研究

食源性诺如病毒(Norovirus)是引起全球食品安全事件的主要微生物病原,具有丰富的遗传多样性,基因型较复杂,近年来GⅡ.2逐渐成为我国主要流行基因型之一。为了解食源性诺如病毒GⅡ.2型变异特点,该研究以2015年在广州地区检出的GⅡ.2[P2]型GZ2015-L335毒株为对象,对其基因组结构及衣壳蛋白功能进行了系统表征。该毒株基因全长为7 496 bp,在线基因分型结果表明其为GⅡ.2[P2]基因型。通过克隆其衣壳蛋白VP1基因,借助杆状病毒表达系统获取重组VP1蛋白,并采用氯化铯密度梯度离心法进行纯化。SDS-PAGE和Western blot实验结果表明重组VP1蛋白分子量约为58 ku;透射电镜结果显示该蛋白可自组装形成直径约为30 nm的病毒样颗粒(Virus-like Particle,VLP);ELISA结果显示该VLP与抗GⅡ.2[P]衣壳P颗粒血清具有较高结合活性。此外,受体结合实验证实该VLP与A/B/O等分泌型及非分泌型唾液呈现出广泛的结合作用。该研究对GⅡ.2[P2]型GZ2015-L335毒株基因组结构进行了系统分析,成功制备并表征了其病毒样颗粒,结果将为食源性诺如病毒的高效抗体研制及新型检测技术研发提供支撑。

GⅡ.2[P16]型诺如病毒P蛋白的可溶表达、纯化及其抗原特性分析

目的获得可溶表达的GⅡ.2[P16]型诺如病毒(norovirus,NV)P蛋白,并分析其抗原特性。方法通过优化合成GⅡ.2[P16]型NV P蛋白基因并克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组质粒GⅡ.2-NV-pET-28a,转化DH5α感受态细胞,通过对表达菌种的优化,使P蛋白以可溶性形式表达。表达的P蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,采用Western blot法检测纯化蛋白抗原性;体积排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SECHPLC)法检测抗原纯度;ELISA法鉴定抗原抗体结合能力。结果重组BL21 Star(DE3)pLySs工程菌目的蛋白以可溶形式高表达,经亲和层析纯化后,GⅡ.2 P蛋白纯度为95.53%,且抗原性较好。结论用原核表达菌种成功制备了可溶性表达的NV P蛋白,并明确了P蛋白的抗原性,为GⅡ.2[P16]型NV检测试剂盒和重组亚单位疫苗的研制奠定了基础。

2013-2019年浙江省湖州市急性胃肠炎病例GⅡ.P7-GⅡ.6型诺如病毒基因特征分析

目的分析2013—2019年浙江省湖州市急性胃肠炎病例诺如病毒基因特征,为疾病监测和防控提供参考。方法采用荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对2013年12月、2014年4、12月、2019年3月发生的4起学校/托幼机构急性胃肠炎患者送检粪便标本进行诺如病毒核酸检测。采用RT-PCR法对核酸阳性标本的多聚酶和衣壳蛋白部分区域进行扩增,并对扩增产物进行序列测定。利用在线分型工具和系统进化分析对病原序列进行基因特征分析。结果共计28份标本中分别有5、4、2、5份为GⅡ型诺如病毒核酸阳性,阳性率为57.1%(16/28)。4次疫情各有1份标本测序成功;在线分型和系统进化分支分析显示,4起疫情的病原均为GⅡ.P7-GⅡ.6重组型诺如病毒,但进化分支不同,其中2013年疫情标本检出GⅡ.P7-GⅡ.6c型;2014年2起疫情均为GⅡ.P7-GⅡ.6b型,2019年疫情中检出的GⅡ.P7-GⅡ.6a型。结论GⅡ.P7-GⅡ.6型重组型诺如病毒是引起湖州市2013—2019年4起急性胃肠炎暴发疫情的病原体,每年毒株存在一定基因进化分支的差异。鉴于该病毒在全球范围内具有持续和广泛的流行能力,应进一步加强对该型别重组型诺如病毒的监测。

