过度表达G蛋白调节子16促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖

目的 探讨 G蛋白调节子 16 (RGS16 )对大鼠胶质瘤C6细胞的生物学特性的影响 .方法 利用脂质体介导法将RGS16基因导入 C6细胞中 ,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁情况 ;3H- Td R法检测 C6细胞在转染不同梯度p CMV5 - RGS16和 p CMV 5质粒后的增殖情况 ;免疫细胞化学法检测转染前后 RGS16蛋白的表达情况 ;流式细胞仪检测转染 p CMV5 - RGS16和 p CMV5质粒 36 h后细胞周期变化和细胞是否有凋亡发生 .结果 转染 p CMV5 - RGS16质粒 2 4 h后 30 %细胞贴壁性降低 ,突起收缩 ,细胞变圆 ;RGS16蛋白表达阳性 ;3H- Td R法检测显示 C6细胞增殖速度与转染p CMV5 - RGS16的量呈正相关 ;细胞周期结果显示 G1期细胞百分数减少 10 % ,而 S期细胞百分数增多 14 % ;未发现RGS16与凋亡有直接关系 .结论 RGS16可能促进 C6细胞的增殖 .

精神分裂症与神经调节素1、G72及G-蛋白信号转导调节子4基因的关联研究

目的 探索神经调节素1（NRG1）、G72、G-蛋白信号转导调节子4（RGS4）基因变异的独立或联合作用与精神分裂症的关联。方法 采用酶切或测序方法,对315例精神分裂症患者和347例正常对照者NRG1、G72、RGS4基因的13个单核苷酸多态性（SNPs）位点进行基因型检测和遗传关联分析。应用Lo-gistic回归分析和风险或保护基因型分层后卡方检验评估三基因的交互作用。结果 单位点关联分析发现,NRG1的5个SNPs、G72的1个SNP、RGS4的2个SNPs与精神分裂症关联（P〈0.05）。Logistic回归分析构建了三个基因交互作用模型,各自变量的OR分别为：nrg1=3.58,rgs4=1.24,g72_rs947267=1.45,nrg1＊rgs4=3.03,nrg1＊g72_rs947267=1.06。应用基因型分层后卡方检验表明,三基因存在协同风险效应（OR=2.35～4.05;P〈0.05）。结论 NRG1、G72及RGS4基因的单独或交互作用与精神分裂症关联。

G蛋白调节子16对胶质瘤C6细胞周期的调节

目的 探讨G蛋白调节子 16(RGS16)对胶质瘤C6细胞周期的影响。方法 利用脂质体介导法将RGS16基因导入C6细胞中 ,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁生长情况 ;免疫细胞化学法检测转染前后RGS16蛋白的表达情况 ;流式细胞仪检测转染pCMV 5 RGS16和 pCMV 5质粒后每隔 12h后的细胞周期变化。 结果 转染pCMV 5 RGS16质粒 2 4h后 3 0 .0 %细胞贴壁性降低 ,突起收缩 ,细胞变圆 ,72h之后细胞又恢复正常 ;RGS16蛋白的表达呈时相性 ,3 6h时表达率最高 (阳性率为13 .0 % ) ,72h表达终止 ;C6细胞的各期细胞比例变化与RGS16蛋白表达对应 ,在 3 6h时G1期比例从转染前的 70 .5 %降低到60 .2 % ,S期比例从 2 0 .9%增加到 3 4.9% ;在 48h时G1期增加到 76.2 % ,S期减少到 11.4% ;72h各期恢复到正常比例。对照组细胞转染前后形态变化不明显 ,RGS16蛋白表达阴性 ,细胞周期变化不明显。

