GPR120激动剂通过β-Arrestin2途径改善高糖诱导的海绵体内皮细胞功能障碍

目的探讨激活G蛋白偶联受体(GPR)120对高糖诱导的人类阴茎海绵体内皮损伤修复的影响,以期为寻找糖尿病性勃起功能障碍(DMED)新的药物开发靶点提供理论依据。方法收集海绵体植入手术患者术中废弃海绵体组织提取海绵体内皮细胞进行原代培养,用高浓度葡萄糖诱导内皮细胞损伤,再以GPR120激动剂治疗,观察对比不同处理的细胞一氧化氮(NO)释放量、细胞迁移、血管生成等功能。结果成功提取人类海绵体内皮细胞进行原代培养并鉴定;发现GPR120在人类海绵体内皮细胞中稳定表达,且与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)存在共定位;与高糖损伤组相比,GPR120激动剂治疗组NO释放量、划痕愈合率和血管生成率均显著增加(P<0.05);沉默β-Arrestin2后GPR120激动剂失去原有的治疗效果。结论高糖培养可诱导海绵体内皮细胞功能障碍,GPR120激动剂能够治疗海绵体内皮功能障碍,沉默β-Arrestin2后GPR120激动剂无法改善内皮功能。

GPR120在肝功能衰竭免疫紊乱和糖酵解失衡间的潜在价值

1前言急性肝功能衰竭(ALF)是一种严重且致命的临床综合征,其特征是无基础肝病史,2周内出现以Ⅱ度以上肝性脑病为特征的肝功能衰竭,病情进展迅速,病理实质为肝细胞大面积死亡导致的肝脏合成、代谢及解毒功能全面丧失[1]。尽管ALF的发病机制已得到广泛研究,但至今尚无针对该病的特效治疗策略。迄今为止,只有14%甚至更少的ALF患者可以通过现今的医学治疗方式获得康复[2]。如果没有支持性治疗(能量与营养补给、电解质酸碱平衡维持、抗炎护肝、免疫调节干预、人工肝辅助支持及并发症预防与处置等)或肝移植[3],ALF的死亡率将会更高。因此,ALF已成为肝病领域迫切需要全面解析其复杂发病机制并针对疾病核心进展环节探索更具高效诊疗技术方案的疑难重症疾病。

G蛋白偶联受体120通过AMPK信号通路缓解肝x受体诱导的HepG2细胞甘油三酯积聚

目的拟观察G蛋白偶联受体120（GPRl20）激活在肝x受体（LXR）诱导的肝脏脂肪性变中的作用，为防治脂代谢紊乱及相关疾病提供新线索。方法将人肝癌细胞系HepG2进行如下分组：对照组、GW9508（GPRl20的激动剂）处理组、T0901317处理组、GW9508预处理＋T0901317处理组，酶学法测定细胞内甘油三酯水平；实时荧光定量PCR检测细胞SREBPl．c、SCDl、

G蛋白偶联受体120激动剂促进巨噬细胞胆固醇流出的研究

目的:探讨G蛋白偶联受体120(GPR120)在巨噬细胞胆固醇流出中的作用及机制。方法:培养Raw264.7巨噬细胞,以50-200μmol/L的GPR120激动剂GW9508处理Raw264.7细胞18h。NBD-胆固醇负载法检测细胞胆固醇的流出率;MTS方法检测细胞的存活率;定量PCR和Western blot方法检测胆固醇流出相关转运体ABCA1、ABCG1和SR-B1的mRNA及蛋白表达水平;定量PCR检测核受体LXRα、LXRβ和PPARα、PPARγ的mRNA水平。结果:与对照组相比,100、150和200μmol/L的GW9508均提高Raw264.7细胞NBD-胆固醇流出率,分别提高了8%、10%和18%;ABCA1的蛋白水平分别上调了1.4倍、1.8倍和4.8倍, ABCG1的蛋白水平分别上调了1.3倍、3.2倍和5.1倍,但是不影响SR-B1的蛋白水平;而且,100和200μmol/L的GW9508分别上调ABCA1的mRNA水平3.6倍和6.8倍,上调ABCG1的mRNA水平1.6倍和3.3倍;同时,LXRα的mRNA水平也分别上调了0.6倍和1.25倍,且差异有统计学意义;但是不影响SR-B1及LXRβ、PPARα和PPARγ的mRNA水平。另外,50-200μmol/L的GW9508均不影响Raw264.7细胞的存活率。结论:GPR120通过LXRα上调ABCA1和ABCG1的表达而促进Raw264.7巨噬细胞的胆固醇流出。

