冠心病患者ABCG1、ANGPTL2启动子区甲基化与心力衰竭发生的关系研究

目的分析冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G1(ABCG1)、血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)启动子区甲基化与心力衰竭(心衰)发生的关系。方法选取2020年3月至2022年3月于湖南省第二人民医院收治的冠心病患者120例。根据是否发生心衰,将患者分为合并心衰组(n=26)和不合并心衰组(n=94)。采用全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。采用心脏超声检查患者左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)水平。特异性PCR检测ABCG1和ANGPTL2基因甲基化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测ABCG1和ANGPTL2基因mRNA表达水平。Logistic回归分析探讨影响冠心病患者发生心衰的因素。结果两组患者LDL-C、LVEF、LVEDD、LVESD、ABCG1、ANGPTL2基因启动子区甲基化等方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LVESD、LVEF、ABCG1甲基化和ANGPTL2甲基化是冠心病患者发生心衰的危险因素。ABCG1甲基化、ANGPLT2甲基化患者中LVESD水平均高于未甲基化患者(P<0.05)。ABCG1甲基化、ANGPLT2甲基化患者中LVEF水平均低于未甲基化患者(P<0.05)。合并组ABCG1、ANGPTL2基因甲基化的患者mRNA的表达量明显低于非甲基化患者(P<0.05)。结论ABCG1和ANGPTL2基因甲基化是冠心病患者发生心衰的危险因素,检测上述两基因甲基化状态可为诊治冠心病心衰提供理论支持。

G蛋白偶联受体119激动剂在2型糖尿病治疗中的应用

在世界范围内,糖尿病已经逐渐成为威胁人类健康与生命的慢性代谢性疾病,其中2型糖尿病占90％.2型糖尿病主要病理表现为胰岛素抵抗和由胰岛功能细胞功能失调所致的胰岛素分泌相对不足[1],形成持续高血糖,并可产生多种严重并发症[2].目前,临床使用的抗糖尿病药物均具有不同程度的不良反应,作用于新靶点、且对胰岛β细胞具有保护作用的新型抗糖尿病药物可避免传统抗糖尿病药物的不良反应,其中G蛋白偶联受体119（GPR119）为抗糖尿病治疗的新靶点,为临床糖尿病治疗提供了新方向,现综述如下.

免疫共沉淀结合微流控芯片技术筛选GBLP相互作用蛋白

为了进一步阐明G蛋白β亚基2样1蛋白(guanine nucleotide-binding protein subunit beta 2-like 1,GBLP)在普萘洛尔(propranolol,PRO)生物学效应发生机制中的作用,采用免疫共沉淀法结合液相色谱-芯片-离子阱串联质谱(HPLC-CHIP-IT-MS/MS)系统筛选并鉴定人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中的GBLP相互作用蛋白.结果表明,有7种蛋白与GBLP存在相互作用,分别为酪蛋白α-S1、酪蛋白α-S2、β酪蛋白、桥粒芯蛋白1前体、α-烯醇化酶、果糖二磷酸醛缩酶C、硫氧还原蛋白过氧化物酶2.这些蛋白的生物信息学检索结果提示,GBLP可能参与了细胞的能量代谢调节和抗氧化机制,与普萘洛尔的生物学效应发生机制密切相关.

人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测

目的构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD融合蛋白,并检测其活性。方法用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体。重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,最后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用。结果构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1Rβ-PKD可以和MEMO相互作用。结论成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白。