RGS16及HMGB1蛋白表达在高级别宫颈鳞状上皮内病变冷刀锥切术后复发中预测价值

目的探讨G蛋白信号调节子(RGS)16及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达在高级别宫颈鳞状上皮内病变(HSIL)冷刀锥切术(CKC)后复发中预测价值。方法选择2021年1月至2022年12月徐州医科大学附属连云港医院收治的患者均行CKC后且术后病理切缘阴性的238例宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者,术中采集病灶组织,采用免疫组化法测定RGS16、HMGB1蛋白表达情况。术后随访1年,根据患者术后1年是否复发分为复发组与非复发组。对比2组RGS16、HMGB1蛋白表达情况,对两组临床资料进行单因素分析,将单因素分析差异有统计学意义的指标纳入多因素Logistic回归分析,筛选HSIL患者术后复发的影响因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC),以曲线下面积(AUC)评估预测价值。结果随访1年,无失访,HSIL患者术后复发24例,复发率为10.08%,剩余214例均未复发。单因素分析结果显示,复发组产次、有腺体累及、术后人类乳头瘤病毒(HPV)持续感染、术后液基细胞学阳性例数占比、RGS16蛋白阳性表达率、HMGB1蛋白阳性表达率高于非复发组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,RGS16蛋白阳性表达、HMGB1蛋白阳性表达为HSIL患者术后复发的影响因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,RGS16蛋白、HMGB1蛋白阳性表达及二者联合预测HSIL患者术后复发的AUC值分别为0.740、0.790、0.818(P<0.05),且二者联合的AUC值更高(P<0.05)。结论RGS16蛋白、HMGB1蛋白阳性表达可用于预测HSIL患者术后复发风险,且二者联合具有更高的预测价值。

弓形虫沉默信号调节子2(TgSir2)的克隆表达与多克隆抗体制备

目的制备特异识别弓形虫沉默信号调节子2(TgSir2)多克隆抗体。方法以酵母Sir2氨基酸序列为模板,寻找弓形虫基因组中同源序列,并进行信号肽预测。以弓形虫RH株cDNA为模板,构建pET28b-TgSir2重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,并以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定。以纯化的TgSir2蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得特异性抗TgSir2多克隆抗体。最后,以此多克隆抗体作为一抗,Western blotting检测与虫体蛋白的反应情况。结果同源比对找到弓形虫基因组中TgSir2,信号肽分析提示1-15位氨基酸为其信号肽序列。PCR、双酶切及测序结果证实原核表达质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,IPTG可诱导TgSir2融合蛋白的大量表达。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体既能特异性识别原核表达的TgSir2蛋白,也能识别弓形虫体内的内源性TgSir2蛋白。结论制备的抗重组TgSir2蛋白多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的TgSir2蛋白。

G-蛋白及其在植物信号转导中的作用

ＧＴＰ结合蛋白（ＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）在生物体内有数种类型，包括转录因子、微管蛋白和信号转导蛋白，最后一种已成为当今研究的热点。结合ＧＴＰ的调节蛋白（ＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓ，简称Ｇ－蛋白）于７０年代...

RGS16蛋白协同5-FU抑制宫颈癌进展的分子机制

目的研究G蛋白信号调节子(RGS)16蛋白协同5-氟尿嘧啶(FU)抑制宫颈癌细胞生长、促进凋亡的作用及其分子机制。方法构建重组质粒pCDH-RGS16并转染293T细胞,以免疫印迹技术检测细胞培养上清中RGS16蛋白表达;以CCK-8法检测宫颈癌HeLa细胞增殖能力;以流式细胞术检测HeLa细胞凋亡;以划痕实验检测HeLa细胞迁移能力;以荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3介导的凋亡信号通路。结果293T细胞可成功表达RGS16蛋白;RGS16蛋白可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并与5-FU具有协同效应;RGS16蛋白可抑制HeLa细胞迁移;RGS16蛋白提高HeLa细胞凋亡率并与5-FU具有协同促凋亡作用;RGS16蛋白促进HeLa细胞中Caspase-3介导的凋亡信号通路分子如Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达,抑制Bcl-2分子表达;并且RGS16蛋白与5-FU联合处理HeLa细胞后,Caspase-3介导的分子表达差异更显著。结论RGS16蛋白与5-FU具有协同抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用,并且调控Caspase-3介导的凋亡信号通路抑制宫颈癌进展。

G蛋白信号调节因子16基因在食管癌组织的表达及其临床意义

目的探讨G蛋白信号调节因子16(RGS16)基因在食管癌(ESCA)中的表达及其临床意义。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载160例食管癌及11例癌旁转录组数据及临床相关参数;利用R语言及Wilcoxon秩和检验分析RGS16信使RNA(mRNA)基因的表达差异;采用卡方检验分析RGS16表达量与临床病理特征的相关性;通过基因表达交互网站(GEPIA)及单、多因素回归分析食管癌患者预后价值及影响因素,其中采用Cox回归模型进行单、多因素分析;通过R语言分析基因RGS16的相关通路,探索其在食管癌中的潜在机制。结果RGS16在食管癌组织中的mRNA表达水平显著高于正常组织[14.001(6.768,28.497)比3.088(2.133,5.560),Z=10.9,P<0.001],其表达量与肿瘤浸润深度呈正相关肿瘤浸润深度(χ^(2)=10.077,P<0.05);TCGA数据库分析显示食管癌组织中RGS16高表达患者预后差(Logrank P<0.05);多因素分析结果显示RGS16表达[风险比=2.911,95%可信区间:1.210~7.001,P<0.05]是影响食管癌预后的独立因素;KEGG通路分析显示RGS16表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、黏着斑等信号通路相关(P<0.05,q<0.05)。结论RGS16基因在食管癌中高表达,且与食管癌患者的不良预后密切相关,其可能通过PI3K-Akt信号通路、黏着斑等多种信号通路调控肿瘤的发生发展。

