采用RT-PCR方法扩增并克隆麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)基因序列,利用ClustalX 1.83和Mega 5.0软件构建系统进化树,并选用多种生物信息学软件进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,所得...采用RT-PCR方法扩增并克隆麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)基因序列,利用ClustalX 1.83和Mega 5.0软件构建系统进化树,并选用多种生物信息学软件进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,所得麦洼牦牛RGS5基因长度为863bp,包含1个546bp的完整开放阅读框,编码181个氨基酸,GenBank登录号为KJ867514。系统进化树分析发现,麦洼牦牛RGS5氨基酸序列与普通牛亲缘关系最近,其次是山羊和绵羊。RGS5基因编码的蛋白质分子质量为20.94ku,理论等电点(PI)为6.35,它是一种以α-螺旋为主,不含信号肽的非跨膜、不稳定性蛋白。三级结构预测显示,麦洼牦牛与人RGS5蛋白三级结构相似性高达90.51%。以上结果为深入研究RGS蛋白功能积累科学资料。展开更多
目的:探讨G-蛋白信号转导调节子4(regulator of G protein signaling 4,RGS4)基因多态性位点和甲基化在精神分裂症患者和正常人群中的差异以及二者的关联。方法:选取闽南地区汉族精神分裂症患者129例和正常对照131例,提取被试外周血DNA,...目的:探讨G-蛋白信号转导调节子4(regulator of G protein signaling 4,RGS4)基因多态性位点和甲基化在精神分裂症患者和正常人群中的差异以及二者的关联。方法:选取闽南地区汉族精神分裂症患者129例和正常对照131例,提取被试外周血DNA,对RGS4的三个多态性位点(rs10759、rs12753561和rs951436)进行扩增、测序,然后进行基因分型。再从两组中各随机选取32例受试者,利用亚硫酸氢盐处理后测序法检测基因甲基化水平。采用SPSS 20.0软件进行数据分析,基因甲基化差异分析采用χ2检验和独立样本t检验,RGS4基因多态性与甲基化关联性采用双因素方差分析。结果:在患者组和对照组中,rs10759位点均有AA、AC、CC三种基因型,基因型在两组间的分布差异有统计学意义(χ2=6.431,P=0.040),等位基因频率差异无统计学意义(χ2=1.270,P=0.260)。rs12753561位点具有GG、GT、TT三种基因型,基因型分布差异均具有统计学意义(χ2=6.217,P=0.045),等位基因频率均差异无统计学意义(χ2=0.021,P=0.885)。rs951436位点具有AA、AC、CC三种基因型,基因型和等位基因频率均差异无统计学意义(χ2=0.008,0.007,均P>0.05)。患者组和对照组分别有26例和27例检测到甲基化,差异无统计学意义(χ2=0.110,P=0.740)。两组个体甲基化率(甲基化位点数/10)分别为(0.24±0.11)和(0.26±0.18),差异无统计学意义(t=-0.318,P=0.752)。两组男性和女性个体甲基化率均差异无统计学意义(均P>0.05)。受试者rs10759、rs12753561和rs951436位点各基因型所对应的个体甲基化率均差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:RGS4基因rs10759和rs12753561位点与精神分裂症有关,RGS4基因甲基化与精神分裂症无关,RGS4基因多态性与甲基化无关。展开更多
信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6...信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6细胞胰岛素分泌的影响及作用机制。电穿孔法转染小干扰RNA(siRNA)敲减STAT5基因表达后,实时定量PCR和蛋白质印迹法显示,与对照干扰RNA转染的细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞的mRNA及蛋白质表达水平分别约70%和67%(P<0.01),提示成功构建了Stat5基因沉默模型。酶联免疫吸附法结合蛋白质印迹法显示,与对照组细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞在不同浓度葡萄糖刺激下,胰岛素分泌能力提高大约1倍(P<0.05);同时,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)的磷酸化水平亦随之加强。加入Ca MKⅡ抑制剂AIPⅡ(auto camtide-2 related inhibitory peptideⅡ)可明显抑制Stat5 siRNA转染导致的细胞胰岛素分泌水平增加(P<0.01)。上述结果表明,沉默Stat5基因后可通过增强Ca MKⅡ的磷酸化促进MIN6细胞胰岛素的分泌。展开更多
目的探讨miR-590-5p、DNA损伤检查点蛋白调节子1(mediator of DNA damage checkpoint 1,MDC1)在高级别胶质瘤(high-grade glioma,HGG)组织中的表达及与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,并明确二者对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法选取2...目的探讨miR-590-5p、DNA损伤检查点蛋白调节子1(mediator of DNA damage checkpoint 1,MDC1)在高级别胶质瘤(high-grade glioma,HGG)组织中的表达及与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,并明确二者对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法选取2019年1月至2021年2月河北北方学院附属第一医院64例HGG患者,评估放疗效果。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-590-5p水平,免疫组织化学染色检测MDC1表达情况,分析miR-590-5p、MDC1表达与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,多因素Logistic回归分析影响HGG患者术后放疗效果的因素;体外培养胶质瘤U87MG细胞,并分别转染miR-590-5p mimic、MDC1-shRNA及其阴性对照,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡;构建裸鼠移植瘤模型,观察过表达miR-590-5p和敲低MDC1对肿瘤生长的影响。结果MDC1在HGG组织中的表达较正常脑组织中升高,mi R-590-5p表达较正常脑组织降低,二者表达水平呈负相关;MDC1表达升高、miR-590-5p表达降低,其放疗效果越差;Logistic回归分析显示,MDC1高表达、miR-590-5p低表达均是影响HGG患者放疗效果的危险因素。过表达miR-590-5p和敲低MDC1后,U87MG细胞增殖力降低,凋亡率升高,移植瘤体积和重量下降,Ki-67阳性细胞比例减少。过表达miR-590-5p后MDC1蛋白表达明显下降。结论HGG组织中miR-590-5p呈低表达,MDC1呈高表达,二者表达与HGG的发生和患者术后放疗效果关系密切;过表达miR-590-5p和敲低MDC1表达可抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡。展开更多