MZF1通过调控PLA2G6参与肾透明细胞癌的进程

目的探讨髓样锌指蛋白1(recombinant human myeloid zinc finger 1,MZF1)在肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)中的潜在临床意义,以及靶向治疗的潜在基因。方法佳木斯大学基础医学院和齐齐哈尔市第一医院自2022年10月—2023年5月从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载TCGA KIRC RNA-Seq基因表达数据和UCSC Xena数据库的临床材料。用荧光定量PCR和Western blot检测MZF1和钙非依赖性磷脂酶A2G6(calcium-independent phospholipase A2G6,PLA2G6)的mRNA和蛋白表达水平。使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞生存能力。结果肾脏细胞系HK-2中MZF1的mRNA、蛋白水平明显低于OSRC-2、786-O中mRNA水平,差异有统计学意义(P<0.05)。MZF1si 1组和MZF1si 2组的MZF1 mRNA、蛋白水平明显低于blank组,差异有统计学意义(P<0.05)。OSRC-2与786-O细胞中si-MZF1组OD值均小于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾脏细胞系HK-2中PLA2G6的mRNA、蛋白水平明显低于OSRC-2、786-O中水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与OSRC-2组相比,ov-MZF1 OSRC-2组PLA2G6的mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),si-MZF1 OSRC-2组PLA2G6的mRNA水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与OSRC-2组相比,ov-MZF1 OSRC-2组PLA2G6的蛋白水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),si-MZF1 OSRC-2组PLA2G6的蛋白水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Empty vector+sh-NC组相比,OE-MZF1+sh-NC组的OD值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),OE-MZF1+sh-PLA2G6组的OD值明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MZF1通过调控PLA2G6参与了KIRC的进程。

PPI1诱导人宫颈癌HeLa细胞G2／M期停滞及机制研究

目的:探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对人宫颈癌细胞系HeLa细胞周期的影响及其作用机制。方法:分别将PPI1野生型和短片段突变活化型基因通过脂质体介导转染人宫颈癌HeLa细胞,用RT-PCR和Western blot鉴定目的基因的表达;用流式细胞术分析瞬时转染HeLa细胞的细胞周期。对稳定转染的HeLa细胞用脱氧胸苷处理,通过流式细胞术观察PPI1对同步化HeLa细胞的细胞周期进展的影响。用免疫印迹分析细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:野生型和突变活化型PPI1在HeLa细胞中均能有效表达。突变活化型PPI1基因的瞬时转染可使HeLa细胞G2/M期比例明显升高。经脱氧胸苷处理过的同步化的稳定转染的HeLa细胞中,突变活化型和野生型PPI1均可使HeLa细胞停滞在G2/M期的时间长于对照组,而且前者更明显。免疫印迹显示:突变活化型PPI1瞬时表达48h后,cyclin A、cyclin B1、p53和p21表达上调。经脱氧胸苷同步化并恢复正常培养基后,稳定表达突变活化型PPI1的细胞cyclin B1在10.5和12h,p53在6、7.5、9和10.5h表达明显增强;稳定表达野生型PPI1的细胞cyclin B1在10.5h的表达也比对照组明显增强。结论:突变活化型的Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1可诱导宫颈癌HeLa细胞G2/M期停滞,它与cyclin A和cyclin B1表达上调及cyclin B1降解滞后有关,而G2/M期停滞的维持与p53和p21表达上调有关。

rhIL-1α和rhTNF-α对人成纤维滑膜细胞PGE_2受体和Gαs的影响及芍药苷的作用

目的探讨rhIL-1α和rhTNF-α对人成纤维样滑膜细胞(FLS)PGE2受体(EP2)及Gαs表达的影响及芍药苷(Pae)的作用。方法体外培养人FLS,使用不同浓度的rhIL-1α和rhTNF-α刺激人FLS,观察EP2及Gαs蛋白表达的情况,观察Pae对其的影响。采用免疫荧光标记法结合激光共聚焦显微镜分析技术检测人FLS的EP2表达,Western blot检测Gαs表达。结果 rhIL-1α(0.1、1、10μg/L)和rhTNF-α(0.2、2、20μg/L)明显降低人FLS EP2和Gαs表达,Pae(10-8、10-7、10-6、10-5mol/L)可上调人FLS的EP2和Gαs表达。结论 Pae恢复rhIL-1α和rhTNF-α刺激后EP2和Gαs的表达可能是其抑制滑膜细胞增殖和亢进分泌功能的分子机制之一。

