G蛋白偶联受体相关分选蛋白1在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与顺铂化疗抵抗的关系

目的探究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GPRASP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性的关系。方法收集癌旁组织、原发NSCLC组织及复发NSCLC组织,用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPRASP1和腺苷三磷酸结合盒式亚家族A成员5(ABCA5)mRNA的表达情况。空白组和过表达组分别用慢病毒转染空白载体和GPRASP1过表达载体于A549细胞中;对照组和抵抗组分别用慢病毒转染对照小干扰RNA(si-control)于A549细胞及DDP耐药细胞中;干扰组用慢病毒转染GPRASP1小干扰RNA(si-GPRASP1)于DDP耐药细胞中。用CCK-8实验法检测细胞对DDP的半抑制浓度(IC50),用RT-PCR法检测各组细胞中GPRASP1与ABCA5的表达情况。结果癌旁组织、NSCLC组织与复发NSCLC组织中GPRASP1 mRNA表达量分别为(1.27±0.16)×10^(-2)、(2.68±0.30)×10^(-2)和(3.89±0.72)×10^(-2),ABCA5 mRNA表达量分别为(1.03±0.13)×10^(-1)、(1.85±0.21)×10^(-1)和(2.67±0.61)×10^(-1);复发NSCLC组织中GPRASP1和ABCA5 mRNA表达量均显著高于癌旁组织及NSCLC组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白组和过表达组的GPRASP1 mRNA表达量分别为1.00±0.16和5.98±0.66,ABCA5 mRNA表达量分别为1.00±0.09和2.81±0.33,DDP IC50分别为(2.10±0.13)和(3.50±0.11)μmol·L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.01)。对照组、抵抗组和干扰组的GPRASP1 mRNA表达量分别为1.00±0.11、3.37±0.31和0.81±0.13,ABCA5 mRNA表达量分别为1.00±0.10、4.06±0.43和2.30±0.25,DDP IC50分别为(2.08±0.13)、(7.87±0.61)和(5.77±0.55)μmol·L^(-1);抵抗组的上述指标与对照组和干扰组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论GPRASP1可显著促进ABCA5的表达,并介导NSCLC DDP抵抗。

黏附性G蛋白偶联受体F1在胰腺导管腺癌中的表达及其促进癌症进展的机制研究

目的·分析黏附性G蛋白偶联受体F1(adhesion G protein-coupled receptor F1,ADGRF1)在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)发生及发展过程中的表达变化,探究ADGRF1对PDAC细胞增殖的影响以及促进PDAC进展的潜在分子机制。方法·基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析ADGRF1在正常胰腺组织及PDAC组织中的mRNA水平表达。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ADGRF1在正常胰腺导管上皮细胞hTERT-HPNE及多种PDAC细胞中的表达情况。利用免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC)检测PDAC患者的癌组织及癌旁组织中ADGRF1的表达差异。转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低ADGRF1后,通过CCK8和平板克隆形成实验检测PDAC细胞AsPC-1、SW1990增殖能力的变化。构建稳定过表达ADGRF1的Patu8988细胞,通过CCK8实验检测过表达ADGRF1引起的PDAC细胞增殖变化。利用RNA测序(RNA-sequence,RNA-seq)、基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)和免疫浸润分析预测与ADGRF1促进PDAC癌症进展相关的信号通路。结果·TCGA数据库和GEO数据库的分析结果显示ADGRF1 mRNA在PDAC组织中的表达高于正常胰腺组织(均P=0.000)。qPCR和Western blotting结果显示,与hTERT-HPNE细胞相比,多种PDAC细胞中ADGRF1的mRNA和蛋白水平均有所上调(均P<0.05)。IHC结果显示ADGRF1在PDAC患者癌组织中的表达也高于癌旁组织。此外,下调ADGRF1能够抑制PDAC细胞AsPC-1、SW1990的增殖能力;而过表达ADGRF1则促进Patu8988细胞的增殖能力(均P<0.05)。RNAseq、GSEA富集分析和免疫浸润的结果显示,ADGRF1的表达与干扰素α(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)等信号通路有关。结论·ADGRF1在PDAC细胞和组织中高表达,促进PDAC细胞的增殖,其机制可能与多个免疫相关信号通路有关。