RGS16在胃癌中的表达及临床意义

目的 检测胃腺癌中G蛋白信号调节16(RGS16)的表达,探讨其与胃腺癌患者临床特征的关系。方法 选取2016年1月-2016年12月盐城市第一人民医院普外科的88例胃癌患者为研究对象。运用免疫组织化学法和Western Blot检测患者癌及癌旁组织中RGS16蛋白的表达水平。分析RGS16表达水平与组织病理参数之间的关系,使用Kaplan-Meier和Log-rank检验进行生存分析,并采用COX风险比例模型分析影响胃癌预后的因素。结果 癌组织中RGS16的过表达率(61.40%)高于癌旁组织(28.40%),差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示,与癌旁组织相比,RGS16在癌组织中表达更高(P<0.001)。RT-qPCR检测结果显示,RGS16在癌组织中的mRNA表达水平(5.97±4.88)较癌旁组织(2.19±1.99)高,差异具有统计学意义(P<0.01)。Kaplan-Meier生存函数结果:RGS16低表达的患者5年生存率显著高于RGS16高表达的患者(P<0.001)。RGS16蛋白的高表达和肿瘤的浸润深度是胃癌不良预后的危险因素(P<0.001)。结论 RGS16的高表达是影响胃癌患者术后不良预后的危险因素,可能为胃癌早期诊断和靶向治疗提供依据。

缺氧对人视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导调节子5表达的影响及其可能机制

目的探讨缺氧环境下人视网膜色素上皮（RPE）细胞中G蛋白信号转导调节子5（RGS5）表达的可能机制。方法实验研究。在正常培养的人RPE细胞培养基中加入终浓度为200／μmol／L的CoCl：建立细胞化学缺氧模型。按缺氧时间分为0、1、3、6、12和24h6组，观察RGS5和血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化；另选取12和24h作观察点，按处理因素分为缺氧对照组和VEGF抑制剂Bevacizumab处理组，Bevacizumab包括25、100和250肛咖l3种浓度，观察特异性抑制VEGF表达对RGS5表达产生的影响。应用免疫荧光染色法、Western blot和RT-PCR分别检测RGS5及其mRNA和VEGF蛋白及其mRNA的表达。采用Student’s t检验进行统计学分析。结果正常条件下，RGS5主要在人RPE细胞胞浆中表达。与VEGF存在相同表达区域。随着缺氧时间的延长，RPE细胞中RGS5蛋白及其mRNA表达逐渐上调，24h时达高峰（0．932±0．104，t=3．106，P=-0．01l；0．742±0．083，t=2．852，P=-0．017）；VEGF蛋白及其mRNA表达12h达高峰（1．022±0．141，t=4．144，P=0．002；0．491_＋0．063，t=5．707，P〈0．01），24h时有所下降，但仍高于无缺氧的RPE细胞（0．942±0．125，t=3．306，P=0．008；0．425±0．080，t=3．239，P=0．011）。浓度为100和250μg／ml的Bevacizumab有效抑制VEGF蛋白（￡=2．794，P=0．019；t=3．396，P=0．007）和其mRNA（t=2．823，P=0．018；t=9．584，P〈0．01）表达后，RGS5蛋白（t=2．953，P=0．014；t=2．913，P=0．015）和其mRNA（t=3．009，P=-O．013；t=4．243，P=-0．002）表达也随之受到抑制。结论缺氧条件下人RPE细胞RGS5表达上调，并与VEGF表达具有时相关系；抑制VEGF表达后，RGS5表达随之降低。提示RGS5位于VEGF信号通路下游，可能参与缺血缺氧性RPE相关眼病发生的调控。

G蛋白信号转导调节子5在眼科的应用进展

G蛋白信号转导调节子5 （ regulators of G-protein signaling 5, RGS5 ）是RGS家族重要成员之一，不仅负向调控G蛋白耦联受体相结合的信号转导，还能抑制下游的丝裂原激活蛋白激酶通路激活。其与缺氧及病理性新生血管形成密切相关。RGS5与眼部和其他组织疾病的关系及其作用机制有待进一步深入研究。