长沙市诺如病毒暴发疫情中GⅡ.2[P16]型全基因组分子进化特征分析

目的 对长沙市2020年急性胃肠炎暴发疫情中诺如病毒GⅡ.2[P16]型进行全基因组序列测定以及遗传进化特征分析。方法 采集2020年诺如病毒暴发疫情标本,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增开放阅读框(ORF)1和ORF 2连接区进行分型鉴定。GⅡ.2[P16]型阳性标本在二代测序Miseq平台进行测序。测序结果进行序列比对及进化分析。结果 2020年本市共发生诺如病毒暴发疫情29起,共采集标本277份,阳性检出率为44.04%(122/277)。分型鉴定发现诺如病毒GⅡ.2[P16]型占比45.08%(55/122)。从疫情分布月份和机构来看,9—12月为暴发高峰,疫情发生在幼儿园和学校占比89.66%(26/29)。对53份GⅡ.2[P16]型ORF1和ORF2连接区序列进行进化树分析发现毒株处于多个分支,序列之间的同源性为98.5%~100%。对4株GⅡ.2[P16]型全基因组序列进行同源性比较发现毒株之间的同源性为98.5%~99.5%,与GⅡ.2[P16]2016-2017(KY771081)毒株同源性为97.9%~98.2%,进化树处于不同亚分支。RdRp区域氨基酸位点发生T396A和T464A突变,HBGA结合位点保守未发生突变。结论 长沙地区诺如病毒暴发疫情中以GⅡ.2[P16]型突变株传播为主,毒株由GⅡ.2[P16]2016-2017持续传播进化而来,并进化为另一个分支。本地区暴发的诺如病毒疫情主要发生在学校以及幼托机构,应持续加强对诺如病毒的监测。

cyclin E、p16ink4、ki67的高度表达对宫颈癌高危人群筛查的意义

目的:探讨宫颈脱落细胞中cyclinE、p1 6ink4、ki6 7的高度表达对宫颈癌高危人群筛查的意义。方法:采用免疫组织化学方法对78例宫颈脱落细胞标本(不明意义的鳞状上皮非典型增生ASCUS 1 2例、宫颈上皮内瘤样病变CIN11 7例、CINⅡ～Ⅲ3 8例、浸润癌1 1例)进行cyclinE、p1 6ink4、ki6 7检测,实验数据进行χ2 检验及四格表Fisher确切概率计算。结果:cyclinE、p1 6ink 4、ki6 7在各级宫颈癌中的阳性率均较ASCUS组差异有非常显著意义(P <0. 0 0 5 ) ;cyclinE在CIN1 的表达率较其它各组也有非常显著意义( 91.4%均P <0.0 1 ) ;p1 6ink4、ki6 7均随着宫颈上皮细胞损伤程度加重而表达上升(P <0.0 0 5 ) ,在浸润癌阳性率达到最高(分别为1 0 0 %和90.9% )。CIN1 组3指标特异度均较高(分别为91.7%、1 0 0 %和91 .7% ) ,灵敏度cyclinE最高( 94. 1 % ) ,p1 6ink4与ki6 7均较低(分别为5 8.8%和4 7.1 % )。结论:采用宫颈脱落细胞检测cyclinE、p1 6ink 4、ki6 7中的1项或多项作为诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,对降低筛查的假阳性和假阴性率,提高筛查的灵敏度和特异度具有重要意义。

一起GⅡ.4[P16]型诺如病毒感染暴发疫情调查

目的分析2021年山东省某小区一起诺如病毒感染暴发疫情流行因素,为制定有效的防控措施提供科学依据。方法采用现场流行病学方法调查、分析疾病的流行情况,采集水样本、典型病例的粪便或呕吐物、密切接触者的肛拭子标本进行胃肠炎病毒检测,对阳性样本进行基因分型。结果搜索到病例69例(9例为小区内幼儿园儿童,60例为社区居民),临床表现主要为呕吐(76.81%),腹泻(69.57%)。0~5岁儿童罹患率最高(21.18%)。17份病例标本和2份密切接触者标本GⅡ组诺如病毒阳性,基因型均为GⅡ.4[P16]。结论本次事件是由GⅡ.4[P16]型诺如病毒引起的暴发疫情,是由患病儿童呕吐物造成环境污染,社区人员密切接触导致,及时识别和妥善处置是疫情防控的关键。