干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制

目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。

黄连素促进2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽分泌的分子机制

目的探究黄连素对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽-1(GLP-1)分泌的影响,为进一步明确黄连素抗糖尿病分子机制提供理论基础。方法通过高脂高糖饮食及注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、模型对照组、利拉鲁肽组、小剂量及大剂量黄连素组。血糖仪检测不同时段血糖值。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测GLP-1及糖化血红蛋白含量。定量多聚酶链反应(Q-PCR)法检测目标菌的含量。苏木精-伊红(HE)染色法观察胰腺组织形态。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠组织胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)、短链脂肪酸受体43(GPR43)、G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)、胰高血糖素原(GCG)、激素原转化酶1/3(PC1/3)mRNA表达。免疫组化法检测胰腺组织胰岛素及核因子κB(NF-κB)蛋白表达。Western blotting检测GLP-1蛋白表达。结果与模型对照组比较,黄连素显著增加梭杆菌属、乳酸杆菌属含量,改善口服葡萄糖耐受能力,减少糖化血红蛋白含量,上调结肠TGR5、GPR43、GCG、PC1/3基因表达,抑制NF-κB蛋白表达,促进GLP-1及胰岛素分泌。结论黄连素可能是通过增加GPR43及TGR5活性,上调GCG及PC1/3 mRNA表达,促进GLP-1以及胰岛素分泌,降低血糖。

Gβ_1γ_2蛋白的纯化及其与腺苷酸环化酶的互作关系

对G蛋白β1γ2亚基及偶联组分在信号传导中的作用进行了初步研究.以离体昆虫细胞Sf9(Spodoptera frugiperda,秋粘虫卵巢细胞)或H5(Trichoplusiani,粉纹夜蛾细胞)为生物反应器,高效表达了G蛋白β1γ2亚基.用Ni—NTA亲和层析柱,经快速蛋白纯化技术(FPLC)获得高纯度的Gβ1γ2.活性测定表明,纯化的Gβ1γ2能显著刺激腺苷酸环化酶(AC2)的活力.应用基于表面胞质团共振现象的BIAcore技术,采用生物传感芯片NTA(biosensor chip NTA)直接证明腺苷酸环化酶2(AC2)的胞质末端C2区域为G蛋白β1γ2亚基的结合区,从而明确了二者互作的活性位点和结合位点同位于该区域.

黄连温胆汤调控SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路干预2型糖尿病模型大鼠的作用机制

目的:基于SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路研究黄连温胆汤对2型糖尿病模型大鼠的干预机制。方法:选择SPF级SD雄性大鼠80只,先随机分10只为正常对照组,其余大鼠以高糖高脂乳剂10 mL/kg灌胃,监测血糖1次/w, 8 w后,腹腔注射STZ 35 mg/kg诱导2型糖尿病模型,5 d后选取空腹血糖值大于11.10 mmol/L造模成功的大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍0.25 g/kg组和黄连温胆汤3、6、12 g/kg组。各组灌胃给予相应的药物或生理盐水,1次/d,连续给药4 w后,取材检测。生化试剂检测大鼠葡萄糖耐量(OGTT)、血脂全套指标;气相色谱法测定大鼠结肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)含量;ELISA法检测大鼠结肠组织GLP1、PYY的含量;RT-qPCR法检测大鼠结肠组织G蛋白偶联受体41(Gpr41)、Gpr43、胰高血糖素样肽-1(Glp1)、肽YY(Pyy) mRNA的表达;Western blot法检测大鼠结肠组织GPR41、GLP1、PYY蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠OGTT试验中血糖含量明显升高,血脂中TC、TG、LDL-C、HbA1c含量显著升高,HDL-C含量显著下降(P<0.01);结肠内容物SCFAs中乙酸、丙酸、正丁酸的含量均显著下降(P<0.01);结肠组织GLP1、PYY含量显著降低,Gpr41、Gpr43、Glp1、Pyy mRNA和GPR41、GLP1、PYY蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,黄连温胆汤3、6、12 g/kg组和二甲双胍0.25 g/kg组大鼠OGTT血糖含量明显降低,血脂中TC、TG、LDL-C、HbA1c含量明显降低,HDL-C含量明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠内容物乙酸、丙酸、正丁酸的含量明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠组织GLP1、PYY含量明显升高,Gpr41、Gpr43、Glp1、Pyy mRNA和GPR41、GLP1、PYY蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:黄连温胆汤抗2型糖尿病作用机制可能与增加SCFAs,调控SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路,促进GLP1、PYY的分泌,降低体内血糖、血脂,改善机体胰岛素抵抗相关。

