G蛋白偶联内向整流钾通道亚基2mRNA在颞叶癫大鼠海马内的表达

目的 探讨G蛋白偶联内向整流钾通道亚基 2 (GIRK 2 )在颞叶癫疒间 大鼠海马内的表达变化。方法 应用腹腔注射海人酸致疒间 大鼠 ,采用原位杂交法检测大鼠海马GIRK 2mRNA的表达。结果 GIRK 2mR NA在癫疒间 大鼠海马齿状回表达增加 ,与正常对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 癫疒间 大鼠海马内GIRK 2增高是机体对神经元网络过度兴奋的代偿反应。

G蛋白偶联内向整流钾通道亚基2在红藻氨酸致癎大鼠海马内的表达变化

目的 观察G蛋白偶联内向整流钾通道 (GIRK)亚基GIRK2mRNA和蛋白在红藻氨酸致大鼠海马表达的时空变化 ,探讨其在癫发生发展中的作用。方法 采用红藻氨酸致颞叶癫大鼠模型 ,运用原位杂交和免疫细胞化学检测不同时间点大鼠海马齿状回 (DG)、CA1、CA3 区GIRK2mRNA和蛋白表达。结果 GIRK2mRNA和蛋白在大鼠海马内分布广泛 ,表达丰富 ;大鼠腹腔注射红藻氨酸后 ,GIRK2mRNA在DG区表达逐渐增多 ,12h(实验组 0 4 2 36± 0 0 380 ,对照组 0 3396±0 0 343)、2 4h(实验组 0 4 2 5 3± 0 0 4 37,对照组 0 3173± 0 0 315 )达到高峰 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;此后逐渐下降 ,但仍高于对照 ;30d又达到高峰 (P <0 0 1) ;致大鼠海马内GIRK2蛋白仅DG区在 30d时与对照组比较增高有显著意义 (P <0 0 1)。结论 GIRK2mRNA和蛋白在癫大鼠海马内表达增高 ,特别是在DG区 ,提示GIRK2增高是机体对神经元过度兴奋的代偿或适应性反应 ;其合成增加将降低神经元的兴奋性 ,阻止海马内过度兴奋在DG→CA3 →CA1方向的扩散。

开郁颗粒对抑郁大鼠模型海马区G蛋白偶联的内向整流型钾通道(GIRK1)mRNA表达的影响

目的:研究慢性不可预见性应激及孤养结合所致抑郁大鼠海马区G蛋白偶联的内向整流型钾通道(GIRK1)mRNA表达的影响。方法:经过21d慢性应激后,观察大鼠行为学改变,用原位杂交的方法测定抑郁大鼠海马CA1、CA3区GIRK1 mRNA表达。结果:慢性应激后,应激大鼠出现同抑郁患者相似的行为改变;开郁颗粒各组大鼠GIRK1 mRNA CA1、CA3区的表达明显与对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:慢性不可预见性应激同孤养结合可建立较稳定的抑郁症模型;慢性应激可以使抑郁大鼠海马区GIRK1表达下降,而开郁颗粒则可明显增加GRIK1mRNA在海马区的表达。