G-蛋白信号转导调节子4基因多态性和甲基化与精神分裂症的关联研究

目的:探讨G-蛋白信号转导调节子4(regulator of G protein signaling 4,RGS4)基因多态性位点和甲基化在精神分裂症患者和正常人群中的差异以及二者的关联。方法:选取闽南地区汉族精神分裂症患者129例和正常对照131例,提取被试外周血DNA,对RGS4的三个多态性位点(rs10759、rs12753561和rs951436)进行扩增、测序,然后进行基因分型。再从两组中各随机选取32例受试者,利用亚硫酸氢盐处理后测序法检测基因甲基化水平。采用SPSS 20.0软件进行数据分析,基因甲基化差异分析采用χ2检验和独立样本t检验,RGS4基因多态性与甲基化关联性采用双因素方差分析。结果:在患者组和对照组中,rs10759位点均有AA、AC、CC三种基因型,基因型在两组间的分布差异有统计学意义(χ2=6.431,P=0.040),等位基因频率差异无统计学意义(χ2=1.270,P=0.260)。rs12753561位点具有GG、GT、TT三种基因型,基因型分布差异均具有统计学意义(χ2=6.217,P=0.045),等位基因频率均差异无统计学意义(χ2=0.021,P=0.885)。rs951436位点具有AA、AC、CC三种基因型,基因型和等位基因频率均差异无统计学意义(χ2=0.008,0.007,均P>0.05)。患者组和对照组分别有26例和27例检测到甲基化,差异无统计学意义(χ2=0.110,P=0.740)。两组个体甲基化率(甲基化位点数/10)分别为(0.24±0.11)和(0.26±0.18),差异无统计学意义(t=-0.318,P=0.752)。两组男性和女性个体甲基化率均差异无统计学意义(均P>0.05)。受试者rs10759、rs12753561和rs951436位点各基因型所对应的个体甲基化率均差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:RGS4基因rs10759和rs12753561位点与精神分裂症有关,RGS4基因甲基化与精神分裂症无关,RGS4基因多态性与甲基化无关。

解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的:探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5(TGR5)/环状磷酸腺苷(cAMP)信号通路靶向NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法:选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组(3.6、7.2 g·kg^(-1))、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1)),8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖(FBG),并在末次给药后,进行口服糖耐量实验(OGTT),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS)并计算β细胞功能稳态指数(HOMA-β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β水平。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素(Insulin)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降(P<0.01);OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低(P<0.01)。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1) mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高(P<0.01)。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。

Hsa_circ_0000392靶向miR-145-5p/CRKL轴调控细胞外调节蛋白激酶通路影响宫颈癌的辐射敏感性

目的探讨hsa_circ_0000392(circ_0000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,根据患者对放射治疗的反应,将癌组织分为放疗敏感和放疗耐受。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测宫颈癌放疗敏感和放疗耐受肿瘤组织及宫颈癌Hela、SiHa细胞中circ_0000392、miR-145-5p、CT10激酶调节子样蛋白(CRKL)的表达。将siRNA circ_0000392、miR-145-5p mimic、miR-145-5p inhibitor、pcDNA 3.1-CRKL及其阴性对照分别转染至Hela和SiHa细胞,细胞经辐射诱导后,采用克隆形成实验检测细胞存活能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Bcl-2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000392、miR-145-5p和CRKL之间的靶向关系。裸鼠成瘤实验观察circ_0000392对宫颈癌体内放疗敏感性的影响。结果circ_0000392和CRKL在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中均呈高表达,miR-145-5p在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中呈低表达(均P<0.05)。si-circ_0000392#1+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(78.67±10.97)个和(71.00±9.54)个,均低于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(176.00±22.27)个和(158.33±17.56)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(41.55±3.40)%和(31.41±3.29)%,均高于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(15.91±1.37)%和(13.70±1.89)%,均P<0.05],si-circ_0000392#1+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于si-Ctrl+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平低于si-Ctrl+6 Gy组(均P<0.05)。si-circ_0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(171.33±25.01)个和(137.00±21.66)个,均高于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(84.67±17.79)个和(71.00±11.00)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(17.41±2.58)%和(15.96±1.25)%,均低于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(40.29±2.92)%和(30.82±2.34)%,均P<0.05],si-circ_0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平高于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组(均P<0.05)。circ_0000392能够与miR-145-5p靶向结合,而CRKL是miR-145-5p的下游靶基因。miR-145-5p mimic+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(74.33±10.02)个和(66.00±12.17)个,均低于mimic NC+6 Gy组[分别为(197.67±17.21)个和(157.67±11.59)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(45.58±2.16)%和(32.10±3.55)%,均高于mimic NC+6 Gy组[分别为(15.85±2.45)%和(13.99±1.69)%,均P<0.05],miR-145-5p mimic+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于mimic NC+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平低于mimic NC+6 Gy组(均P<0.05)。miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(158.00±15.88)个和(122.33±13.65)个,均高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(71.33±8.02)个和(65.67±12.22)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(19.50±3.45)%和(17.04±0.94)%,均低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(44.33±2.36)%和(32.05±2.76)%,均P<0.05],miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组(均P<0.05)。sh-circ_0000392组小鼠肿瘤体积较小,肿瘤重量降低(均P<0.05)。小鼠移植瘤组织中circ_0000392、miR-145-5p、CRKL mRNA相对表达水平降低减少,CRKL、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白相对表达水平降低,Bax蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论circ_0000392可增强宫颈癌细胞的放疗敏感性,其作用机制可能与靶向miR-145-5p调控CRKL/ERK信号通路有关。