新型G蛋白偶联受体40激动剂SZZ15-11的抗糖尿病作用及机制初探

目的探讨G蛋白偶联受体(GPR) 40激动剂SZZ15-11的抗糖尿病作用及机制。方法采用基于荧光素酶报告基因的转录激活检测方法考察化合物的GPR40激活作用;用小鼠原代胰岛评价化合物的促胰岛素分泌能力;用正常ICR小鼠单次给药,评价其对血糖、血胰岛素和胰高血糖素样肽-1分泌及胃排空的影响,采用自发2型糖尿病KKAy小鼠模型长期给药,评价其对血糖的影响。结果化合物SZZ15-11对GPR40激动的EC_(50)为1. 2μmol·L^(-1),在10μmol·L^(-1)浓度下可使高葡萄糖(16. 8 mmol·L^(-1))条件下原代胰岛的胰岛素分泌增加61. 1%(P <0. 05);单次给予该化合物(50 mg·kg^(-1))可显著降低正常ICR小鼠口服葡萄糖负荷后血糖的水平(P <0. 05),使血糖曲线下面积(AUC)下降13. 1%,使正常小鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加46. 6%(P <0. 05);此外还可显著延缓正常小鼠胃排空速率,使小鼠血清对乙酰氨基酚浓度-时间曲线下面积降低(P <0. 05);在50和100 mg·kg^(-1)剂量下,能使正常小鼠葡萄糖负荷后的血GLP-1水平增加(P <0. 05);自发性2型糖尿病KKAy小鼠连续灌胃(50和100 mg·kg^(-1)) 4周,其空腹血糖显著降低(P <0. 05),糖化血红蛋白水平降低(P <0. 01和P <0. 05)。结论新型GPR40激动剂SZZ15-11可葡萄糖依赖性地促进胰岛素和GLP-1分泌,从而改善2型糖尿病模型小鼠的糖代谢,是一个潜在的抗糖尿病候选药物,值得进一步研究。

大鳞副泥鳅和泥鳅GNB2L1基因的克隆、表达及系统进化分析

由G蛋白D2亚基类似物1基因（GNB2L1）编码的蛋白激酶C受体（RACKl）是一个高度保守的锚定蛋白，属于WD40结构域蛋白家族成员，在细胞信号转导等生命过程中发挥着重要作用。本文采用RACE技术和基因克隆技术分别对大鳞副泥鳅（Paramisgurnusdabryanus）和泥鳅（Misgurnusanguillicaudatus）精巢组织的GNB2L1基因cDNA序列进行了克隆。序列分析表明，大鳞副泥鳅GNB2L1基因cDNA序列全长1115bp，开放阅读框（ORF）长965bp，编码317个氨基酸；泥鳅GNB2L1基因cDNA序列的开放阅读框长965bp，编码317个氨基酸；两种泥鳅GNB2L1基因编码的蛋白与其他鱼类的RACK1蛋白的同源性为94％～97％，且不同进化地位物种的GNB2L1基因均由8个外显子和7个内含子组成。以GNB2LI基因为标记基因，构建的鱼类系统发育树显示，大鳞副泥鳅和泥鳅在进化上的亲缘关系最近。RT．PCR结果显示，GNB2LI基因在大鳞副泥鳅成体各组织中均有表达，且在脑组织的表达量高于其他组织。以上结果表明，GNB2L1基因为一个进化保守基因，可能在大鳞副泥鳅的细胞活动中发挥着重要作用。