皮质激素受体在抑郁大鼠海马GIRK_(1-4) mRNA调控中的作用

目的 :侧脑室给予螺内酯和 (或 )米非司酮 ,观察大鼠海马 G蛋白偶联内向整流钾通道 1- 4 (GIRK1 - 4) m RNA的表达 ,初步探讨皮质激素受体在调控 GIRK m RNA中的作用。方法 :雄性 SD大鼠 ,随机分为 9组 (每组 5只 ) :对照组 (CON) ,生理盐水组 (NS) ,螺内酯组 (SPI) ,米非司酮组 (MIF) ,SPI+MIF组 ,抑郁 (DEP) +NS组 ,DEP+SPI组 ,DEP+MIF组 ,DEP+SPI+MIF组。用地高辛 (DIG)标记的 GIRK1 - 4c RNA探针进行原位杂交 ;切片贴于涂有铬矾明胶的载玻片上 ,37℃烘箱中过夜。常规脱水 ,透明 ,中性树胶封片。利用 L eica图像分析系统测定海马各区 GIRK1 - 4m RNA杂交阳性信号的平均灰度。使用SPSS进行统计学分析。 结果 :与 CON组相比 ,DEP+NS组海马 CA1- 3区和齿状回 GIRK1 - 4m RNA表达均明显下降 ;与DEP+NS组相比 ,DEP+SPI组和 DEP+SPI+MIF组海马各区 GIRK1 - 4m RNA表达均明显升高 ,DEP+MIF组变化不显著 ,SPI组、MIF组和 SPI+MIF组与 NS组相比 ,GIRK1 - 4m RNA表达无明显差异 ,表明 SPI和 MIF本身对正常大鼠 GIRK表达的影响不明显。 结论 :糖皮质激素受体通过与 GIRK1 中的糖皮质激素受体反应元件结合 ,使 GIRKs m RNA在海马的表达增加 ,皮质酮通过海马的 5 - HT1 A受体增加 GIRKs通道的通透性 。

乙醇及其代谢产物对新生大鼠原代培养心房肌细胞乙酰胆碱敏感型钾通道Kir3．1蛋白表达的影响

目的明确乙醇及其代谢产物乙醛对新生SD大鼠原代心房肌细胞乙酰胆碱敏感型钾通道Kir3．1蛋白表达的影响，并探讨该通道及乙醛在急性乙醇中毒引发心律失常的过程中所发挥的效应。方法采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶提取并培养150只新生SD大鼠原代心房肌细胞，并采用免疫荧光法进行肌钙蛋白I鉴定。采用细胞计数套件-8（CCK-8）法分别测定200-800mmol／L乙醇及50—500μmol／L乙醛处理24h后细胞的生存率，以确定导致新生sD大鼠原代心房肌细胞凋亡所需的乙醛及乙醇浓度。建立以最大非凋亡浓度（200mmol／L）的乙醇处理24h及相应剂量（100Ixmol／L）乙醛处理24h的新生SD大鼠原代心房肌细胞模型。采用Westernblot法检测乙醇处理组、乙醛处理组及对照组心房肌细胞Kir3．1蛋白的表达情况，并对结果进行统计学分析。结果（1）成功培养新生SD大鼠原代心房肌细胞，细胞免疫荧光鉴定所培养细胞为心肌细胞，且90％以上细胞肌钙蛋白I染色阳性。（2）CCK-8法测定显示400mmol／L以上的乙醇处理组的心肌细胞生存率明显低于对照组（P〈0．05），而200mmol／L及以下的乙醇处理组心肌细胞生存率与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；400μmol／L以上的乙醛处理组的心肌细胞生存率明显低于对照组（P〈0．05），而350μmol／L及以下的乙醛处理组心肌细胞生存率与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）Westernblot检测显示200mmol／L乙醇及100vmol／L的乙醛处理24h的新生SD大鼠原代房心肌细胞Kit3．1蛋白表达分别高于对照组（44．52±23．07）％及（45．04±22．01）％（P〈0．01），而乙醇组与乙醛组之间Kir3．1蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论急性乙醇及乙醛处理均能够明显上调乙酰胆碱敏感型钾通道Kir3．1蛋白的表达。