脂肪酸受体GPR120与葡萄糖转运蛋白4的关系

目的:研究在3T3-L1细胞中G蛋白偶联受体120(GPR120)与葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的关系。方法:诱导3T3-L1细胞分化,RT-PCR检测GRP120 mRNA表达,油红O染色检测细胞内脂肪;采用siRNA技术下调3T3-L1细胞中GPR120的表达,软脂酸孵育3T3-L1细胞24 h后,用real-time PCR和Western blot方法检测3T3-L1细胞中GLUT4的表达水平的变化。结果:诱导3T3-L1细胞分化过程中GPR120 mRNA表达升高(P<0.05),干扰GPR120表达导致3T3-L1细胞诱导产生的脂滴体积和数量明显减小。另外,干扰GPR120表达导致GLUT4 mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:GPR120影响了胰岛素信号通路中GLUT4表达水平,推测其参与了胰岛素抵抗的发生。

GPR120和GPR40表达与卵巢癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨G蛋白偶联受体(GPR)120与GPR40在卵巢癌中的表达及其作为预后分子标志物的临床价值。方法通过免疫组织化学染色检测128例卵巢癌患者的石蜡包埋样本中GPR120与GPR40表达。分析GPR120、GPR40表达与卵巢癌临床病理特征之间的关系,采用Kaplan-Meier法绘制高表达和低表达GPR120、GPR40患者的生存曲线,Cox风险回归模型分析卵巢癌患者无病生存(DFS)率的影响因素。结果卵巢癌患者GPR120与GPR40阳性表达率分别为62.5%(80/128)和56.3%(72/128)。FIGOⅡ—Ⅲ期和组织学G3级患者的GPR120和GPR40高表达率分别高于FIGOⅠ期与组织学G1—G2级。生存分析表明,GPR120高表达者的4年DFS较低表达者下降(56.9%vs.70.7%,Log-rankχ^(2)=5.144,P=0.023)。此外,GPR40高表达者的DFS率亦低于低表达组(57.7%vs.68.4%,Log-rankχ^(2)=4.491,P=0.034)。单、多变量Cox回归分析认定GPR120高表达、GPR40高表达、FIGO分期Ⅱ—Ⅲ期和术后残留灶≥1 cm是卵巢癌患者DFS的独立影响因素。结论GPR120与GPR40是预测卵巢癌侵袭性与不良预后的有效分子标志物,两者可能参与了卵巢癌的恶性转化与进展。

G蛋白偶联受体37(GPR37)上调促进人胶质瘤U251细胞的增殖

目的探讨G蛋白偶联受体37(GPR37)表达上调对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法构建携带GPR37基因的重组质粒,采用脂质体转染法在U251细胞上调表达GPR37,采用实时荧光定量PCR检测GPR37 mRNA水平,Western blot法检测GPR37、磷酸化的蛋白激酶B[p-AKT(Ser473)]蛋白水平,CCK-8法检测U251细胞增殖情况,流式细胞术检测U251细胞的细胞周期。结果与阴性对照组相比,过表达GPR37组细胞的GPR37 mRNA和蛋白水平显著提高。上调细胞的GPR37水平后,明显增加U251细胞的增殖、G1/G0期细胞比例降低,S期和G2期细胞比例升高,并增加p-AKT(Ser473)蛋白水平。结论上调U251细胞的GPR37水平可加速U251细胞周期进程、活化AKT途径并促进细胞增殖。

G蛋白偶联受体3:调控神经系统和卵泡发育的关键因子

G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)是细胞表面最大的受体超家族,参与调节多种生理和病理过程。G蛋白偶联受体3(G protein-coupled receptor 3,Gpr3)是一种新发现的鞘氨醇1-磷酸受体,它直接或者间接参与调节脊椎动物神经系统及卵泡的发育过程。作为潜在的治疗多种神经疾病和卵巢早衰的药物靶标,Gpr3的生理功能及作用的分子机制等都值得进一步研究。文章主要就Gpr3及其介导的信号通路在脊椎动物神经系统发育及卵巢卵泡发育过程中的相关作用作一综述。