BRCC3/NLRP3促进子宫内膜异位症炎癌转化中的机制

目的:探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的活化在子宫内膜异位症(EMT)进展为EMT相关性卵巢癌(EAOC)过程中的作用及其机制。方法:选取2018年4月至2019年6月上海市长宁区幼保健院收治的EAOC、EMT、正常子宫内膜(CON组)组织标本各15例及患者的临床资料,利用免疫组织化学染色法、WB法检测EAOC、EMT和CON组织中NLRP3、caspase-1和IL-1β及含BRCA1/BRCA2的复杂亚基3(BRCC3)的表达水平。构建过表达BRCC3质粒和si-NLRP3质粒并转染EMT细胞CRL-7566,通过WB法检测转染后细胞中BRCC3蛋白的表达水平,利用MTT法、流式细胞术及Transwell实验分别检测转染后细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭能力的变化。对过表达BRCC3组细胞进行干扰NLRP3实验,通过WB法检测干扰后BRCC3和NLRP3蛋白的表达水平,检测干扰后细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭能力的变化。结果:EAOC和EMT组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β和BRCC3的表达水平较CON组均呈明显升高(均P<0.01),且EAOC组织中NLRP3与BRCC3的表达呈正相关(r=0.65,P<0.01)。在CRL-7566细胞中过表达BRCC3显著促进细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡(均P<0.01),敲减NLRP3则抑制CRL-7566细胞的上述表型(均P<0.01),过表达BRCC3增强NLRP3的表达水平(P<0.01),而干扰BRCC3则抑制NLRP3表达(P<0.01);干扰NLRP3可以部分逆转BRCC3对细胞凋亡的抑制作用(P<0.01)、对细胞迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.01)的促进作用。结论:EAOC和EMT组织中NLRP3和BRCC3均呈高表达,过表达BRCC3可促进CRL-7566细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡,与EMT向EAOC转化有关,BRCC3/NLRP3是潜在的EAOC炎癌转化预测标志物及治疗靶点。

基于生物信息学探讨GNB2L1基因在肝癌中的表达及其临床价值

目的基于生物信息学数据库分析G蛋白β2亚基类似物1(GNB2L1)基因在肝癌中的表达情况,评估其在肝癌发生、发展中的作用及其与生存率的关系。方法基于GEPIA、UALCAN和HPA数据库分析GNB2L1在肝癌中的表达水平以及其与生存率的关系;cBioPortal数据库分析GNB2L1基因的突变情况及其对生存率的影响;LinkedOmics数据库分析GNB2L1在肝癌中的相关基因,同时进行基因本体论(GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书通路富集分析;STRING数据库构建GNB2L1蛋白相互作用网络;TIMER数据库分析GNB2L1基因表达与肝癌免疫浸润的关系。基于mRNA测序技术分析肝癌患者和健康对照血浆血小板中GNB2L1表达的差异。组间数据比较采用独立样本t检验。结果GNB2L1在肝癌组织中表达水平显著升高(P<0.05),其表达与体质量、肝癌分级和分期之间均存在显著相关性(P值均<0.05);GNB2L1低表达组的总体生存率更高(P<0.001)。GNB2L1及其相关基因可能与生物过程调节、代谢过程、蛋白结合、氧化磷酸化、JAK-STAT信号通路、Ras信号通路等相关。GNB2L1与核糖体蛋白S12、S11、L19等存在相互作用,参与了肝脏再生、内源性凋亡信号通路的正性调控等多个生物学过程。GNB2L1表达水平与肝癌中多种免疫细胞的浸润程度均有正相关(P值均<0.05),Cox回归分析结果显示GNB2L1是肝癌患者较低生存率的独立危险因素[风险比值比(95%可信区间)为1.456(1.034~2.051),P=0.031]。肝癌患者血小板中GNB2L1的表达水平显著高于健康对照组(10.40±1.36与9.58±0.51,t=2.194,P=0.037)。结论GNB2L1在肝癌中高表达且与生存率密切相关,GNB2L1可能是肝癌的潜在生物标志物。