计及电气热综合需求响应的区域综合能源系统优化调度

区域综合能源系统(Regional Integrated Energy System,RIES)是解决社会能源利用效率低以及可再生清洁能源难以消纳问题的有效途径之一。首先建立了包含风电、多种储能以及电转气(Power-to-Gas,P2G)设备的RIES模型。针对电、气、热负荷柔性特征和可调度价值,结合三种负荷在RIES中形成的耦合关系,提出计及电-气-热多种负荷的综合需求响应模型。同时采用典型场景集考虑风电出力的不确定性,建立区域综合能源系统优化调度模型。该模型以综合运行成本最少、碳排放量最小、能效利用率最高为优化目标,利用非支配排序遗传算法(NSGA-II)进行求解并输出Pareto最优前沿解集。仿真算例设置了4种场景,分析电、气、热需求响应及P2G、储能设备接入对区域综合能源系统运行优化的影响。结果验证所建立多目标优化调度模型既能够提高能源利用效率,也能保证系统的环保经济运行。

2015年-2017年湖州诺如病毒感染的流行特征研究

目的研究湖州地区诺如病毒(NoV)的流行病学模式和遗传特征。方法2015年1月-2017年12月,收集急性胃肠炎患者的粪便标本,进行实时RT-PCR(qPCR)检测NoV。RT-PCR用于基因组扩增和序列测定。病毒基因型别使用在线NoV分型工具(http://www.rivm.nl/mpf/norovirus/typingtool)分型。结果NoV感染的总体流行率为23.7%(414/1757)。在414个NoV阳性标本中,393个被鉴定为NoV GⅡ,11个属于NoV GⅠ,10个是NoV GⅠ和GⅡ共同感染。共235份标本成功测序,这3年的主要流行型别是GⅡ.Pe-GⅡ.4 Sydney2012和GⅡ.P17-GⅡ.17,2017年还出现新的流行优势株GⅡ.P16-GⅡ.2。全年均检测到NoV感染,流行高峰发生在每年的冬春期间。结论在2014年10月GⅡ.17首次在湖州出现后,稳步取代了以前流行的GⅡ.4 Sydney 2012菌株。但在2016年GⅡ.4 Sydney 2012又回到主导地位,2017年出现新的流行优势株GⅡ.P16-GⅡ.2。

吉林省一起急性胃肠炎暴发中诺如病毒的基因特征

目的研究2017年一起暴发疫情中诺如病毒(Norovirus,No V)的基因特征。方法对25份来自2017年急性胃肠炎暴发中采集的病例标本进行No V核酸检测,将检测阳性标本的聚合酶区和衣壳区基因进行扩增,对序列进行同源比对和系统进化分析。结果得到GⅡ.P16/GⅡ.2亚型18例,GⅡ.P16/GⅡ.4亚型1例,GⅠ.Pc/GⅠ.5亚型5例,GⅠ.Pd/GⅠ.3d亚型1例,GⅠ.Pd/GⅠ.3a亚型1例。将GⅡ.P16/GⅡ.2亚型和GⅡ.P16/GⅡ.4亚型完整的VP1区扩增,得到GⅡ.P16/GⅡ.2亚型序列5份,GⅡ.P16/GⅡ.4亚型序列1份,经系统进化树分析表明与国内外近期引起暴发流行的毒株为同一祖先。结论吉林省此次No V感染的基因型呈多样性,以GⅡ.P16/GⅡ.2亚型为主,该基因型近期在国内外引起大规模暴发流行,提示应将No V作为急性胃肠炎防控的重点病原。