G蛋白偶联受体50在牦牛卵母细胞体外成熟过程中的表达与亚细胞定位研究

试验旨在研究G蛋白偶联受体50(G protein-coupled receptor 50,GPR50)在牦牛卵母细胞体外成熟过程中的表达与定位规律,为进一步解析卵母细胞成熟的分子机制及理解牦牛繁殖的特异性提供依据。通过牦牛卵母细胞体外成熟培养,利用免疫荧光染色监测不同时间点(0~24 h)纺锤丝形态和核相的变化,确定牦牛卵母细胞减数分裂4个时期,包括生发泡期(germinal vesicle,GV)、生发泡破裂期(germinal vesicle break down,GVBD)、第一次减数分裂中期(metaphaseⅠ,MⅠ)与第二次减数分裂中期(metaphaseⅡ,MⅡ)的时间点。在此基础上,通过实时荧光定量PCR检测GPR50基因在牦牛卵母细胞成熟过程中的动态表达量,免疫荧光染色检测GPR50蛋白在卵母细胞成熟过程中的的亚细胞动态定位情况。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟0 h时90%处于GV期,6 h时94%处于GVBD期,16 h时92%细胞处于MⅠ期,24 h时94%处于MⅡ期。实时荧光定量PCR结果表明,GPR50基因在牦牛卵母细胞GV期即有表达,并在GVBD、MⅠ、MⅡ期成熟过程中逐渐升高,在MⅡ期达到顶峰,且极显著高于GV与GVBD期(P<0.01)。GPR50蛋白在牦牛卵母细胞GV期时集中在膜上表达,并随着成熟进程的发展在细胞质和细胞膜均大量表达,在MⅡ期高亮度弥散表达。以上结果表明,GPR50基因参与牦牛卵母细胞减数分裂过程并发挥重要作用,为研究GPR50在牦牛卵母细胞成熟过程中的作用及机制提供了依据。

家鸡G蛋白偶联受体139基因的结构、序列及表达特征分析

G蛋白偶联受体139(GPR139)是一种孤儿受体。在脊椎动物中,针对其结构、表达和功能的研究相对缺乏。本文以家鸡大脑c DNA为模板,采用PCR方法,扩增并克隆得到家鸡GPR139(c GPR139)基因。结果显示:家鸡GPR139基因c DNA由2个外显子组成;ORF区域长1056 bp,编码351个氨基酸的前体蛋白,在其第三跨膜区末端包含D-R-Y基序,属于G蛋白偶联受体家族视紫红质亚家族。将家鸡GPR139前体蛋白与人、大鼠、小鼠GPR139前体蛋白的氨基酸序列进行比对,分别具有91.78%、89.17%、89.17%的相似度。采用RT-PCR方法,本研究也检测了家鸡GPR139的组织表达情况。结果显示:家鸡GPR139基因在大脑、中脑、小脑、后脑、下丘脑及垂体中表达量较高,而在卵巢、精巢、肺、肾脏、肌肉组织中,GPR139基因仅有微弱表达。这些结果首次揭示了GPR139基因在非哺乳动物(家鸡)中的结构特征和组织表达特点,为探究其在家鸡中的生理功能奠定一些基础。

G蛋白偶联受体119活性位点预测及与吡唑并嘧啶类激动剂对接研究

利用同源模建的方法构建GPR119蛋白三维结构,经多种方法优化并用Profiles-3D和拉氏图评估后,得到最优蛋白模型,计算分析得到5个可能的活性位点,分析其活性位点氨基酸组成情况,发现了潜在保守序列.构建并优化了吡唑并嘧啶类药物小分子,其最低能量结构采用最陡下降法和共轭梯度法进行优化.将药物小分子逐一对接至蛋白的各个活性位点,得到二者相互作用模型.根据作用模型分析了此类药物小分子与活性位点之间的氢键、静电作用力等.