ShRNA干扰G蛋白偶联受体相关分选蛋白1对肺癌细胞增殖凋亡和裸鼠成瘤影响

目的探讨shRNA干扰G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)对肺癌细胞增殖凋亡和裸鼠成瘤影响。方法将GASP-1-shRNA1、2和3用Lipofectamine 2000转染到肺癌A549细胞。选择转染GASP-1-shRNA1的细胞,建立空白对照组、空载体转染组和GASP-1-shRNA1转染组,采用菌落形成试验和流式细胞术分别检测肺癌A549细胞增殖和调亡;采用Western Blot检测ki67、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。将转染GASP-1-shRNA1细胞注射裸鼠后腿建立原位异种移植小鼠模型。检测肿瘤的生长,并通过免疫组化检测ki67和caspase-3蛋白表达量。结果GASP-1-shRNA1、2和3转染A549细胞后GASP-1 mRNA和蛋白表达量均显著下调,尤其转染GASP-1-shRNA1组。GASP-1下调能抑制A549细胞增殖,并促进A549细胞凋亡;在体内试验中,下调GASP-1能抑制体内肿瘤生长,同时也能抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。结论GASP-1的下调可抑制肺癌细胞增殖、促进凋亡,并抑制肿瘤生长。

G蛋白偶联受体相关分选蛋白1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学功能的影响

目的 探讨G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学功能的影响。方法 将乳腺癌MDA-MB-231细胞分别三组,分别为空白对照组(转染shNC)、shRNA组(转染shRNA)和shGASP组(转染shGASP-1)。qRT-PCR检测GASP-1 mRNA水平,Western blot检测GASP-1蛋白水平,CCK-8检测MDA-MB-231细胞增殖;克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞克隆形成能力,Transwell法检测MDA-MB-231细胞迁移能力,流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞凋亡。结果 三阴性乳腺癌组织中GASP-1mRNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。与空白对照组和shRNA组相比,shGASP组中的GASP-1 mRNA和蛋白显著降低(P<0.05);48~72 h,shGASP组中MDA-MB-231细胞增殖能力显著低于空白对照组(P<0.05);与空白对照组和shRNA组相比,shGASP组中的MDA-MB-231细胞克隆形成能力明显降低(P<0.05);shGASP组中的MDA-MB-231细胞侵袭明显降低(P<0.05);shGASP组中MDA-MB-231细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 沉默GASP-1可以抑制MDA-MB-231细胞增殖、侵袭,促进其凋亡,提示GASP-1可能与三阴性乳腺癌的发生发展密切相关,有望成为三阴性乳腺癌治疗的新靶点。

血清可溶性神经调节蛋白-1、G蛋白偶联雌激素受体-1在急性胰腺炎患者病情及预后评估中临床价值研究

目的探讨血清可溶性神经调节蛋白-1(sNRG-1)、G蛋白偶联雌激素受体-1(GPER-1)在急性胰腺炎(AP)患者病情及预后评估中的临床价值。方法选取自2019年6月至2022年6月邯郸市第一医院收治的106例AP患者为研究对象,根据AP病情严重程度分为轻症组(n=49)、中重症组(n=36)及重症组(n=21);根据预后生存情况分为存活组(n=83)与死亡组(n=23)。采用酶联免疫吸附法检测血清sNRG-1、GPER-1水平。采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清sNRG-1、GPER-1及两者联合检测对AP患者预后的评估价值。采用多因素Logistic回归分析探讨AP患者预后影响因素。结果中重症组、重症组患者血清sNRG-1水平低于轻症组,且重症组低于中重症组;中重症组、重症组患者血清GPER-1水平高于轻症组,且重症组高于中重症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。存活组与死亡组病情严重程度、入院急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、白细胞计数、C反应蛋白、血肌酐、乳酸脱氢酶、血淀粉酶、血脂肪酶、sNRG-1、GPER-1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。APACHEⅡ评分≥12分、sNRG-1≤17.74 pg/ml、GPER-1≥4.82 pg/ml是影响AP患者预后的独立危险因素(P<0.05)。血清sNRG-1、GPER-1预测AP患者预后的ROC曲线下面积分别为0.846、0.753。两者联合预测AP患者预后的ROC曲线下面积为0.917,特异度为86.75%,灵敏度为86.96%。结论血清sNRG-1低表达、GPER-1高表达与AP患者的病情严重程度及预后有关,有望作为评估AP患者预后的生物学指标。