氟西汀对慢性脑缺血大鼠工作记忆损伤的保护作用及其机制的研究

目的探讨氟西汀对大鼠慢性脑缺血所致工作记忆损伤的改善作用及其作用机制。方法选用Sprague Dawley雄性大鼠44只,采用双侧颈总动脉结扎术建立慢性脑缺血模型,将其分为假手术组(10只)、缺血模型组(12只)、缺血+氟西汀组(12只)、假手术+氟西汀组(10只)。氟西汀在缺血1周后经灌胃给药,持续给药4周。假手术组与缺血模型组给予相同体积的等渗盐水。采用改良的水迷宫实验检测各组大鼠的工作记忆表现,该实验持续4 d;采用免疫印迹法检测各组大鼠前额皮质中神经元标记物神经元核、星形胶质细胞标记物S-100β、G蛋白门控内向整流钾离子(GirK)通道蛋白(GirK1、GirK2、GirK3)以及分拣连接蛋白27(SNX27)的表达水平并进行组间比较。结果(1)4组大鼠游泳速度组间差异无统计学意义(P>0.05)。在训练试验中,4组大鼠逃逸潜伏期及游泳距离的组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。在记忆保持试验中,与假手术组同时点比较,缺血模型组大鼠在实验第2、3、4天逃逸潜伏期明显延长[第2天:(48.2±6.3)s比(27.4±4.0)s,第3天:(53.9±6.4)s比(29.4±6.3)s,第4天:(41.4±4.9)s比(23.8±3.7)s;均P<0.05];与缺血模型组同时点比较,缺血+氟西汀组大鼠在实验第3、4天逃逸潜伏期延长得到逆转[分别为(31.0±6.6)、(26.2±3.7)s,均P<0.05]。在记忆保持试验中,与假手术组同时点比较,缺血模型组大鼠在实验第2、3、4天游泳距离明显增加[第2天:(553±76)cm比(313±51)cm,第3天:(619±81)cm比(329±65)cm,第4天:(433±48)cm比(282±47)cm;均P<0.05];与缺血模型组同时点比较,缺血+氟西汀组大鼠在实验第2、3、4天游泳距离的增加得到逆转[分别为(373±54)、(321±70)、(279±44)cm,均P<0.05]。(2)4组大鼠神经元标记物神经元核抗体及星形胶质细胞标记物S-100β的相对灰度值差异均无统计学意义(均P>0.05)。(3)4组大鼠GirK1膜蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05),假手术组为参照,缺血模型组、缺血+氟西汀组GirK2相对灰度值分别为(1.27±0.07)、(1.06±0.06),缺血模型组、缺血+氟西汀组GirK3相对灰度值分别为(1.23±0.08)、(1.00±0.06),缺血模型组GirK2及GirK3膜表达均高于假手术组,与缺血模型组比较,缺血+氟西汀组GirK2及GirK3膜表达上调均受到抑制,组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(4)以假手术组SNX27相对灰度值为1,缺血模型组、缺血+氟西汀组、假手术+氟西汀组大鼠SNX27相对灰度值分别为0.78±0.09、0.97±0.04、0.94±0.05,缺血模型组大鼠SNX27的表达低于假手术组,给予氟西汀处理后,SNX27表达下调被逆转,组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氟西汀可改善大鼠慢性脑缺血所致的工作记忆损伤,其机制可能是作用于SNX27,从而抑制缺血后前额皮质中GirK2及GirK3的膜表达上调。

鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节GIRK1表达的影响

目的 评价鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节G蛋白偶联内向整流钾通道1（GIRK1）表达的影响。方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠144只，8～10周龄，体重200～220 g，采用随机数字表法分为4组（n＝36）：正常对照组（C组）、右美托咪定组（D组）、糖尿病神经痛组（DNP组）和糖尿病神经痛＋右美托咪定组（DD组）。采用腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg的方法制备大鼠糖尿病神经痛模型。D组和DD组于注射枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液或链脲佐菌素后14 d时鞘内注射右美托咪定1.5 μg/kg，C组鞘内注射等容量生理盐水。于注射链脲佐菌素前（T0）、注射链脲佐菌素后14 d（T1）、鞘内注射后2、4和6 h（T2～4）时测定机械痛阈，于T2～4时测定痛阈后处死大鼠取脊髓背根神经节，采用免疫荧光法检测GIRK1阳性细胞数目，Western blot法检测GIRK1的表达。结果 与DNP组比较，DD组T2～4时机械痛阈升高，脊髓背根神经节GIRK1阳性细胞计数增加，GIRK1表达上调（P〈0.05）；与D组比较，DD组T2～4时脊髓背根神经节GIRK1阳性细胞计数增加，GIRK1表达上调（P〈0.05）；与C组比较，DNP组T1～4时机械痛阈降低（P〈0.05）。结论 鞘内注射右美托咪定通过上调背根神经节GIRK1表达减轻大鼠糖尿病神经痛。