游离脂肪酸受体4(FFAR4/GPR120)调控巨噬细胞功能的研究进展

游离脂肪酸受体4(FFAR4/GPR120)表达于巨噬细胞,调控白细胞介素1(IL-1)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的表达与分泌,介导ω-3多不饱和脂肪酸的抑炎效应。FFAR4可通过Gq/11蛋白激活磷脂酶C和胞质磷脂酶A2介导的信号分子途径,或者通过β抑制蛋白2(β-arrestin 2)调控炎症相关分子,改变核因子κB(NF-κB)等转录因子活性。巨噬细胞在机体分布广泛,FFAR4调节巨噬细胞状态,进而影响脂肪组织、肌肉组织、肝脏等组织器官的功能,参与肥胖、胰岛素抵抗、骨质疏松、脂肪肝等疾病发生。目前对FFAR4激活在巨噬细胞的效应和对疾病的治疗作用还处于认识的初期,许多问题仍待更深入研究。

家鸡G蛋白偶联受体85基因的结构、序列与组织表达分析

G蛋白偶联受体(GPCR)超家族是细胞膜上广泛存在的一类受体,是细胞跨膜信号转导的一类重要受体分子,参与许多生理过程调节。它们中仍有很多至今尚未找到内源性配体,这类受体被称为孤儿型受体。G蛋白偶联受体85(GPR85)是GPCR超家族中孤儿型受体的一员。目前,在非哺乳类脊椎动物中,针对GPR85的研究极少。本研究以家鸡Gallus gallus domesticus为模型,通过反转录PCR和RACE-PCR等方法从脑中克隆到GPR85基因的cDNA全长序列,揭示其基因结构,并用实时荧光定量PCR(qPCR)方法探究了该基因在家鸡各组织中的表达情况。结果显示:家鸡GPR85基因位于1号染色体上,由2个外显子组成,其编码区位于第2个外显子上,长为1 113 bp,可编码1个370个氨基酸的7次跨膜受体蛋白。家鸡GPR85与其他脊椎动物(人Homo sapiens、小鼠Mus musculus、大鼠Rattus norvegicus、热带爪蟾Xenopus tropicalis和斑马鱼Danio rerio)的GPR85具有高度的氨基酸序列一致性(>93%)。qPCR分析发现,GPR85基因mRNA在家鸡全脑、垂体、肾上腺、精巢中有较高表达,而在所检测的其他外周组织中表达极低。本研究首次揭示了家鸡GPR85基因的结构与表达特征,为后续探究GPR85基因在家鸡等非哺乳类中的生理功能奠定基础。

家鸡G蛋白偶联受体78基因的克隆与组织表达图谱分析

G蛋白偶联受体(GPCR)是一大类膜受体超家族,参与了机体几乎所有的生理过程,是一类重要信号分子受体。GPR78作为GPCR超家族的成员之一,属于孤儿型受体。目前,在脊椎动物中,针对该基因结构与功能的研究极少。本研究以家鸡为动物模型,通过RT-PCR方法克隆了GPR78基因的编码区序列,并探究了该基因在家鸡各组织中的表达情况。结果显示:家鸡GPR78基因编码区全长为1020 bp,含3个外显子,可编码1个长为339个氨基酸的7次跨膜受体;该基因在家鸡脑各功能区及垂体中高表达,而在其他外周组织中均不表达。本研究为后续探究GPR78基因在家鸡中的生理功能奠定基础。

游离脂肪酸与G蛋白偶联受体40

最近研究发现孤儿G蛋白偶联受体40(GPR40)的配体是中、长链的游离脂肪酸(FFAs),其基因定位于人类染色体19q13.1,基因编码产物由300个氨基酸残基组成。它在胰腺和脑组织表达丰富,在肝脏、心、骨骼肌等也有表达。FFAs与GPR40的结合可以产生一系列生物学效应,包括促进胰岛素的分泌等。另外,一些药物及脂肪酸的衍生物也可以激活该受体。这些有望为探讨肥胖症和糖尿病的发病机理及治疗等研究提供新的突破点。

G蛋白偶联雌激素受体30与激素依赖性肿瘤发生发展的相关性研究进展

雌激素是生物体内一种重要的类固醇激素,不仅在生殖系统,而且在神经内分泌系统、心血管系统、泌尿系统及骨骼系统等多个系统中都发挥着广泛且重要的生理和病理作用。雌激素通过与相应的雌激素受体结合发挥相应的效能,经典的雌激素受体即雌激素核受体（estrogen receptor,ER）位于细胞核,包括ERα和ERβ两种亚型。传统观点认为雌激素主要通过其经典的核受体途径发挥慢速基因效应,此途径发挥作用较慢,常常需数小时甚至数天,然而越来越多的研究显示雌激素作用于多靶细胞后也可在短时间内出现快速的细胞效应,仅需数十秒钟到数十分钟,且不被蛋白质和RNA的合成抑制所阻断,并且证实,参与这种反应的介导因子是G蛋白偶联受体30（G protein-coupled receptor 30,GPR30）。