G蛋白偶联胆汁酸受体1调控机体炎症信号通路的研究进展

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)与胆汁酸(BAs)及其衍生物结合后,激活下游通路传导,调控动物的多种代谢过程。GPBAR1通过核转录因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号转导通路,调节动物体炎症反应。因此,本文重点阐述GPBAR1对动物炎症通路的调控进展,为BAs及其衍生物成为治疗炎症性疾病的潜在药物提供参考。

G蛋白偶联雌激素受体1在骨代谢中作用的研究进展

G蛋白偶联雌激素受体1(G protein-coupled estrogen receptor 1,GPER1)是一种雌激素的膜受体,其通过快速的细胞多效应作用引发下游反应,对成骨细胞的增殖分化产生影响。因此,GPER1在雌激素介导的骨代谢中有着重要作用。本文对GPER1在骨代谢中的作用作了简要总结,包括GPER1在青春期参与骨生长的过程,在机体不同雌激素水平下的骨代谢中体现出的不同功能,以及其与其他受体共同作用参与了骨代谢。

敲减G蛋白偶联受体1抑制人肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨G蛋白偶联受体1(GPR1)对人肝癌(HCC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人类HCC细胞系(Huh7、QGY-7703、HCCLM3、Hep3B、HepG2)、人肝永生化细胞系(THLE2)中GPR1 mRNA的表达,蛋白质印迹(western blotting)验证敲减GPR1后蛋白的表达;采用靶向shRNA敲减HCC Huh7和QGY-7703细胞系中的GPR1,细胞增殖实验(CCK-8)分析敲减GPR1后HCC细胞的增殖能力,细胞划痕实验分析敲减GPR1后HCC细胞的迁移能力,细胞侵袭实验(Transwell)分析敲减GPR1后HCC细胞的侵袭能力。结果:GPR1在HCC Huh7细胞和QGY-7703细胞中呈高表达(P<0.01),敲减GPR1后,与shNC组相比,sh GPR1组HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力均减弱(P<0.01)。结论:GPR1是促癌因子,敲减GPR1可能抑制人HCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

G蛋白偶联受体相关分选蛋白功能特征与相关疾病研究进展

G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)作为最大的一类膜蛋白受体家族,可被多种配体激活并发挥相应的信号转导功能,参与生物体内重要的生理过程。G蛋白偶联受体相关分选蛋白(G protein-coupled receptors associated sorting proteins,GASPs)则对内吞后的GPCRs分选过程发挥着重要的作用,并介导受体进入降解或再循环途径,进而调控细胞的信号转导等过程。研究发现GASPs的功能缺陷与多种疾病相关,包括神经系统疾病、肿瘤和耳聋等。本文重点介绍了G蛋白偶联受体相关分选蛋白的功能特征及其相关信号通路,描述了GASPs功能缺陷与疾病的关联性及家族蛋白与GPCRs的相互作用、GASPs分选途径的发现、参与的信号通路及对基因转录调控,以期为GASPs相关多种疾病的治疗提供新的思路和策略。

G蛋白偶联受体相关分选蛋白研究进展

G 蛋白偶联受体（G Protein-coupled Receptors,GPCRs）是人类基因组编码的最丰富的一类膜蛋白家族.GPCRs 可被包括气体、光子、氨基酸及其衍生物、Ca2 ＋ 、肽、脂类物质和大量的糖蛋白激素等在内的多种配体激活,进而引发细胞信号转导,参与调节人体心血管系统、免疫系统和神经系统等在内的几乎所有的生理过程.