跨膜蛋白16A对大鼠门静脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制

目的探讨跨膜蛋白16A（TMEMl6A）对原代培养大鼠门静脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制。方法原代培养大鼠门静脉平滑肌细胞，慢病毒转染上调其TMEMl6A表达，分别加T16Ainh-A01和U0126后用Westernblot法检测蛋白表达变化，流式细胞术观察细胞周期变化，细胞计数试剂盒（CCK-8）观察细胞增殖。结果成功培养出大鼠门静脉平滑肌细胞并转染了TMEMl6A，转染效率约为80％，流式细胞术结果显示过表达TMEMl6A组s期细胞比例为（34．44±3．72）％，高于对照组的（15．56±2．36）％，差异有统计学意义（t=7．423，P〈0．01）。Westernblot显示各组细胞外信号调节激酶1／2（ERKl／2）表达水平差异无统计学意义（t=2．338，P〉0．05）。各组磷酸化ERKl／2（p-ERKl／2）表达差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论TMEMl6A可能通过影响丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）-ERKl／2通路活性来调控门静脉平滑肌细胞增殖，其表达在原代培养的大鼠门静脉平滑肌细胞增殖中起重要作用。

红曲菌mrfA缺失突变株发酵过程中的生理生化特征

为了解红曲菌G蛋白信号调节子mrfA缺失突变株发酵过程中的生理生化特征,测定了该突变菌株在液态发酵过程中的生物量、葡萄糖利用率、pH值、蛋白酶、几丁质酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性。与原始菌株红色红曲菌M7相比较,mrfA缺失突变株在生长后期生物量会明显减少,在发酵过程中葡萄糖消耗率、蛋白酶和几丁质酶均高于出发菌株,其中蛋白酶活力在第6天达到最高。与此同时,mrfA缺失突变株的过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶酶活也均高于出发菌株M7。这些结果初步表明mrfA缺失突变株与原始菌株相比自溶特征更加明显,推测蛋白酶是诱发菌体自溶的主要水解酶,超氧化物歧化酶是其防御氧化应激的主要酶。研究结果为进一步理解mrfA介导的红曲菌自溶机理奠定了基础。

腺苷A_1受体激动剂拮抗大鼠慢性低氧所致右心室肥厚的实验研究

目的通过外周途径持续给予腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(CPA),观察其拮抗低氧致右心室肥厚的作用和机制。方法将24只SD大鼠随机分为3组:A组(常氧组)、B组(慢性低氧组)、C组(慢性低氧+CPA治疗组)。B、C组于缺氧箱中喂养。于实验第8天予皮下埋泵给予CPA。于第21天处死大鼠,检测右心室/(左心室+室间隔)[RV/(LV+S)]、右心室/体重(RV/BW)比值;采用RT-PCR及Western-blot法检测RGS4基因及蛋白表达。结果慢性缺氧组与常氧组相比,RV/(LV+S)、RV/BW比值明显增高(分别P<0.01,P<0.05),而RGS4的mRNA及蛋白表达水平明显下降(均P<0.01);CPA处理后RV/(LV+S)、RV/BW比值明显低于缺氧组(分别P<0.01,P<0.05),而RGS4的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P均<0.01)。结论外周途径应用CPA能拮抗慢性缺氧所致右心肥厚,其机制可能是通过上调RGS4表达从而抑制G蛋白介导的信号通路。