GPR120的结构特征、生物学功能及作用机制

GPR120是长链不饱和游离脂肪酸的受体,具有影响食物选择、调节胃肠道肽类激素分泌、促进细胞增殖、调节脂肪细胞发育和分化、调节巨噬细胞迁移和分化及抑制破骨细胞发生等多种生物学功能。GPR120功能缺陷与肥胖、胰岛素抵抗、糖耐量减低、2型糖尿病和脂肪肝等代谢性异常密切相关。深入研究GPR120的生物学功能及其分子机制有助于揭示肥胖、脂代谢紊乱及2型糖尿病等代谢性疾病的发病机制,从而为发掘此类代谢性疾病的新型防治策略提供理论依据。

GPR120对脂多糖诱导的胰岛β细胞炎症损伤及TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响

目的:探讨过表达G蛋白偶联受体120(GPR120)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞炎症损伤及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将MIN6细胞分为control组(细胞用无血清培养液进行培养)、LPS组(细胞用含10μg·ml^(-1) LPS的培养液进行培养)、LPS+control组(感染阴性对照慢病毒的细胞用10μg·ml^(-1) LPS培养液处理)、LPS+GPR120组(感染pcDNA3.1-GPR120慢病毒的细胞用10μg·ml^(-1) LPS培养液处理)4组。CCK-8法检测细胞增殖;Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平;蛋白质印迹法检测GPR120、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达。结果:LPS组GPR120蛋白相对表达量明显低于control组(P<0.05);LPS+GPR120组GPR120蛋白相对表达量明显高于LPS+control组(P<0.05)。LPS组细胞增殖活力明显低于control组(P<0.001);LPS+GPR120组细胞增殖活力明显高于LPS+control组(P<0.001)。LPS组细胞凋亡率明显高于control组(P<0.001);LPS+GPR120组细胞凋亡率明显低于LPS+control组(P<0.001)。LPS组细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均高于control组(均P<0.001);LPS+GPR120组IL-6、IL-1β和TNF-α水平均低于LPS+control组(均P<0.001)。LPS组细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量均高于control组(均P<0.001),LPS+GPR120组TLR4、MyD88、NF-κB p65相对表达量均低于LPS+control组(均P<0.001)。结论:GPR120可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路在LPS诱导的胰岛β细胞炎症损伤中发挥保护作用。

心力衰竭相关孤儿型G蛋白偶联受体的研究进展

G蛋白偶联受体是已知的浆膜受体中最大的家族,介导并参与多种细胞外信号的转导。这些包括神经递质、气味和光信号。由于它们广泛表达于人体的各种器官和组织中,可作为治疗各种疾病的药物靶点。其中,一些G蛋白偶联受体的内源性配体尚未被鉴定出来,称为孤儿G蛋白偶联受体。它们具有多种生理功能,具有治疗不同疾病的潜力。心力衰竭是一种由心脏血液循环系统的结构和功能损害引起的全身性疾病。虽然新药物的引进和应用大大降低了心力衰竭的死亡率和再住院率,但它仍然是发病率和死亡率的一个主要原因。因此,迫切需要开发新的药物来改善心力衰竭的症状和预后。近年来,研究发现许多孤儿g蛋白偶联受体可通过不同途径参与心力衰竭的发生发展,作为心力衰竭新的治疗靶点越来越受到关注。在探索GPR22、GPR35、GPR37L1在心力衰竭中的作用时,我们发现了更有效的新药物靶点,并阐明了新的治疗策略。

GPR120的研究进展

游离脂肪酸作为组织能量来源以及介导各种细胞进程的信号分子,其生理功能长期以来受到广泛关注。外周游离脂肪酸水平的升高与肥胖、脂代谢紊乱以及糖尿病紧密相关。GPR120作为一新的长链脂肪酸受体,参与调节体内一系列的代谢过程,如激素分泌、细胞增殖及脂质生成等。作为肥胖、糖尿病的潜在治疗靶标,值得更深入的研究。