G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1发夹结构通过影响Paxillin的功能抑制成骨细胞迁移

目的探索G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1(Gproteincoupledreceptorkinaseinteractingprotein1,GIT1)的RNA发夹结构(hairpin)(GIT1-RNAh)对成骨细胞迁移的影响,并分析其机制。方法取培养至第6代的鼠成骨细胞,随机分成两组,分别用包含GIT1-RNAh(实验组)和绿色荧光蛋白(greenfluoresenceprotein,GFP)的RNA发夹结构(GFP-RNAh)的腺病毒(对照组)感染12h后,再将每组分成有、无血小板源性生长因子(plateletdrivedgrowthfactor,PDGF)刺激的两组。免疫荧光染色方法检测成骨细胞内源性GIT1蛋白表达和Paxillin的位置。WesternBlot检测Paxillin的磷酸化。构建包含蓝色荧光蛋白的GIT1-RNAh(CFP-GIT1-RNAh)实验组和GFP-RNAh(CFP-GFP-RNAh)(对照组),免疫荧光双染的方法检测CFP-GIT1-RNAh和CFP-GFP-RNAh对Paxillin位置的特异性作用。用划痕愈合法检测GIT1-RNAh(实验组)和GFP-RNAh(对照组)腺病毒对成骨细胞在PDGF刺激下的迁移能力的影响。结果免疫组织化学观察,实验组和对照组比较,明显抑制成骨细胞内源性的GIT1蛋白表达和扰乱Paxillin的分布。WesternBlot观察,和对照组相比,实验组明显抑制了Paxiliin的磷酸化(P<0.05)。划痕愈合法检测观察,和对照组相比,实验组明显抑制成骨细胞的迁移。结论GIT1-RNAh通过扰乱Paxillin的分布和其磷酸化从而抑制成骨细胞的迁移。

G蛋白偶联雌激素受体1、表皮生长因子受体和趋化因子受体1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体1(G protein-coupled estrogen receptor1,GPER1)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和趋化因子受体1(chemokine receptor1,CXCR1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达及意义。方法甲状腺乳头状癌68例、结节性甲状腺肿42例,采用免疫组织化学S-P法检测GPER1、EGFR和CXCR1的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,以及三者间表达的相关性。结果在PTC组织中,GPER1、EGFR和CXCR1的表达阳性率分别为76.5%、66.2%、64.7%,明显高于结节性甲状腺肿组的21.4%、16.7%和11.9%(P<0.01);GPER1、EGFR和CXCR1在PTC中的表达与颈部淋巴结转移相关(P<0.05),而与其他临床病理特征(年龄、性别、肿瘤大小及TNM分期)无相关性(P>0.05);在PTC及PTC淋巴转移癌组织中,GPER1与EGFR的表达呈显著正相关(r=0.262,P=0.031;r=0.542,P=0.002)、GPER1与CXCR1的表达也呈显著正相关(r=0.276,P=0.025;r=0.483,P=0.006)。结论 GPER1、EGFR和CXCR1的两两共表达与PTC的发生、发展密切相关,三者间可能存在一种相互作用。

G蛋白偶联受体40在游离脂肪酸影响小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用

目的:探讨G蛋白偶联受体40(GPR40)是否介导游离脂肪酸(FFAs)对小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡的影响及其可能机制。方法:观察棕榈酸、油酸(500μmol/L,48h)对NIT-1细胞凋亡的影响,用Hoechst33342染色、TUNEL及流式细胞仪检测凋亡。并利用siRNA技术抑制GPR40在NIT-1细胞表达,观察棕榈酸、油酸对GPR40表达抑制细胞脂性凋亡的影响,行Western blotting观察Bcl-2、Bax和p-c-Jun表达。结果:棕榈酸长期作用可诱导NIT-1细胞凋亡;而油酸可抑制棕榈酸对NIT-1细胞的诱导凋亡作用。抑制GPR40表达后,空转组、control siRNA、GPR40 siRNA转染细胞分别予棕榈酸孵育48h,3组间细胞凋亡率差异无显著;3组细胞分别予棕榈酸、油酸共孵育48h,GPR40 siRNA转染细胞凋亡率明显高于空转组细胞,差异显著(P<0.05),Western blotting显示这一过程伴随c-Jun磷酸化水平下降、Bcl-2、Bax表达无明显变化。结论:GPR40未参与饱和脂肪酸诱导的β细胞凋亡,而介导了不饱和脂肪酸对脂性凋亡的抑制作用,c-Jun可能参与这一过程。提示GPR40参与调节β细胞适应性,为探讨肥胖和T2DM的关系提供了新的线索。