基于GPR119/cAMP/GLP-1通路探讨葛根芩连汤的降糖机制

目的:探讨葛根芩连汤(GGQL)对肠道上皮细胞增殖和凋亡的影响,并通过其对细胞环磷酸腺苷(cAMP),G蛋白偶联受体119(GPR119)表达的影响探讨其对胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的影响和潜在降糖机制。方法:对25只Wistar大鼠按生药23 g·kg^(-1),每天2次予以葛根芩连汤灌胃,每只大鼠每天灌胃6 mL,以制备含葛根芩连汤的血清,连续给药7次。用不同浓度葛根芩连汤含药血清(1%,2.5%,5%,7.5%,10%)培养肠道上皮L细胞系NCI-H716细胞;细胞增殖与活性检测(CCK-8)评估细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中GLP-1,cAMP含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测GLP-1,GPR119 mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GLP-1,GPR119蛋白表达水平。结果:与空白组比较,葛根芩连汤明显减少了NCI-H716细胞的增殖(P<0.05),且随着葛根芩连汤浓度的增加,其抑制作用更加明显;每种浓度的葛根芩连汤均明显促进NCI-H716细胞凋亡(P<0.05),并且与空白组比较,葛根芩连汤明显提高cAMP,GLP-1,GPR119的表达(P<0.05)。葛根芩连汤的作用与其浓度呈正相关,其中10%葛根芩连汤表现出最好的作用。结论:葛根芩连汤可有效抑制NCI-H716的增殖并促进其凋亡,其可能通过上调cAMP,GPR119的表达而促进GLP-1的分泌。

抗2型糖尿病药物靶标计量分析及趋势研究

本文借助Thomson Reuters Pharma信息平台,以不同靶标药物在各研发阶段的数量分布为主要参考指标,辅以相关文献和典型药物资料,对抗2型糖尿病药物的研发现状进行了统计、分析和研究(截至2012年5月),并对其可能的发展趋势和方向做出了判断和预测。得出以下主要结论:①IR是目前2型糖尿病常用药物普遍采用的靶标,但在研药物靶标正呈现多样化。②GLP-1受体和DPP-IV是新药开发最具潜力的靶标,大批新药项目在研,已上市药物也取得了巨大成功。③PPAR靶标药物已被大量研究用于2型糖尿病的治疗,在研药物关注瞄准两个以上PPAR靶点的多重激动剂,然而,一大批终止研发的PPAR新药项目以及对PPAR药物安全性的忧虑使PPAR靶标药物的研发前景蒙上阴影。④SGLT2靶标药物已有多例进入III期临床试验,距离成功只有一步,考虑到该类药物终止研发的数量较少以及还未发现明显的不良反应,SGLT2靶标药物具有较大的研发空间和良好的发展前景。⑤GK和GPR119是抗2型糖尿病领域的新兴靶标,最高研发阶段为II期临床试验。

桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞Toll-MyD88信号通路炎性信号表达的影响

目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、钙结合蛋白S100A8的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性;Western-Blot法检测髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号衔接蛋白、核因子κB酶抑制剂-β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKK-β)、核因子κB抑制蛋白α亚基(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKB-α)表达水平;逆转录PCR检测Toll样受体-2(toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4mRNA的表达。结果:尿酸钠混悬液诱导巨噬细胞造模2 h后,模型细胞对照组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、S100A8含量,NF-κB活性,My D88、IKK-β蛋白表达及TLR-2、TLR-4 mRNA表达较正常细胞对照组显著增高(P<0.05),IKB-α表达较正常细胞对照组显著降低(P<0.05);与模型细胞对照组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组细胞表达TLR-2、TLR-4 mRNA水平显著降低(P<0.05);在不加受体抑制剂的实验中,桂枝芍药知母汤各剂量组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量,My D88、IKK-β蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高剂量组NF-κB活性显著降低(P<0.05),高剂量组S100A8、IKB-α表达水平显著升高(P<0.05)。结论:桂枝芍药知母汤抗炎作用机制与降低TLR-2、TLR-4 mRNA表达,抑制My D88、IKK-β蛋白表达,增加S100A8、IKB-α蛋白表达水平,抑制NF-κB激活,进而降低Toll-My D88信号通路相关炎性因子表达密切有关。