文摘采用RT-PCR方法扩增并克隆麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)基因序列,利用ClustalX 1.83和Mega 5.0软件构建系统进化树,并选用多种生物信息学软件进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,所得麦洼牦牛RGS5基因长度为863bp,包含1个546bp的完整开放阅读框,编码181个氨基酸,GenBank登录号为KJ867514。系统进化树分析发现,麦洼牦牛RGS5氨基酸序列与普通牛亲缘关系最近,其次是山羊和绵羊。RGS5基因编码的蛋白质分子质量为20.94ku,理论等电点(PI)为6.35,它是一种以α-螺旋为主,不含信号肽的非跨膜、不稳定性蛋白。三级结构预测显示,麦洼牦牛与人RGS5蛋白三级结构相似性高达90.51%。以上结果为深入研究RGS蛋白功能积累科学资料。
文摘目的:探讨G-蛋白信号转导调节子4(regulator of G protein signaling 4,RGS4)基因多态性位点和甲基化在精神分裂症患者和正常人群中的差异以及二者的关联。方法:选取闽南地区汉族精神分裂症患者129例和正常对照131例,提取被试外周血DNA,对RGS4的三个多态性位点(rs10759、rs12753561和rs951436)进行扩增、测序,然后进行基因分型。再从两组中各随机选取32例受试者,利用亚硫酸氢盐处理后测序法检测基因甲基化水平。采用SPSS 20.0软件进行数据分析,基因甲基化差异分析采用χ2检验和独立样本t检验,RGS4基因多态性与甲基化关联性采用双因素方差分析。结果:在患者组和对照组中,rs10759位点均有AA、AC、CC三种基因型,基因型在两组间的分布差异有统计学意义(χ2=6.431,P=0.040),等位基因频率差异无统计学意义(χ2=1.270,P=0.260)。rs12753561位点具有GG、GT、TT三种基因型,基因型分布差异均具有统计学意义(χ2=6.217,P=0.045),等位基因频率均差异无统计学意义(χ2=0.021,P=0.885)。rs951436位点具有AA、AC、CC三种基因型,基因型和等位基因频率均差异无统计学意义(χ2=0.008,0.007,均P>0.05)。患者组和对照组分别有26例和27例检测到甲基化,差异无统计学意义(χ2=0.110,P=0.740)。两组个体甲基化率(甲基化位点数/10)分别为(0.24±0.11)和(0.26±0.18),差异无统计学意义(t=-0.318,P=0.752)。两组男性和女性个体甲基化率均差异无统计学意义(均P>0.05)。受试者rs10759、rs12753561和rs951436位点各基因型所对应的个体甲基化率均差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:RGS4基因rs10759和rs12753561位点与精神分裂症有关,RGS4基因甲基化与精神分裂症无关,RGS4基因多态性与甲基化无关。
文摘信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6细胞胰岛素分泌的影响及作用机制。电穿孔法转染小干扰RNA(siRNA)敲减STAT5基因表达后,实时定量PCR和蛋白质印迹法显示,与对照干扰RNA转染的细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞的mRNA及蛋白质表达水平分别约70%和67%(P<0.01),提示成功构建了Stat5基因沉默模型。酶联免疫吸附法结合蛋白质印迹法显示,与对照组细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞在不同浓度葡萄糖刺激下,胰岛素分泌能力提高大约1倍(P<0.05);同时,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)的磷酸化水平亦随之加强。加入Ca MKⅡ抑制剂AIPⅡ(auto camtide-2 related inhibitory peptideⅡ)可明显抑制Stat5 siRNA转染导致的细胞胰岛素分泌水平增加(P<0.01)。上述结果表明,沉默Stat5基因后可通过增强Ca MKⅡ的磷酸化促进MIN6细胞胰岛素的分泌。
文摘目的探讨miR-590-5p、DNA损伤检查点蛋白调节子1(mediator of DNA damage checkpoint 1,MDC1)在高级别胶质瘤(high-grade glioma,HGG)组织中的表达及与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,并明确二者对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法选取2019年1月至2021年2月河北北方学院附属第一医院64例HGG患者,评估放疗效果。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-590-5p水平,免疫组织化学染色检测MDC1表达情况,分析miR-590-5p、MDC1表达与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,多因素Logistic回归分析影响HGG患者术后放疗效果的因素;体外培养胶质瘤U87MG细胞,并分别转染miR-590-5p mimic、MDC1-shRNA及其阴性对照,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡;构建裸鼠移植瘤模型,观察过表达miR-590-5p和敲低MDC1对肿瘤生长的影响。结果MDC1在HGG组织中的表达较正常脑组织中升高,mi R-590-5p表达较正常脑组织降低,二者表达水平呈负相关;MDC1表达升高、miR-590-5p表达降低,其放疗效果越差;Logistic回归分析显示,MDC1高表达、miR-590-5p低表达均是影响HGG患者放疗效果的危险因素。过表达miR-590-5p和敲低MDC1后,U87MG细胞增殖力降低,凋亡率升高,移植瘤体积和重量下降,Ki-67阳性细胞比例减少。过表达miR-590-5p后MDC1蛋白表达明显下降。结论HGG组织中miR-590-5p呈低表达,MDC1呈高表达,二者表达与HGG的发生和患者术后放疗效果关系密切;过表达miR-590-5p和敲低MDC1表达可抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡。