大麻素受体1/食欲素受体1-G蛋白偶联受体异聚体及其交叉激活作用研究进展

大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1)和食欲素受体1(orexin receptor 1,OX1)同属G蛋白偶联受体(G-proteincoupled receptors,GPCRs),两者在体内分布广泛,均参与调节摄食、能量平衡、睡眠和觉醒、食物和药物的成瘾性等。两者作用位点接近,足以形成异聚体共同参与各项功能调节,多项研究表明,CB1/OX1存在交叉激活作用。本文对CB1和OX1的作用以及CB1/OX1异聚体的交叉激活作用进行综述,以期对其有更深入的认识,从而对CB1/OX1-GPCR新药研发起到一定指导作用。

G蛋白偶联受体激酶4对大鼠血管平滑肌细胞AT_1受体的调节作用

目的应用siRNA干扰抑制大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled recep-tor kinase 4,GRK4)的表达,探讨GRK4对血管紧张素Ⅱ1型(angiotensinⅡtype 1,AT1)受体的调节作用。方法免疫组化检测大鼠回结肠动脉血管平滑肌组织GRK4蛋白表达;以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞株)为研究对象,免疫印迹检测GRK4、AT1受体蛋白表达变化,免疫共沉淀检测GRK4和AT1受体的相互作用和AT1受体磷酸化改变。结果大鼠动脉平滑肌组织GRK4表达良好;siRNA干扰后,GRK4蛋白表达明显下降(P<0.05);AT1蛋白表达降低(P<0.05),AT1受体磷酸化明显增强(P<0.05);GRK4和AT1受体存在共连接,抑制GRK4表达后增加GRK4与AT1受体之间的共连接。结论 GRK4能够调控大鼠胸主动脉平滑肌细胞AT1受体蛋白表达及其磷酸化状态,该调节作用可能与两者的共连接有关。

老年血管性痴呆患者血清8-羟基脱氧鸟苷和孤独G蛋白偶联受体配体-13水平与病情严重程度及预后的相关性分析

目的探究老年血管性痴呆(Vascular dementia,VD)患者血清8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)、孤独G蛋白偶联受体配体-13(Solitary G Protein-Coupled Receptor ligand-13,Apelin-13)蛋白水平变化及其与患者病情严重程度、预后的关系。方法选取西部战区总医院2017年12月—2020年12月收治的125例老年VD进展期患者为观察组,同期健康体检者92例为对照组。2组均给予简易精神状态检查表(Mini-mental state examination,MMSE)评分;观察组根据MMSE评分结果分为轻度亚组、中度亚组、重度亚组。比较观察组、对照组及观察组各亚组间血清8-OHdG、Apelin-13蛋白水平及MMSE评分;采用Pearson方法分析血清8-OHdG、Apelin-13蛋白水平与MMSE评分的相关性;观察组患者出院后3个月,根据ADL评分,分为Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组,比较各级组间血清8-OHdG、Apelin-13蛋白水平,采用Spearman方法分析老年VD患者血清8-OHdG、Apelin-13蛋白水平与预后的关系。结果不同病情严重程度组间血清8-OHdG、Apelin-13蛋白水平及MMSE评分比较差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析表明,老年VD患者血清8-OHdG水平与MMSE评分呈负相关(P<0.05),而Apelin-13与MMSE评分呈正相关(P<0.05);不同ADL分级组间血清8-OHdG、Apelin-13蛋白水平差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析提示,老年VD患者血清8-OHdG与预后(ADL分级)呈正相关(P<0.05),Apelin-13水平与预后(ADL分级)呈负相关(P<0.05)。结论老年VD患者患者血清8-OHdG异常升高,而Apelin-13蛋白水平降低,临床可能用于VD患者病情严重程度及预后的评估。

G蛋白偶联受体37的基因突变与自闭症发病机制相关性的研究

泛自闭症障碍症候群（ASD ）是一种神经发育障碍性疾病，它的主要特征为交流障碍，社会能力缺失，刻板的兴趣和重复的行为。目前有文献［1-5］报道已经确定了NLGN3、NLGN4、CADM1、CNPNAP2及SHANK3为自闭症的相关性基因。此外，TSC1／2的突变也可能与自闭症相关［6］。但是，这些基因突变导致自闭症的分子机制尚不清楚。

G蛋白偶联受体激酶功能紊乱与阿尔兹海默病的相关性

阿尔兹海默病（AD）是一种中枢神经系统退行性疾病,临床以记忆和其他认知功能的渐进性丧失为主要特征,病理上主要表现为相关皮质下的老年斑积聚（SPs）和神经元纤维缠结（NFTs）[1-2]。AD严重影响人们身心健康,可导致持续性进行性痴呆,但目前还无有效治疗措施。其患者总数逐年增加,预计到2020年将超过现在的2倍,这个特殊病人群体的治疗费用也因为治疗措施的昂贵而不成比例的增加。

G蛋白偶联受体4与血管内皮生长因子相关性的研究进展

G蛋白偶联受体(GPCR)是具有7个跨膜螺旋的一类受体蛋白质,对生物起着重要的作用。质子感知受体卵巢癌G蛋白偶联受体1(OGR1)是GPCRs中的1个亚家族,G蛋白偶联受体4(GPR4)为OGR1亚家族4种受体中的一种,广泛分布于人体各种肿瘤组织细胞中,参与并影响肿瘤的发生、发展。研究发现恶性肿瘤由于增生过快,局部组织严重缺氧,形成酸性环境,可通过直接或间接的方式影响GPR4和血管内皮生长因子(VEGF)及其受体的表达,影响肿瘤组织的微血管密度,进而影响瘤的发展、浸润和转移,GPR4在血管形成的血管内皮细胞中发挥重要作用,并且参与相关疾病及癌症相关的血管发生。本文综述了在肿瘤组织的酸性微环境中,GPR4对相关疾病及肿瘤发生、转移的调节作用,以及GPR4与VEGF在宫颈癌中的表达相关性展望。

B族G蛋白偶联受体PAC1的N端基序HSDCIF对其二聚化和上膜运输的影响

B族G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)PAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一.HSDCIF(His-Ser-Asp-Cys-Ile-Phe)为位于PAC1的N端胞外1区(extracellar domain 1,EC1)的一段短肽序列,与特定负责激活PAC1受体的激动域PACAP(1-6)具有极高的同源性.利用基因敲除技术构建出缺陷HSDCIF基序的PAC1突变体(简称D-PAC1);利用基因工程原理和技术构建系列真核表达重组载体,包括融合了增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellow fluorescent protein,EYFP)的表达载体D-PAC1-EYFP;用于生物发光能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)检测的D-PAC1-Rluc;以及用于双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验的D-PAC1-EYFP/N和D-PAC1-EYFP/C.免疫荧光检测(immunofluorescence assay)测定D-PAC1的表达;荧光共聚焦显微观察D-PAC1的细胞运输,然后通过Western印迹、BRET与BiFC方法来检测D-PAC1的二聚化情况,综合评价HSDCIF基序对PAC1二聚化和在细胞中定位的影响.检测结果显示,缺陷HSDCIF基序的突变体D-PAC1不能发生二聚化,也不能正常的进行上膜运输,而是滞留在内质网中,同时外源化学合成的寡肽HSDCIF可以竞争性地抑制正常PAC1的二聚化.